Marquage et transplantation à médiation virale de cellules d’éminence ganglionnaire médiale pour des études in vivo
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 6:31 min • July 8th, 2025
Récoltez le tissu de l’éminence ganglionnaire médiale, contenant les progéniteurs de l’interneurone cortical, à partir d’embryons de souris génétiquement modifiés.
Ajoutez un polymère cationique et dissociez le tissu en une suspension unicellulaire.
Ajouter des vecteurs lentiviraux porteurs d’un rapporteur GFP dépendant de la recombinase Cre flanqué de sites lox. Couver.
Le polymère neutralise les charges membranaires virales et cellulaires de l’hôte, permettant la fusion virale et la libération d’ARN.
L’ARN viral est retranscrit et intégré dans le génome de l’hôte.
Centrifugez et jetez le surnageant. Absorbez l’excès de média.
Transférez les cellules sur une surface hydrophobe et chargez-les dans un dispositif d’injection.
Injectez les cellules dans le cortex d’un chiot souris anesthésié.
Laissez le chiot récupérer et grandir.
Les progéniteurs transplantés se différencient en interneurones matures dans le cortex.
Un sous-groupe de ces interneurones co-exprime la Cre recombinase et la RFP.
Dans ces interneurones, Cre excise les sites lox, retournant le gène GFP et permettant son expression.
Visualisez la co-expression RFP et GFP pour identifier les interneurones exprimant Cre.
Aprè
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