Name: Expansion du sang périphérique humain cellules T γδ utilisant zolédronate (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 8 s
Description: Découvrez l'expansion des cellules T γδ du sang périphérique humain utilisant le zolédronate et l'IL-2 pour l'immunothérapie cellulaire anticancéreuse. Cette méthode clinique permet une prolifération efficace en 14 jours.

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1. Isolation des PBMC <ol><li> Prélever le sang (7,5 à 8,0 ml) dans un tube BD Vacutainer CPT Préparation des cellules avec de l'héparine de sodium. Le tube contient un anticoagulant héparine sodique et d'un fluide de densité Ficoll-Hypaque, plus une barrière de gel de polyester, qui sépare les deux liquides. Centrifuger le tube / échantillon de sang à température ambiante (18 ° C à 25 ° C) dans un rotor horizontal (swing-out tête) pendant 20 min à 1800 x g. Commutateur centrifugeuse freins hors tension. </li><li> Après centrifugation, la séquence de couches se produit comme suit (vu de haut en bas): un plasma) - b) les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) et plaquettes - c) la solution de densité - gel de polyester d) - e) les granulocytes - f) globules rouges (fig. 1). </li><li> Recueillir une fraction de la couche de plasma, en laissant 5 à 10 mm de plasma au-dessus de l'interphase sans déranger la couche de cellules. Le plasma peut être utilisé pour la culture (article 2.5). </li><li> Récolte de la fraction enrichie (PBMC) à l'interphase avec une pipette et transférer dans un tube de 15 ml conique. </li><li> Laver les PBMC avec 10 ml de tampon phosphate salin (PBS), en inversant le tube 5 fois, puis centrifuger 5 min à 400 x g. </li><li> Répétez les étapes de lavage à deux reprises, puis remise en suspension le culot cellulaire dans 5 ml de PBS. Déterminer le nombre de cellules. Habituellement 1,3 x10 6 cellules sont récupérées à partir de 1 ml de sang total. </li><li> Déterminer la fréquence et le phénotype des cellules γδ T PBMC par cytométrie en flux (section 3) (Fig. 2). </li></ol> 2. L'expansion des cellules T γδ <ol><li> Centrifugeuse suspensions cellulaires dans 15 ml tubes coniques pendant 5 min à 400 x g à température ambiante, et jeter le surnageant. </li><li> Préparer un milieu de culture (CM) en ajoutant l'IL-2 humaine (IL-2) et le zolédronate (Zometa) à des concentrations finales de 1000 UI / ml et 5 uM, respectivement. ALyS203 (Cell Science &amp; Technology Institute) ou OpTmizer (Invitrogen) des médias de soutenir l'expansion des cellules T bonnes γδ (plus d'informations dans les références 6 et 9). Zometa est fourni sous forme liquide (4 flacon mg/5-ml). Pour préparer une solution à 5 uM, ajouter 50 ul de Zometa à 30 ml de milieu de culture. </li><li> Resuspendre le culot cellulaire dans un milieu de culture et de s'adapter à 1x10 6 cellules / ml. </li><li> Pipeter 1 ml de CM contenant 1x10 6 cellules dans chaque puits d'une plaque de 24 puits. Pour les grandes cultures, les cellules peuvent être ensemencées à 0,5 x 10 6 cellules / cm 2 selon la surface du puits de la plaque, plat, ou le flacon. </li><li> Ajouter plasma autologue (section 1.3), regroupés AB humain sérums ou FCS pour qu'il se trouve à environ 10% du volume de la culture (100 pi pour chaque puits d'une plaque de 24 puits). Placer les plaques dans un 37 humidifié ° C, 5% de CO 2 incubateur de 24-48 heures. </li><li> Maintenir la culture à une densité cellulaire de 0,5-2 x 10 6 cellules / ml. Ajouter un milieu frais contenant l'IL-2 humaine (1000 UI / ml) seule (sans Zometa) tous les 2-3 jours, et le transfert des cellules cultivées dans des puits nouveaux ou flacons que nécessaire, selon le degré de prolifération cellulaire (Fig. 3). Plasmatique d'alimentation ou de sérum dans le milieu de sorte que la concentration sérique peut être maintenu au moins 1%. </li><li> Récolte des cellules le jour 12-14 et déterminer la fréquence, le phénotype et les fonctions des cellules T γδ par cytométrie en flux (voir ci-dessous). </li></ol> 3. L'analyse phénotypique par cytométrie en flux <ol><li> Transfert de 200 échantillons ul contenant 2 x 10 5 cellules pour le tri de