Une technique pour cultiver les neurones de l’hippocampe de souris

Prenez un hippocampe de bébé souris récolté dans une zone tampon.

Coupez l’hippocampe en petits fragments et transférez-les dans un tube conique.

Lavez le mouchoir avec un tampon. Une fois que les fragments se déposent, retirez le tampon. Maintenant, ajoutez un nouveau tampon et de la trypsine.

Pendant l’incubation, la trypsine, une enzyme protéolytique, digère la matrice extracellulaire du tissu, relâchant les neurones de l’hippocampe.

Lavez le tissu digéré avec un tampon.

Une fois que les fragments se déposent, retirez le tampon. Ajoutez un tampon frais et pipetez le tissu à plusieurs reprises pour le dissocier mécaniquement, obtenant ainsi une suspension unicellulaire.

Une fois que le tissu non digéré se dépose, transférez la suspension cellulaire sur des lamelles enrobées de poly-L-lysine avec des supports de cire à l’intérieur d’une plaque de culture contenant du milieu.

Les cellules se fixent aux surfaces recouvertes de poly-L-lysine par des interactions électrostatiques.

Maintenant, placez les lamelles adhérées aux neurones vers le bas dans une boîte contenant des cellules gliales corticales ou non neuronales dans un milieu sans sérum.

En culture, les supports de cire empêch