Préparation d’une suspension unicellulaire de cellules immunitaires à partir de tissu cérébral murin

Commencez par un cerveau murin avec des cellules neurales, non neuronales et immunitaires dans la matrice extracellulaire ou ECM du cerveau.

Hachez le tissu et mettez-le en suspension dans un milieu de culture.

Transférez ces fragments de tissu dans un tube et traitez-les avec des enzymes collagénase et DNase-I.

La collagénase digère l’ECM, libérant des cellules individuelles, tandis que la DNase-I dégrade l’ADN libre pour empêcher l’agglutination des cellules.

Ensuite, ajoutez de l’EDTA pour inactiver les enzymes collagénase.

Ajoutez un milieu de culture. Centrifugez et retirez le surnageant.

Ajoutez une solution à gradient de densité et le milieu de culture à la pastille cellulaire, créant ainsi une couche de gradient de faible densité.

Mélangez puis sous-couche la solution avec une solution à gradient de haute densité pour établir une différence de densité.

Centrifugeuse à basse vitesse pour séparer les cellules immunitaires à l’interface, avec des débris cellulaires plus légers en haut et des cellules neuronales et gliales plus lourdes en bas.

Retirez la couche supérieure et collectez les cellules immunitaires, puis transférez-les dans un autre tube.

Centrifugez et retirez le s