Évaluation de l’absorption du glucose dans les motoneurones des larves de drosophile avec un métabolisme du glucose régulé à la hausse

Placez les larves de drosophile témoin et mutante dans des plats séparés contenant un tampon sans glucose.

Disséquez les larves pour en retirer les organes internes, exposant ainsi le système nerveux central ou SNC.

Le SNC comprend un cordon nerveux ventral abritant des motoneurones. Chez les larves mutantes, ces neurones présentent un métabolisme du glucose régulé à la hausse.

Les motoneurones des deux groupes expriment des capteurs de glucose intracellulaires contenant des fluorophores donneurs et accepteurs.

Placez les larves sous un microscope confocal. Lors de l’excitation, le fluorophore donneur émet une fluorescence.

Localisez les motoneurones à l’aide de cette fluorescence.

Remplacez le tampon par une solution supplémentée en glucose.

Le glucose pénètre dans les neurones, se lie aux capteurs et déclenche un changement de conformation qui rapproche les deux fluorophores.

Lors de l’excitation, l’accepteur absorbe l’énergie émise par le donneur, appelée transfert d’énergie de résonance de fluorescence ou FRET, et émet de la fluorescence.

Le signal FRET est en corrélation avec l’absorption de glucose. Une intensité de signal d’accepteur plus élevée chez les larves mutantes par