Réalisation d’une immunohistochimie sur le tissu cérébral d’un primate non humain

Commencez par une section de cerveau de primate non humain fixée chimiquement.

Le fixateur à base d’aldéhyde réticule les protéines, préservant la structure des tissus, mais laisse des résidus d’aldéhyde réactifs.

Lavez pour enlever la couche cryoprotectrice entourant la section de tissu.

Ajouter un agent réducteur pour neutraliser les groupes aldéhydes réactifs, produisant des sous-produits de réaction.

Lavez pour éliminer ces sous-produits et l’excès d’agents réducteurs.

Appliquez une solution bloquante pour empêcher la liaison d’anticorps non spécifiques.

Ajouter des anticorps primaires ciblant une protéine exprimée sur des sites spécifiques de la membrane neuronale.

Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Ajouter des anticorps secondaires biotinylés ciblant les anticorps primaires.

Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Superposer avec des complexes avidine-biotine-peroxydase qui se lient aux anticorps secondaires.

Laver à nouveau pour éliminer les complexes non liés.

Introduisez un substrat chromogène avec du peroxyde d’hydrogène. En présence de peroxyde d’hydrogène, l’enzyme peroxydase oxyde le substrat, formant des précipités bruns.

Commencez par transférer des sections de 5