Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
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Fixez une tranche de cortex hippocampique-entorhinal de souris dans une chambre d’enregistrement immergée.
ACSF oxygéné à écoulement continu à une température constante pour maintenir la viabilité des tissus.
Positionnez une pipette de stimulation remplie d’une solution électrolytique dans la couche radiale de la région CA3 de l’hippocampe, contenant des neurones qui reçoivent des informations du cortex entorhinal.
Insérez une pipette d’enregistrement remplie d’ACSF dans la couche pyramidale de la région CA1, composée de neurones qui forment des synapses avec des projections axonales à partir du CA3.
À l’aide de la pipette de stimulation, appliquez une impulsion électrique pour déclencher des potentiels d’action dans les neurones CA3 présynaptiques.
Le potentiel d’action induit la libération de neurotransmetteurs, qui se lient aux récepteurs des neurones postsynaptiques CA1. La liaison induit un afflux d’ions, entraînant une modification du potentiel membranaire.
Les changements combinés du potentiel membranaire de plusieurs neurones CA1 postsynaptiques, appelés potentiel de champ local ou LFP, sont enregistrés extracellulairement par la pipette enregistreuse.
Pour enregistrer les potentiels de champ locaux, remplissez un bécher de 400 millilitres avec de l’ACSF à bulles de carbogène et placez une extrémité du tube de la pompe dans le bécher. Allumez une pompe péristaltique à une vitesse de huit à 10 millilitres par minute pour diriger l’ACSF du bécher de 400 millilitres vers un réservoir chauffé et du réservoir vers la chambre d’enregistrement à 32 degrés Celsius.
Ensuite, clampez brièvement le tube et éteignez la pompe pour interrompre le débit. À l’aide d’une pince fine, transférez une tranche de tissu cérébral dans la chambre d’enregistrement par le coin du papier de lentille sur lequel le tissu repose, coupez en tranches. Décollez le papier de l’objectif, en laissant la tranche immergée dans la chambre d’enregistrement, et utilisez une harpe pour fixer la tranche.
À l’aide d’un micromanipulateur manuel, avancez lentement la pointe d’une pipette de stimulation remplie de chlorure de sodium dans la surface de la tranche à un angle de 30 à 45 degrés. Ensuite, à l’aide d’un deuxième micromanipulateur, faites avancer lentement la pointe d’une pipette de potentiel de champ local remplie d’ACSF dans la région d’intérêt à un angle de 30 à 45 degrés, et enregistrez le potentiel de champ local de l’échantillon conformément aux protocoles standard.