Génération d’une culture de neurones primaires de faible densité à partir de neurones embryonnaires congelés

Commencez avec un cryoflacon contenant des neurones embryonnaires cryoconservés et placez-le dans un bloc chauffant pour une décongélation contrôlée.

Ensuite, transférez les neurones décongelés dans un tube et diluez-les avec un milieu neurobasal goutte à goutte pour équilibrer la pression osmotique et prévenir la lyse cellulaire.

Cela génère une suspension homogène avec des neurones uniformément dispersés.

Ensemencez la suspension neurale diluée sur une plaque multi-puits enrobée de poly-L-lysine contenant un milieu neurobasal enrichi en nutriments et en antibiotiques.

Incuber pour permettre à la poly-L-lysine chargée positivement d’interagir avec les neurones via des interactions électrostatiques, facilitant ainsi leur adhésion.

Approvisionnez les puits avec des milieux neurobasaux frais.

Incuber les cellules dans le même milieu dans des conditions humides pour éviter l’évaporation du milieu.

Les neurones embryonnaires utilisent les nutriments et se développent en développant des processus neuronaux et en formant des neurones primaires.

Le milieu neurobasal maintient les neurones primaires qui apparaissent largement espacés, générant une culture primaire de faible densité avec de