Dissociation et culture de neurones à partir d’échantillons de tissu hippocampique

Commencez par des échantillons de tissu hippocampique contenant des neurones et diverses cellules non neuronales.

Ajouter une solution d’enzyme protéase. L’enzyme dégrade la matrice extracellulaire du tissu, initiant la dissociation cellulaire.

Laver avec un milieu de placage pour éliminer les enzymes résiduelles.

Pipetez le tissu digéré à plusieurs reprises pour dissocier mécaniquement les cellules du tissu, formant une suspension unicellulaire.

Centrifugez et retirez le surnageant. Remettez les cellules en suspension dans le milieu de placage.

Ensemencez les cellules sur une lamelle recouverte de poly-D-lysine dans une plaque multi-puits. La lysine améliore l’attachement cellulaire.

Remplacez le milieu de placage par un milieu de maintenance des neurones contenant des nutriments essentiels à la survie des neurones.

Rafraîchir la moitié du milieu avec un milieu d’entretien contenant de l’arabinosylcytosine ou Ara-C.

Ara-C pénètre dans les cellules et inhibe sélectivement la croissance des cellules non neuronales, entraînant leur mort.

Remplacez le milieu par un milieu d’entretien frais pour favoriser la survie des neurones.

Pour dissocier les neurones de l’hippocampe pour la cultu