Modélisation de la régénération sensorielle des axones chez un rat à l’aide d’une injection de ganglion de la racine dorsale et d’une lésion par écrasement de la racine dorsale

Commençons par un rat anesthésié.

Faites une incision cutanée médiane entre les vertèbres cervicales C2 et thoraciques T2

Ensuite, incisez le long de la ligne médiane du tissu fibreux blanc et rétractez la première couche musculaire.

Disséquez le tissu membraneux mince sur la ligne médiane de la deuxième couche musculaire, puis rétractez les muscles longitudinaux striés.

Enfin, incisez la troisième couche musculaire pour exposer la colonne vertébrale.

Retirez la lame et le pédicule recouvrant les vertèbres C4 à T1 gauches pour révéler les ganglions de la racine dorsale C5 à C8 ou DRG.

Injecter une suspension virale adéno-associée recombinante dans les DRG.

Le virus code pour une protéine favorisant la croissance qui aide à la régénération axonale.

À l’aide d’une pince, écrasez les racines dorsales C5 à C8 pour couper les connexions axonales du DRG à la moelle épinière, créant ainsi une lésion axonale contrôlée.

Le modèle est prêt à étudier la régénération axonale médiée par le virus.

Commencez la chirurgie en localisant les apophyses épineuses C2 et T2 proéminentes sur la peau. Ensuite, utilisez un scalpel numéro 10 pour faire une incision cutanée entre les apophyses épineuses C2 et T2. Une fois la peau ouverte, une ligne médiane de tissu fibreux blanc devrait être visible sur la première couche du muscle, qui a une texture gélatineuse.

Faites une incision de taille similaire sur la première couche de muscle le long de la ligne médiane blanche. N’allez pas au-delà de l’apophyse épineuse T2 proéminente, car il y a un vaisseau sanguin majeur situé à proximité. Rétractez la première couche musculaire à l’aide de deux écarteurs, l’un placé rostralement et l’autre caudal.

La deuxième couche musculaire d’aspect strié devrait maintenant être visible. Localisez la ligne médiane de la deuxième couche musculaire, où l’on peut observer deux muscles longitudinaux, reliés par un mince tissu membraneux. Ensuite, utilisez une paire de micro-ciseaux pour disséquer le tissu membraneux et séparer les deux muscles longitudinaux.

Ajustez les écarteurs pour exposer la troisième couche de museau mince recouvrant la colonne vertébrale. Les apophyses épineuses peuvent être ressenties en touchant légèrement avec une paire de pinces sur la troisième couche musculaire. Utilisez des micro-ciseaux pour faire une petite incision sur la troisième couche de muscle. Et grattez doucement le muscle de l’os à l’aide d’une curette ou d’un scalpel de manière latérale pour exposer clairement les vertèbres.

Pour exposer les DRG C5 à C8 gauches, utilisez une paire de rongeurs fins pour effectuer une hémilaminectomie gauche sur les vertèbres C4 à T1 en retirant soigneusement une partie de la lame et du pédicule. Une fois qu’une quantité suffisante de DRG a été exposée pour l’injection, préparez la seringue en plaçant la seringue d’un microlitre remplie de virus équipée d’une aiguille émoussée de calibre 33 fabriquée sur mesure, sur le porte-seringue stéréotaxique. Ensuite, utilisez une aiguille biseautée de calibre 30 pour faire une petite ouverture superficielle sur chacun des DRG ciblés afin de faciliter l’insertion de l’aiguille d’injection. Ajustez doucement les coordonnées stéréotaxiques pour insérer l’aiguille de calibre 33 au centre du DRG.

Idéalement, l’aiguille doit être placée au centre même du DRG pour assurer une diffusion uniforme de la solution injectée dans tout le DRG.

Une fois l’aiguille insérée, utilisez la pompe à seringue pour injecter 1 microlitre du virus dans chaque DRG. Pendant l’injection, le DRG changera lentement de couleur si la solution virale contient un colorant coloré. N’insérez pas trop l’aiguille, car cela pourrait provoquer une fuite de liquide par la face ventrale du DRG.

En cas de fuite pendant l’injection, ajustez immédiatement la position de l’aiguille. Trois minutes après la fin de l’injection, retirez l’aiguille d’injection. Pour effectuer une blessure simultanée par écrasement de la racine dorsale C5 à C8, écrasez chaque racine trois fois pendant 10 secondes à l’aide d’une paire de pinces à pointe fine. Opposez complètement les extrémités de la pince. Une ligne blanche dans le tissu devrait apparaître au site d’écrasement.