cellules activées par fluorescence (FACS) tubes. </li><li> Ajouter 2 ml de PBS froid et centrifuger 5 min à 400 x g. Ensuite, remettre en suspension les boulettes dans 50 ul de tampon FACS (PBS + 1% de FCS azoture de sodium + 0,1%). Ajouter 5 ul de chaque anticorps pour les échantillons (les anticorps monoclonaux sont énumérés dans le tableau 1). </li><li> Incuber sur de la glace dans l'obscurité pendant 20 min. </li><li> Ajouter 2 ml de tampon FACS à chaque échantillon, puis de vortex. Centrifuger les échantillons pendant 5 min à 400 x g à 4 ° C. Décanter avec précaution le surnageant. </li><li> Resuspendre les cellules dans 300 ul de tampon FACS et les vortex. Analyser des échantillons sur un cytomètre en flux (Fig. 2). </li></ol> 4. IFN-γ test de production 10 <ol><li> Le jour avant le dosage, préparer des cellules stimulatrices en cultivant 3-5 cellules Daudi x10 5 / ml dans du milieu RPMI 1640 plus 10% de FCS (RPMI-10) pendant la nuit avec Zometa (5 uM) (ci-après désignée Z-Daudi). </li><li> Recueillir Z-Daudi et remettre en suspension dans du RPMI-10 à 2x10 6 cellules / ml. Ajouter 100 ul de Z-Daudi (2x10 5) à chaque puits d'une plaque à fond rond de 96 puits. </li><li> Préparer les cellules T γδ au 2x10 6 cellules / ml dans du RPMI-10 contenant Bréfeldine A à 20 pg / ml. Transférer 100 ul de suspension cellulaire T γδ (2x10 5) à chaque puits contenant les cellules Daudi-Z ou de contrôler des puits (100 pl de RPMI-10 seulement, ou RPMI-10 avec 20 ng / ml de phorbol 12-myristate 13-acétate[PMA] et 2 pg / ml d'ionomycine). </li><li> Mélanger à la pipette et à plusieurs reprises. Incuber pendant 4 heures dans un 37 ° C, 5% de CO 2 incubateur. </li><li> Centrifuger la plaque pendant 5 min à 400 x g à 4 ° C et remettre les boulettes dans 200 ul de PBS froid. </li><li> Transférer les échantillons dans des tubes FACS. Ajouter 4 ml de PBS froid et centrifuger les tubes pendant 5 min à 400 x g à 4 ° C. </li><li> Resuspendre les culots dans 50 ul de tampon FACS avec FITC conjugué anti-TCRVγ9 (5 pi) et de PE/Cy5-conjugated anti-CD3 mAb (2,5 pi). Incuber abri de la lumière pendant 15 min à température ambiante. </li><li> Ajouter 100 ul de réactif IntraPrep 1 et incuber pendant 15 min à température ambiante. Ajouter 4 ml de PBS dans chaque tube et centrifuger 5 min à 400 x g à température ambiante. </li><li> Retirer le surnageant par aspiration et ajouter 100 l de réactif 2 IntraPrep. Incuber pendant 5 min à température ambiante sans agitation. </li><li> Ajouter 5 ul de PE-conjugué anti-IFN-γ mAb le tube à essai. Incuber abri de la lumière pendant 15 min à température ambiante. </li><li> Ajouter 4 ml de PBS dans chaque tube et centrifuger 5 min à 400 x g à température ambiante. Retirer le surnageant par aspiration et resuspendre le culot cellulaire dans 0,5 ml de tampon FACS. </li><li> Analyser les cellules par cytométrie en flux. Porte sur le CD3 + + TCRVγ9 cellules et d'examiner l'expression d'IFN-γ (Fig. 4). </li></ol> 5. Les résultats représentatifs: Il est important de déterminer le pourcentage de cellules T γδ dans PBMC à l'initiation de la culture. Comme le montre la Fig. 2 A, le pourcentage de cellules CD3 + + TCRVγ9 γδ lymphocytes T dans les PBMC a été de 1,6% au jour 0. Les populations dominantes étaient CD27 + CD45RA + CD27 + naïfs ou CD45RA - phénotypes mémoire centrale. Lorsque les cellules T γδ ont été stimulés efficacement, ils ont formé des grappes sur les jours 3-5 (Fig. 3 A et B). Lorsque la formation de grappes a été retardée, la croissance des autres types cellulaires, comme les cellules CD4 + ou CD8 + αβ des cellules T ou des cellules NK pourrait dominer la croissance des cellules T γδ (Fig. 3 C et D). Après 14 jours de culture, de la fréquence des cellules T γδ augmenté à plus de 93,8% des cellules cultivées dans des cultures de cellules γδ réussie T (fig. 2 E). La culture des cellules T γδ surexprimés NKG2D et expression de CD69 (fig. 2 G et H). Ils s'affichent CD27 - CD45RA - phénotype mémoire effecteurs (Fig. 2 F). Les fonctions des cellules T γδ ont été évalués à l'égard de la production de cytokines et la cytotoxicité. L'IFN-γ intracellulaire coloration