Injection stéréotaxique de vecteurs viraux pour la reprogrammation des cellules gliales dans un modèle murin

Fixez une souris transgénique anesthésiée dans un cadre stéréotaxique avec son crâne exposé.

Cette souris exprime la Cre recombinase dans les cellules gliales.

Positionnez le bras stéréotaxique qui maintient le tube capillaire sur le crâne et alignez-le au-dessus du bregma.

Ajustez les axes stéréotaxiques pour un ciblage précis.

Percez un trou sur le site cible, en vous assurant que la dure-mère reste intacte. Retirez les fragments d’os.

Rincer le tube capillaire avec un tampon. Aspirez une bulle d’air, puis chargez le virus adéno-associé portant des gènes de reprogrammation neuronale inactive et de protéine fluorescente.

Abaissez le tube capillaire à la profondeur cible et injectez la solution virale dans la région riche en cellules gliales.

Rétractez soigneusement le tube pour éviter le reflux.

Fermez l’incision et permettez la récupération.

Les virus internalisés délivrent des gènes inactivés flanqués de loxP au noyau glial. La cre recombinase les inverse, activant les gènes de reprogrammation neuronale et conduisant à la conversion neuronale. Les interneurones reprogrammés expriment la protéine fluorescente sous le promoteur spécifique du neurone.

Pour injecter des facteurs de reprogram