Élimination sélective de la microglie d’une culture de neurones granulaires cérébelleux de rat
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 5:58 min • July 8th, 2025
Prenez un cervelet de rat récolté et coupez-le en morceaux.
Transférez les fragments dans un tube contenant de la trypsine et incuberez.
La trypsine digère la matrice extracellulaire du tissu, desserrant les neurones granulaires cérébelleux, ainsi que les cellules non neuronales telles que la microglie et les astrocytes.
Ajoutez un tampon contenant un inhibiteur de la trypsine et de la DNase. L’inhibiteur inactive la trypsine tandis que la DNase dégrade l’ADN contaminant.
Centrifugez et jetez le surnageant.
Remettre le tissu en suspension dans un tampon contenant l’inhibiteur et la DNase, et le dissocier mécaniquement pour former une suspension unicellulaire.
Superposez la suspension sur une solution tampon contenant des protéines.
Centrifugez et jetez le surnageant contenant les débris cellulaires.
Remettre les cellules en suspension dans le milieu et les ensemencer sur des lamelles enrobées de poly-L-lysine pour faciliter la fixation cellulaire.
Retirez le support. Lavez les cellules avec un milieu frais, puis ajoutez un milieu contenant un inhibiteur du cycle cellulaire pour prévenir la prolifération des cellules gliales.
Remplacez la moitié du milieu par un milieu frais contena
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