Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 3:18 min • June 17th, 2025
Placez une lamelle contenant du tissu rétinien de souris monté sur membrane sous un microscope à deux photons.
Le tissu exprime un biocapteur de calcium basé sur FRET dans les photorécepteurs coniques.
À l’aide d’un objectif d’immersion dans l’eau, concentrez-vous sur le tissu.
Sous l’éclairage de fond, les terminaisons axonales coniques restent dépolarisées, ce qui permet l’afflux de calcium.
La liaison intracellulaire du calcium modifie la conformation du biocapteur, rapprochant les fluorophores donneur et accepteur.
Commencez l’imagerie à deux photons.
Le laser du microscope focalise une lumière proche infrarouge de faible énergie dans le tissu.
Au point focal du laser, deux photons excitent simultanément le biocapteur, déclenchant un transfert d’énergie du donneur à l’accepteur.
Cela augmente la fluorescence de l’accepteur tout en diminuant la fluorescence du donneur.
Calculez le rapport de fluorescence.
Ensuite, délivrez une stimulation lumineuse pour hyperpolariser les cônes, réduisant ainsi les niveaux de calcium intracellulaire.
Cela inverse la conformation du biocapteur, inhibant le transfert d’énergie du donneur à l’accepteur et abaissant le rapport de fluorescence.
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