Culture d’explants de neurones du ganglion spiralé murin sur des réseaux de multiélectrodes

Commencez par un segment disséqué de l’oreille interne de souris contenant le ganglion spiralé et l’organe de Corti, des structures spécialisées de l’oreille interne.

L’organe de Corti contient des cellules ciliées qui agissent comme des récepteurs pour les signaux auditifs.

Le ganglion spiralé est constitué de corps cellulaires neuronaux qui étendent les processus d’innervement des cellules ciliées de l’organe de Corti.

Séparez le ganglion spiralé de l’organe de Corti et obtenez de petites coupes de tissus ou des explants à partir de celui-ci.

Maintenant, prenez un réseau de multiélectrodes recouvert d’une matrice extracellulaire contenant des milieux de culture.

Placez les explants sur le réseau et positionnez l’organe de Corti à l’extérieur de la zone des électrodes. Couver.

Les explants se fixent sur la surface multiélectrode revêtue.

Ajoutez régulièrement des milieux contenant des protéines sériques et des facteurs de croissance.

Pendant la culture, les composants du milieu et l’organe de Corti fournissent un soutien neurotrophique, favorisant la croissance des neurites des neurones du ganglion spiralé sur la multiélectrode.

Séparez l’organe de Corti du ganglion spiralé en modiolus en tenant la partie basale du ganglion spiralé et l’organe de Corti avec une pince, et en déroulant lentement l’organe de Corti de la base à l’apex. Ensuite, coupez les explants latéraux du ganglion spiralé à l’aide d’une pince ou de fines ciseaux ou couteaux de microdissection.

Maintenant, transférez les explants du ganglion spiralé et l’organe de Corti sur le MEA. Ensuite, placez les explants SG sur la zone de l’électrode et l’organe de Corti, à environ 5 millimètres de la zone de l’électrode. Placez les explants et l’organe de Corti sur les MEA tout en évitant d’endommager les tissus. Ensuite, placez soigneusement les AEM dans l’incubateur et cultivez-les à 37 degrés Celsius et 5 % de CO₂.

Le lendemain, inspectez visuellement les explants pour vérifier leur fixation aux AEM. Ensuite, ajoutez 100 microlitres de milieu de culture contenant 10 % de FBS et de BDNF par jour pendant cinq jours consécutifs. Le jour 6, ajoutez 2 millilitres de milieu de culture, contenant 10 % de FBS et 5 nanogrammes par millilitre de BDNF, et cultivez le tissu pendant 13 jours supplémentaires.