Induction de la formation de caillots sanguins dans le cerveau de la souris à l’aide d’un colorant photosensible

Prenons l’exemple d’une souris anesthésiée dotée d’une fenêtre crânienne avec une fine couche de crâne pour permettre une visualisation cérébrale avec un minimum d’invasivité.

À l’aide d’un microscope, identifiez une artère en fonction du flux sanguin entre les gros et les petits vaisseaux.

Injectez un colorant photosensible dans la veine de la queue qui atteint le cerveau par la circulation.

Excité le colorant avec de la lumière pour émettre de la fluorescence, permettant la surveillance du flux sanguin.

Augmentez l’intensité lumineuse pour induire la formation de caillots, connue sous le nom de photothrombose.

Le colorant absorbe la lumière de haute intensité, réagit avec l’oxygène et génère des espèces réactives de l’oxygène, qui endommagent les cellules endothéliales.

Les cellules endommagées libèrent des médiateurs qui font adhérer les plaquettes, initiant ainsi la formation de caillots. La fibrine dans le sang aide à piéger des cellules sanguines supplémentaires, créant ainsi un caillot.

Le caillot, détecté par l’accumulation de colorant qui le précède, obstrue le flux sanguin vers le cerveau.

Fermez l’incision, appliquez des antibiotiques pour prévenir l’infection et administrez des analgésiques pour réduire la douleur et permettre la récupération.

Une fois la souris installée au microscope, préparez de la rose fraîche Bengal dans du LCR artificiel à 20 milligrammes par millilitre. Filtrez, stérilisez le mélange et jetez-le une fois l’expérience terminée. Il doit toujours être utilisé frais.

Maintenant, tout en balayant la fenêtre crânienne avec un laser de 561 nanomètres, injectez 0,1 du mélange via la veine de la queue. En 5 secondes, le colorant devrait être facilement visible dans le système vasculaire crânien. Après avoir injecté suffisamment de colorant, sélectionnez un vaisseau de 40 à 80 microns pour la thrombose. Les artères peuvent être différenciées des veines, en fonction du flux des gros vaisseaux vers les plus petits, et vice versa.

Maintenant, préparez-vous à laserer le récipient sélectionné. Augmentez le temps d’arrêt à ce qui convient au système utilisé. Augmentez la puissance laser à 100 % et réglez la collection d’images à une image par seconde avec une vitesse de balayage maximale. Scannez la souris jusqu’à ce qu’un caillot d’agrafe se forme. Habituellement, cela prend environ cinq minutes. Idéalement, un seul champ de vision doit être balayé pour créer le caillot. Choisissez l’objectif en conséquence. Si aucun caillot ne se forme, essayez d’utiliser plus de colorant.

Une fois que le caillot s’est formé, retirez la souris de la zone d’imagerie et préparez-vous à terminer l’opération sous le microscope de dissection. Tout d’abord, retirez soigneusement l’anneau tout en vérifiant qu’il n’y a pas de saignement. En cas de saignement, l’expérience doit être interrompue.

Ensuite, à l’aide d’une suture 6-0, fermez l’incision. Ensuite, appliquez un antibiotique sur la ligne d’incision. Pour soulager la douleur, fournissez des injections sous-cutanées de buprenex pendant trois jours. Après avoir administré la première injection de buprénex, placez la souris dans une chambre de récupération et surveillez-la jusqu’à ce qu’elle soit ambulatoire. Ensuite, remettez-le dans sa cage d’origine, qui doit être nettoyée. L’imagerie longitudinale est détaillée dans le protocole textuel.