Etablissement d’une culture de cellules gliales de Müller obtenue à partir de rétines de souris

Prenez les rétines de souris contenant des cellules gliales de Müller, ou MG, et des neurones.

Placez-les dans une solution de dissociation avec des enzymes digestives et incubez avec un léger balancement pour assurer une distribution uniforme des enzymes.

Ces enzymes décomposent la matrice extracellulaire, détachant les cellules individuelles.

Pipetez les rétines de haut en bas plusieurs fois pour libérer les cellules.

Ajoutez un inhibiteur pour arrêter l’activité enzymatique, puis centrifugez.

Jetez le surnageant.

Remettre les cellules en suspension dans un milieu contenant un facteur de croissance spécifique aux cellules MG.

Transférez les cellules dans un puits et incuberez.

Au fil du temps, le facteur de croissance dans le milieu facilite la croissance et la multiplication des cellules MG tandis que les cellules neuronales non divisées périssent.

Retirez le support. Laver avec un tampon à sel.

Incuber avec une enzyme digestive pour détacher les cellules du puits.

Collectez les cellules dans un tube, puis centrifugez-les.

Jetez le surnageant contenant les cellules neuronales mortes.

Remettre les cellules MG en suspension dans le milieu pour une analyse plus approfondie.

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