Contraction artère mésentérique et des études de relaxation utilisant myographie fil automatisé

Cette procédure utilise des rats sensibles au sel et résistants au sel pour comparer la réactivité des artères de résistance mésentérique sous tension de phényléphrine au calcium extracellulaire. Ceci est accompli en isolant d’abord l’arcade mésentérique des animaux et en disséquant les branches de l’artère de résistance. Prochain. Le premier des deux fils en acier inoxydable est enfilé à travers un court segment de l’artère disséquée et le récipient est monté dans la chambre graphique.

Ensuite, le deuxième fil d’acier inoxydable est enfilé à travers la lumière du récipient parallèlement au premier fil. Ensuite, le récipient monté est étiré à une circonférence interne normalisée. La dernière étape de la procédure consiste à réactiver le vaisseau en le mettant à l’épreuve avec des applications répétées de phényléphrine et en le relaxant avec des applications cumulatives de calcium.

En fin de compte, les résultats montrent des changements de tension dans le vaisseau, qui peuvent être convertis en une courbe de réponse calcique et utilisés pour déterminer les valeurs EC 50. À titre de comparaison. Nous avons eu l’idée d’utiliser cette méthode lorsque nous avons découvert que le réseau nev des batteries Masonary de rat exprimait un récepteur de sens calcique en cuivre gpro.

Cela peut être étudié de la même manière que les récepteurs AIC amers, qui sont activés par un agoniste. En général, les personnes qui ne connaissent pas cette méthode peuvent avoir des difficultés car les couches d’endothélium et de muscles lisses sont petites. Les navires sont facilement endommagés.

Si cela se produit, les propriétés mécaniques de ces récipients peuvent être compromises. Pour commencer, préparez la zone de travail et les instruments chirurgicaux. Placez un animal anesthésié sur son dos et essuyez l’abdomen avec de l’alcool.

Après avoir effectué une laparotomie de la ligne médiane, utilisez des ciseaux pour retirer environ 85 centimètres de l’intestin, y compris l’artère mésentérique supérieure. Coupez l’extrémité proximale près du pylori et l’extrémité distale près de la jonction iléo-caecale. Placez la section excisée dans une boîte de Pétri enrobée contenant une solution saline physiologique ou PSS à température ambiante.

Fixez l’extrémité proximale de l’intestin vers la droite, puis épinglez le reste de l’intestin dans le sens inverse des aiguilles d’une montre. Ensuite, disséquez un segment de l’artère mésentérique contenant les branches deux et trois et un morceau de l’intestin de l’extrémité proximale. Identifiez le point de branche en forme de V de l’artère mésentérique et disséquez-le loin de la veine.

À l’aide d’une pince, on retire doucement le tissu adipeux et conjonctif afin d’éviter tout contact direct avec l’artère. Pour commencer à monter le vaisseau, coupez deux segments d’artère d’environ deux millimètres de long. L’extrémité d’un fil d’acier inoxydable sans tungstène de quatre centimètres et 40 micromètres peut être utilisée pour ouvrir la lumière de l’artère.

Ensuite, à l’aide d’une pince fine, insérez le fil dans la lumière de chaque artère. En prenant soin de ne pas endommager l’endothélium, remplissez la chambre du myogreffon avec du PSS à 37 degrés Celsius. À l’aide d’une pince, transférez le segment de vaisseau fileté dans la chambre.

Ensuite, transférez le segment du vaisseau proximal excisé dans la chambre du myographe et tirez l’extrémité le long du fil pour l’introduire dans le vaisseau. Évitez d’étirer le récipient. Fixez l’extrémité la plus proche du fil dans le sens inverse des aiguilles d’une montre sous la vis de fixation proche sur la mâchoire droite connectée au micromètre.

Attrapez l’extrémité libre du fil à l’aide d’une pince et fixez-la dans le sens des aiguilles d’une montre sous la vis de fixation la plus éloignée sur la mâchoire droite, assurez-vous que le segment de récipient le long du fil est situé dans l’espace entre les mâchoires sans entrer en contact avec la mâchoire elle-même. Dévissez les mâchoires. Alignez le deuxième fil parallèlement au récipient et insérez-le à l’extrémité éloignée de la lumière.

Faites passer doucement le fil à travers la lumière du segment vasculaire en un seul mouvement en utilisant le fil déjà monté comme guide. Tenez le fil à environ un centimètre du vaisseau pour éviter de l’étirer pendant la manœuvre et évitez de toucher l’endothélium. Vissez les mâchoires ensemble et assurez-vous que le deuxième fil de montage se déplace sous le premier fixé dans la main droite.

Fixez l’extrémité la plus proche du deuxième fil dans le sens des aiguilles d’une montre sous la vis de fixation proche de la mâchoire gauche connectée au transducteur. Fixez l’extrémité la plus éloignée du fil sous la vis de fixation sur la mâchoire gauche et serrez pour étirer le fil. Une fois le montage terminé, prévoyez 30 minutes pour l’équilibrage à 37 degrés Celsius.

Après l’équilibrage, le moteur est réinitialisé à partir du menu de montage et la procédure de normalisation, qui étire le récipient à une circonférence interne normalisée, est lancée. Pour commencer, ouvrez le menu de normalisation et réglez la pression transmurale cible à 13,3 kilopascals. Ensuite, définissez la durée de chacune des étapes de normalisation sur 60 secondes.

Le rapport IC 1 à IC 100 doit être égal à 0,9 et l’étalonnage IP doit être réglé sur deux étoiles delta. Mesurez la longueur de l’artère mésentérique montée à l’aide des lectures de l’oculaire du microscope lorsque les lignes des cheveux sont plus éloignées et les neurones du segment vasculaire. Après normalisation, les vaisseaux sont réactivés en effectuant un démarrage standard composé d’une série de stimulations et de périodes de lavage.

Tout d’abord, remplacez le couvercle de la chambre myo et commencez l’aération avec 95 % d’air et 5 % de dioxyde de carbone. Remplissez la chambre avec du PSS frais contenant 100 micromolaires d’acide ascorbique. Contractez le récipient avec cinq micromolaires de fenouil, de rine ou de PE pendant cinq minutes et lavez-le quatre fois avec un tampon PSS Après le dernier lavage, remplissez la chambre de PSS et attendez trois minutes avant de remplir à nouveau la chambre de PSS et de la contracter avec PE.As montré précédemment, l’artère est maintenant prête pour l’expérience.

Mesurez la relaxation des vaisseaux contractés en ajoutant cumulativement des concentrations croissantes de chlorure de calcium. Ce tableau montre que les tensions basales après l’application de phényléphrine variaient entre les rats sensibles au sel de poupée ou de Wistar DS ou de poupée et les rats résistants au sel de poupée ou de DR. Cette trace d’un rat wistar montre un relâchement des artères contractées par PE par des ajouts cumulatifs de relaxation calcique avec des tissus gravement compromis chez les rats SD par rapport aux rats Wistar et par rapport aux Dr.Rats comme on le voit ici, les différences de sensibilité au calcium peuvent être observées dans les courbes de réponse calcique et à nouveau lors du calcul des valeurs EC 50.

Enfin, les rats SD montrent une réduction de l’expression du récepteur de détection du calcium dans les artères par rapport aux Dr.Rats une fois maîtrisés. Cette technique peut être réalisée en deux heures si elle est exécutée correctement. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de comparer la réactivité vasculaire de l’attri entérique du petit mémo au composé exogène dans des conditions isométriques.