Isolement et culture de neurones dopaminergiques du mésencéphale embryonnaire primaire de souris
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:04 min • July 8th, 2025
Prenez du tissu du plancher du mésencéphale isolé de la région ventrale du mésencéphale d’embryons de souris.
Le tissu est riche en neurones dopaminergiques en développement, qui libèrent le neurotransmetteur dopamine.
Ajoutez une solution enzymatique pour décomposer la matrice tissulaire, détachant ainsi les cellules.
Ajouter une solution sérique contenant de la DNase I et dissocier mécaniquement le tissu digéré pour générer une suspension cellulaire. Les protéines sériques inhibent les enzymes, tandis que la DNase I dégrade l’ADN extracellulaire libéré lors de la lyse cellulaire, empêchant ainsi l’agglutination des cellules.
Laissez les débris de tissu se déposer et transférez les cellules en suspension dans un tube frais.
Centrifugez et retirez le surnageant, puis remettez les cellules en suspension dans un milieu neuronal dopaminergique, ou DPM.
Prenez une microplaque recouverte d’un substrat de culture cellulaire au centre des puits, créant ainsi des micro-îles.
Transférez les cellules au milieu des micro-îlots pour les cultiver à une forte densité.
Incuber, permettant aux cellules d’adhérer aux micro-îles.
Remplissez les puits de DPM et incubez, facilitant la croissance des n
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