Marquage d’interneurones remplis de biocytine dans des tranches d’hippocampe de rat pour visualisation

Prenez des tranches d’hippocampe de rat fixes et perméabilisées contenant des interneurones remplis de biocytine avec des peroxydases endogènes inactivées.

Ajoutez des complexes avidine-biotine (ABC) contenant de la peroxydase de raifort (HRP) et incubez, permettant à l’avidine de se lier à la biocytine.

Lavez l’ABC non lié.

Ajoutez un mélange de substrat chromogène et d’exhausteur de métal, puis incincubatez.

Introduisez du peroxyde d’hydrogène pour activer le HRP, qui oxyde le substrat pour former un précipité sombre, tandis que l’amplificateur améliore le contraste.

Transférez les tranches sur du papier filtre et retirez l’excédent de tampon. Traiter avec du tétroxyde d’osmium pour améliorer le contraste.

Placez les tranches sur une diapositive et montez-les. Déshydratez-les en augmentant les concentrations d’éthanol

.

Lavez les tranches dans de l’éthanol absolu et de l’oxyde de propylène.

Ajouter de la résine pour infiltrer les tissus.

Placez les tranches dans une planchette et chauffez pour polymériser la résine. Transférez les tranches sur une lame, placez une lamelle et solidifiez la résine.

À l’aide de la microscopie optique, visualisez les interneurones remplis de biocytine