Immunomarquage par fluorescence de neurones de l’hippocampe du rat au sein d’une puce microfluidique

Prenez une puce microfluidique contenant des neurones de l’hippocampe du rat.

La puce comporte des réservoirs somatiques et axonaux, avec des compartiments divisés par des microsillons, compartimentant efficacement les neurones et isolant les régions somatiques et axonales.

Retirez le support et ajoutez du formaldéhyde. Incuber pour fixer les neurones et préserver leur structure.

Retirez l’excès de formaldéhyde et lavez avec un tampon. Ensuite, ajoutez un détergent pour perméabiliser les neurones.

Remplacez le détergent par une solution de blocage pour bloquer les sites de liaison non spécifiques.

Retirez la solution bloquante et incubez avec des anticorps primaires qui se lient à des marqueurs synaptiques neuronaux spécifiques, qui sont des protéines membranaires intégrales sur les vésicules synaptiques.

Retirez les anticorps non liés et lavez-les avec un tampon.

Incuber avec des anticorps secondaires marqués au fluorophore qui se lient aux anticorps primaires ciblant les marqueurs synaptiques.

Retirez les anticorps secondaires non liés et lavez-les avec un tampon.

Sous un microscope confocal, imagez la puce pour visualiser les marqueurs synaptiques neuronaux fluorescents.

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