Imagerie par microscopie confocale d’arborescences dendritiques intactes et de la morphologie de la colonne vertébrale dans le cerveau d’une souris dégagée

Prenez un cerveau de souris nettoyé avec des cellules exprimant des protéines fluorescentes et des lipides supprimés pour plus de transparence pour une imagerie de structure profonde à haute résolution.

Un treillis d’hydrogel préserve les biomolécules et maintient les réseaux neuronaux.

Transférez le cerveau dans une chambre d’imagerie contenant un anneau d’agarose pour le support.

Fixez le tissu avec un adhésif et remplissez la chambre avec une solution d’adaptation de l’indice de réfraction pour minimiser la diffusion de la lumière et créer un environnement d’imagerie stable.

Placez la chambre sur une platine de microscope confocal et abaissez doucement l’objectif dans la solution pour établir une colonne de contact continue.

Utilisez l’épifluorescence pour localiser les régions d’intérêt. Ensuite, ajustez les paramètres du laser et de l’imagerie pour optimiser la qualité de l’image.

Capturez une série de piles z pour créer une représentation tridimensionnelle du tissu.

Utilisez un logiciel approprié pour analyser la morphologie cellulaire, y compris les arborescences dendritiques, leurs épines, ainsi que la distribution et la densité des neurones.

Pour construire une grande chambr