Pourquoi le rapport d'intensité de fluorescence AMPA/NMDA est-il important pour la validation de la cible ?

Le rapport d'intensité de fluorescence AMPA/NMDA sert de marqueur de la plasticité synaptique et des processus d'apprentissage et de mémoire, fournissant une mesure quantitative permettant d'évaluer les effets des composés sur la signalisation glutamatergique dans l'amygdale.

Comment l'isolement des signaux des récepteurs AMPA et NMDA soutient-il le processus de découverte ?

La visualisation indépendante de la fluorescence des récepteurs AMPA et NMDA permet une mesure précise de l'équilibre d'expression des récepteurs, ce qui est essentiel pour évaluer le mécanisme d'action des composés modulant la transmission synaptique.

Quelles mesures quantitatives de la variable dépendante permettent le criblage de composés ?

Des mesures de fluorescence semi-quantitatives de l'intensité des récepteurs AMPA et NMDA dans des régions d'intérêt définies permettent une comparaison objective des variations d'expression des récepteurs entre différentes conditions expérimentales.

Pourquoi les exigences en matière de réplication sont-elles importantes pour la collaboration transversale ?

La réplication garantit une génération de données cohérente et fiable entre les laboratoires et les équipes, ce qui est essentiel pour établir la confiance dans les résultats de validation des cibles et permettre des découvertes précliniques reproductibles.

Quelles sont les capacités d'analyse statistique requises avant de mettre en œuvre cette méthode ?

La méthode nécessite des capacités permettant de quantifier l'intensité de fluorescence, de calculer des rapports et d'effectuer des comparaisons statistiques entre groupes afin d'évaluer les changements significatifs de l'expression des récepteurs liés aux marqueurs d'apprentissage et de mémoire.

Mesure de l’expression des protéines dans le cerveau des rongeurs à l’aide de la fluorescence dans le proche infrarouge et du balayage à haute résolution

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neurosciences

0 vues • 3:03 min • May 29th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Prenez une lame de verre contenant des sections de tissu cérébral de rat immunomarquées pour les récepteurs AMPA et NMDA dans les neurones de l’amygdale.

Les

récepteurs AMPA médient l’afflux de sodium induit par le glutamate et la transmission synaptique excitatrice rapide.

En revanche, les récepteurs NMDA médient l’afflux de sodium et de calcium induit par le glutamate et les co-agonistes, facilitant la transmission synaptique excitatrice lente.

Les récepteurs sont colorés avec des anticorps primaires et détectés à l’aide d’anticorps secondaires marqués au fluorophore dans le proche infrarouge.

Placez la diapositive côté tissu vers le bas sur l’interface de balayage proche infrarouge.

Ajustez les paramètres d’imagerie et commencez l’imagerie.

Lors de l’éclairage laser, les fluorophores sur les récepteurs AMPA et NMDA émettent une fluorescence.

L’imagerie proche infrarouge minimise l’autofluorescence, améliorant ainsi la clarté du signal.

Le balayage haute résolution assure en outre une différenciation claire des signaux de fluorescence, permettant une visualisation précise des récepteurs AMPA et NMDA à proximité dans l’amygdale.

À l’aide d’un logiciel d’imagerie, calculez le rapport d’intensité de fluorescence AMPA/NMDA dans une région d’intérêt spécifique comme marqueur de l’apprentissage et de la mémoire.

Placez les lames sur l’interface de balayage proche infrarouge avec le tissu vers le bas. Imagez plusieurs diapositives à la fois à l’aide d’un outil de sélection. Imagez les diapositives en utilisant le réglage de qualité le plus élevé, avec une résolution de 21 micromètres. Avec un décalage de 0 nanomètre, importez des images dans le logiciel d’analyse d’images pour les afficher et les marquer pour l’analyse semi-quantitative des protéines.

Après avoir ouvert le logiciel d’analyse d’images, sélectionnez la zone de travail dans laquelle l’image a été numérisée. Ensuite, ouvrez l’image numérisée dans le logiciel d’analyse d’images pour afficher le balayage et ajustez les longueurs d’onde, le contraste, la luminosité et le grossissement affichés sans modifier l’image brute ou l’émission totale quantifiée.

Après avoir identifié les régions clés pour la quantification, sélectionnez l’onglet Analyse en haut de la page, puis sélectionnez Dessiner un rectangle pour dessiner un rectangle sur la zone à quantifier. Pour afficher la taille du rectangle, sélectionnez Formes en bas à gauche de l’écran. Ensuite, sélectionnez Colonnes en bas à droite. Ensuite, ajoutez les colonnes Hauteur et Largeur pour identifier la taille de la forme. Enfin, nommez la forme et répétez. Une fois toutes les régions échantillonnées, procédez à la combinaison et à l’analyse des données disponibles dans l’onglet Colonnes.