Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:48 min • July 8th, 2025
Commencez par des fragments de tissu du tronc cérébral contenant un gliome pontique intrinsèque diffus, une tumeur dérivée de cellules progénitrices gliales dans un environnement riche en nerfs myélinisés.
Traiter avec des enzymes protéolytiques pour dégrader la matrice extracellulaire du tissu.
Après l’incubation, pipeter à plusieurs reprises le contenu pour faciliter la dissociation cellulaire et la dégradation de la gaine de myéline.
Filtre et centrifugeuse pour collecter les cellules. Retirez le surnageant et mettez-le en suspension dans un tampon froid.
Ajouter une solution de saccharose pour la séparation par gradient de densité et bien mélanger.
Ensuite, centrifugez pour séparer les cellules les plus lourdes des débris de myéline plus légers.
Retirez la couche de myéline et ajoutez un tampon de lyse des globules rouges.
Ajouter un tampon froid pour arrêter l’action de lyse. Centrifuger et retirer le surnageant pour éliminer les globules rouges lysés.
Remettez les cellules en suspension dans un milieu neurobasal chaud et cultivez-les dans une fiole non enrobée.
L’absence de facteurs neurotropes provoque la mort neuronale, tandis que les cellules progénitrices gliales utilisen
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