Immunomarquage de protéines membranaires neuronales dans un échantillon de tissu cérébral de souris fracturé par congélation

Prenez un échantillon de tissu cérébral de souris fracturé par congélation dans un tampon.

L’échantillon est recouvert de platine pour améliorer les détails de surface et de carbone pour la stabilité structurelle.

Transférez l’échantillon dans un flacon avec un tampon de digestion contenant du détergent.

Incuber pour faciliter la dégradation des tissus, en laissant intacts la membrane et les protéines incrustées dans l’enrobage.

Laver avec un tampon pour enlever les débris.

Ajoute une solution de blocage pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.

Introduire des anticorps primaires spécifiques à la protéine membranaire neuronale cible.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés.

Incuber avec des anticorps secondaires conjugués à l’or qui se lient aux anticorps primaires.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps en excès.

Rincez à l’eau pour éviter les artefacts provenant des résidus de sel pendant la microscopie.

Montez l’échantillon sur un microscope électronique à transmission ou une grille TEM.

Sous le MET, visualisez la protéine de membrane neuronale cible identifiée par des particules d’or, qui apparaissent sous forme de points noirs.

Pour la digestion p