Analyse de l’activité neuronale dans les neurones ganglionnaires spiralés murins primaires à l’aide de réseaux de multiélectrodes

Commencez par une culture de neurones ganglionnaires spiralés sur un réseau de multiélectrodes, ou MEA.

Le MEA consiste en des électrodes d’enregistrement reliées à des contacts via un circuit.

Lavez le MEA pour retirer le support et séchez les contacts pour éviter le bruit induit par l’humidité pendant l’enregistrement.

Montez le MEA sur son support et installez-le dans la configuration d’enregistrement.

Les contacts MEA s’alignent avec les connecteurs du support qui transmettent les signaux électriques à la configuration d’enregistrement.

Ajoutez une solution imitant l’environnement extracellulaire, permettant une activité physiologique normale dans les neurones.

Lancez l’enregistrement. Les électrodes détectent des signaux spontanés ou des potentiels d’action générés par les neurones, visualisés sous forme de pointes sur l’interface logicielle.

Maintenant, appliquez une impulsion électrique à une électrode présentant une activité spontanée.

L’impulsion génère un champ électrique, stimulant les neurones des électrodes voisines.

Enregistrez l’activité dépendante de la stimulation.

Enfin, ajoutez une neurotoxine qui bloque les canaux ioniques voltage-dépendants, empêchant ainsi la génération de potentiel d’action.

Enregistrez le signal pour identifier le bruit de fond.

Après une culture collective de 18 jours, laver la culture MEA avec la solution extracellulaire préparée plus tôt à température ambiante. Ensuite, séchez les contacts de la puce MEA avec un morceau de tissu et montez les MEA sur le support MEA. Enfin, installez le MEA sur la configuration d’enregistrement.

Ensuite, ajoutez 300 microlitres de la solution extracellulaire et attendez 10 minutes pour permettre au système de se stabiliser avant d’enregistrer. Maintenant, enregistrez l’activité spontanée pendant deux minutes de toutes les électrodes et identifiez les électrodes actives. Ensuite, identifiez les électrodes qui répondent à la stimulation.

Pour exclure l’artefact de stimulation, stimulez 10 fois à partir de la même électrode. Si la culture répond au moins huit fois sur 10, on peut supposer qu’il s’agit d’une réponse positive lors de la stimulation induite par les électrodes. Pour identifier le bruit de fond, appliquez du TTX sur la culture à une concentration d’une micromolaire pour bloquer les canaux sodiques voltage-dépendants, puis enregistrez pendant deux minutes.