Mise en place d’une pince de patch à cellules entières pour l’enregistrement électrophysiologique à partir d’une rétine de souris à montage plat

Placez une rétine de souris à montage plat dans une solution physiologique à l’intérieur d’une chambre d’enregistrement.

À l’aide d’un microscope, placez une pipette d’enregistrement au-dessus de la rétine. La pipette contient une électrode et est remplie d’une solution interne.

Appliquez une pression positive pour éviter l’obstruction de la pipette, insérez-la dans la rétine, puis réduisez la pression pour éviter d’endommager les tissus.

Avancez la pipette vers les cellules amacrines en étoile, ou SACs, qui sont liées synaptiquement à d’autres neurones.

Approchez-vous d’une cellule jusqu’à ce qu’une fossette se forme sur sa membrane. Relâchez la pression, permettant à la membrane d’adhérer à la pointe.

Utilisez un courant négatif pour aspirer un patch à membrane dans la pipette.

Appliquez une succion pour rompre la membrane, en établissant une continuité entre l’électrode et le cytoplasme cellulaire, une technique appelée patch-clamp à cellules entières.

Pour enregistrer les courants synaptiques, appliquez une tension pour maintenir constant le potentiel membranaire du SAC.

Les neurotransmetteurs libérés par les neurones liés synaptiquement déclenchent le flux d’ions à travers les