Stimulation des neurones sensoriels du ganglion de la racine dorsale à l’aide d’un agoniste du récepteur neuropeptide

Prenez une plaque multi-puits contenant des neurones sensoriels du ganglion de la racine dorsale du rat transfectés.

Les neurones du puits test présentent une expression réduite des récepteurs neuropeptidiques, tandis que les neurones du puits témoin présentent des niveaux physiologiques d’expression des récepteurs neuropeptidiques.

Remplacez le milieu par un milieu sans sérum pour fournir un environnement contrôlé pour une réponse de stimulation précise.

Ajoutez un agoniste des récepteurs neuropeptides dans les puits et mélangez. Incuber l’assiette.

Dans le puits de contrôle, l’agoniste du récepteur neuropeptide se lie aux récepteurs cibles, déclenchant une cascade de signalisation intracellulaire qui libère des neurotransmetteurs.

Cependant, dans les puits d’essai, la réduction de l’expression des récepteurs neuropeptides limite la liaison des agonistes, ce qui entraîne une diminution de la libération de neurotransmetteurs par rapport au témoin.

Après l’incubation, recueillir le milieu dans les puits et centrifuger.

Transférez le surnageant dans des tubes et utilisez un immunodosage approprié pour mesurer les niveaux de neurotransmetteurs. L’échantillon témoin présente une libération de neurotransmetteurs plus élevée que l’échantillon testé après stimulation par agoniste des neurorécepteurs.

Le jour 6, après le placage et 72 heures après la transfection de l’ARNi, changez le milieu de culture à 200 microlitres de milieu sans sérum. Après une incubation de 30 minutes, ajoutez 1 microlitre de produit chimique de stimulation et mélangez doucement par pipetage. Après l’incubation pendant la période requise, récupérez le milieu de culture dans la boîte de culture et centrifugez-le à 5 000 fois g pendant 5 minutes à 4 degrés Celsius pour éliminer toutes les impuretés en suspension. Recueillir le surnageant de la centrifugation et le diluer avec une solution saline tamponnée au phosphate si nécessaire.