Une technique de co-culture indirecte neurone-astrocyte pour étudier les interactions neurones-glie

Commencez avec une plaque multipuits contenant un insert de membrane perméable recouvert de poly-D-lysine.

Ajoutez du milieu de croissance d’astrocytes dans le puits et ensemencez des astrocytes, une cellule gliale spécialisée, dans l’insert.

Incuber pour permettre l’adhérence cellulaire sur la poly-D-lysine via des interactions électrostatiques et former une monocouche.

Remplacez le milieu astrocytaire par un milieu de culture de neurones.

Transférez cet insert dans une plaque multipuits contenant des neurones embryonnaires primaires de souris collés sur une lamelle recouverte de polymère.

Incuber pour établir une co-culture indirecte neurones-astrocytes, où les deux types de cellules sont physiquement séparés mais partagent le même milieu de culture.

Les astrocytes sécrètent divers facteurs neurotrophiques essentiels à la survie et à la croissance des neurones.

Ces facteurs migrent à travers le support perméable et interagissent avec les neurones primaires. Cela favorise leur différenciation et forme des projections neuronales.

Ces projections allongent et établissent des connexions synaptiques entre les neurones, indiquant des interactions neurones-gliales.

Enduire chaque insert