Immunomarquage de neurones dans des tranches de cerveau de souris suite à une hybridation in situ par fluorescence

Prenez des tranches de cerveau de souris fixes et perméabilisées contenant des neurones, y compris des neurones cholinergiques exprimant la choline acétyltransférase.

Les coupes sont soumises à une hybridation in situ fluorescente pour détecter les ARNm cibles localisés aux axones cholinergiques, ce qui permet d’amplifier les signaux à l’aide de sondes fluorescentes, qui sont détectées par microscopie à fluorescence.

Ajouter une solution bloquante contenant des protéines et un agent d’extinction. Les protéines empêchent la liaison non spécifique et l’agent de trempe neutralise les fixateurs résiduels.

Incuber avec des anticorps primaires qui ciblent la choline acétyltransférase neuronale.

Laver avec un tampon pour éliminer les anticorps non liés.

Incuber avec des anticorps secondaires conjugués au fluorophore qui se lient aux anticorps primaires liés à la choline acétyltransférase.

Laver avec un tampon pour éliminer l’excès d’anticorps, puis rincer à l’eau distillée pour éliminer les résidus de tampon.

Montez les tranches avec un support de montage contenant une coloration nucléaire pour marquer les noyaux.

À l’aide de la microscopie à fluorescence, imagez les coupes pour visualiser les si