Génération et différenciation de neurosphères primaires à partir de cellules souches neurales de poisson-zèbre
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:43 min • July 8th, 2025
Commencer avec une plaque multipuits contenant un milieu de croissance enrichi en facteurs de croissance.
Ensemencez une suspension unicellulaire de cellules souches neurales de poisson-zèbre et incubez.
Initialement, les cellules souches utilisent les facteurs de croissance et prolifèrent.
Retirez les débris et ajoutez le milieu frais pour favoriser la prolifération cellulaire continue et l’agrégation spontanée pour former des neurosphères primaires flottantes libres.
Ensuite, transférez les neurosphères dans un puits frais contenant le milieu de croissance.
Incuber dans les mêmes conditions pour induire une expansion progressive des neurosphères.
Pipeter à plusieurs reprises pour dissocier mécaniquement les neurosphères en petits amas.
Ensuite, transférez-les sur une matrice extracellulaire bien enrobée, facilitant ainsi leur adhérence.
Remplacez le milieu de croissance par un milieu de différenciation sans facteur de croissance contenant de l’insuline.
L’absence de facteurs de croissance et la présence d’insuline stimulent la différenciation cellulaire en cellules gliales et en neurones avec des projections neuronales.
Pour vous préparer à la génération de la neurosphère, rempli
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