Isolement des fibrilles amyloïdes à partir d’un extrait de tissu cérébral
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:38 min • July 8th, 2025
Prenez un extrait de tissu cérébral de souris contenant des protéines non amyloïdes et des fibrilles amyloïdes, un agrégat de protéines insolubles.
Ajoutez du saccharose solide et mélangez, en augmentant la densité de la solution.
Transférez-le et centrifugez-le pour séparer les protéines plus denses des débris.
Jetez le surnageant, remettez la pastille en suspension dans un tampon à plus forte concentration de saccharose, mélangez et centrifugez.
Récupérez la couche supérieure contenant quelques fibrilles amyloïdes dans un tube frais, ajoutez un tampon de lavage et mélangez.
Maintenant, jetez la couche intermédiaire et transférez la pastille enrichie en fibrilles amyloïdes dans le tube contenant la fraction de la couche supérieure pour une isolation maximale.
Centrifuger les fractions combinées et jeter le surnageant. Ajoutez un tampon de digestion et incubez pour dégrader exclusivement les protéines non amyloïdes.
Centrifugez et retirez le surnageant. Lavez la pastille pour éliminer les protéines digérées résiduelles.
Remettez la pastille en suspension dans un tampon de solubilisation à base de saccharose contenant un détergent qui solubilise les protéines non amyloïdes restantes
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques