Obtention d’une culture mixte de cellules gliales à partir d’un cerveau de souris néonatale
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:26 min • July 8th, 2025
Commencez par un cerveau de souris nouveau-née et transférez-le dans un tube contenant une solution d’enzyme protéolytique.
Les enzymes dégradent la matrice extracellulaire du tissu et initient la dissociation cellulaire.
Lavez à plusieurs reprises le tissu digéré avec un milieu de croissance pour éliminer les enzymes.
À l’aide d’une pipette de plus grand diamètre, déplacez le tissu à plusieurs reprises dans la pipette afin de le dissocier en fragments plus petits.
Ensuite, à l’aide d’une pipette de plus petit diamètre, continuez à dissocier les fragments, créant une suspension cellulaire.
Filtrez cette suspension pour éliminer les amas cellulaires et obtenir une suspension unicellulaire contenant des neurones primaires et une population mixte de cellules gliales, y compris des microglies et des astrocytes.
Ensemencez les cellules dans un ballon de culture contenant un milieu de croissance et incubez pour favoriser leur adhérence.
Au fil du temps, l’absence de facteurs de croissance neuronale dans le milieu provoque la mort neuronale.
Remplacez le support usagé par un support frais. Les cellules gliales utilisent les nutriments et prolifèrent, générant une culture gliale mixte d’as
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