Isolement de neurones marqués par fluorescence à partir d’un cerveau murin

Prenons l’exemple d’un cortex de souris transgénique contenant des neurones exprimant des protéines fluorescentes.

Fixez-le sur un porte-échantillon.

Montez le support sur le plateau du vibratome contenant de l’aCSF oxygéné pour maintenir les conditions physiologiques des tissus.

À l’aide des paramètres définis, obtenez des coupes coronales.

Placez les tranches dans un support grillagé contenant de l’aCSF oxygéné et des bloqueurs d’activité pour les stabiliser.

Traitez les tranches avec des protéases pour digérer la matrice extracellulaire et détacher les cellules.

Laver avec un LCR pour éliminer les protéases.

Transférez les tranches dans une plaque de culture avec de l’aCSF et du sérum.

Sous un microscope à fluorescence, disséquez des régions de coupe contenant des neurones fluorescents.

Transférez les fragments disséqués dans un tube contenant du LCR et du sérum.

Dissocier mécaniquement le tissu pour former une suspension unicellulaire. Transférez les cellules dans une plaque de culture contenant du LCR.

Sous un microscope à fluorescence, utilisez une pipette capillaire pour prélever les neurones fluorescents.

Distribuez ces neurones dans une plaque de culture contenant du LCR p