démontré que les cellules T γδ IFN-γ produit en réponse au PMA / ionomycine traitement ou Z-Daudi cellules qui IPP ​​accumulés après le traitement zolédronate (fig. 4). Ces résultats indiquent que le zolédronate peut efficacement stimuler et de développer des cellules T γδ fonctionnelle. <table border="1"><tbody><tr><td> Tube </td><td> FITC </td><td> PE </td><td> DPE </td><td> PE/Cy5 </td></tr><tr><td> 1 </td><td> CD3 </td><td> CD19 </td><td> CD45 </td><td> CD14 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> CD3 </td><td> TCRap </td><td> CD4 </td><td> CD8 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> CD3 </td><td></td><td></td><td> CD56 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> TCR Vy9 </td><td> TCRap </td><td> CD45 </td><td> CD3 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> TCR Vy9 </td><td> NKG2D </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td> TCR Vy9 </td><td> CD69 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> TCR Vy9 </td><td> IgG1 de souris </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td> TCR Vy9 </td><td></td><td> CD45RA </td><td> CD27 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> TCR Vy9 </td><td></td><td> IgG1 de souris </td><td> IgG1 de souris </td></tr></tbody></table> Tableau 1. Les anticorps monoclonaux utilisés dans la coloration des cellules T multicolores γδ. Un exemple de l'analyse phénotypique des cellules T γδ effectué dans notre laboratoire est montré dans la Fig. 2. <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig1.jpg" alt="Figure 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Séparation des PBMC. Sang (7,5 à 8,0 ml) est tiré dans un tube BD Vacutainer CPT Préparation des cellules avec de l'héparine de sodium et directement centrifugé pendant 20 min à 1800 x g. Après centrifugation, les couches résultant comme on le voit du haut vers le boTTOM: un écran plasma) - b) PBMC et plaquettes - solution de densité c) - gel de polyester d) - e) Granulocytes - f) Les globules rouges. <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig2.jpg" alt="Figure 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Phénotype de surface typiques des cellules T γδ. PBMC ont été stimulées avec le zolédronate et IL-2 pendant 14 jours. Les cellules ont été colorés avec marqué FITC anti-TCR Vy9 et PE/Cy5-labeled anti-CD3 pour surveiller l'expansion des cellules T γδ (A et E). Les cellules T γδ ont été identifiés par leur expression de TCRVγ9, et leur expression de CD27 et CD45RA (B et F), NKG2D (C et G), ou CD69 (D et H) a été examiné. <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig3.jpg" alt="Figure 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. Représentant γδ cultures de cellules T. PBMC ont été stimulées par l'IL-2 (1000 UI / ml) et le zolédronate (5 um). Champs représentatifs sont présentés (IX71 microscope inversé [Olympus] x 200). Les clusters et les agrégats de cellules T γδ peuvent être observés au jour 3 (A) et le jour 5 (B), lorsque les cellules T γδ ont été développé avec succès. En revanche, aucun amas ou d'agrégats ont été observés lorsque la croissance des cellules T γδ n'était pas adéquate (C et D). <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig4.jpg" alt="Figure 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 4"> Figure 4. IFN-γ production. Les cellules T γδ ont été incubées avec du RPMI-10 seulement (A) ou PMA / ionomycine (B) ou Z-Daudi (C) pendant 4 heures. Tout d'abord, l'expression de surface de TCRVγ9 était tachée et ensuite de l'IFN-γ de production a été examiné par l'IFN-γ intracellulaire coloration. <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig5.jpg" alt="Figure 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 5"> Figure 5. Cinétique de la culture de cellules γδ T. (A) Le nombre absolu de cellules cultivées, (B) le pourcentage de cellules T γδ, et (C) le nombre absolu de lymphocytes T γδ dans les points de temps indiqués.

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Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

La méthode présentée ici permet l&#39;expansion efficace des cellules T γδ partir des PBMC. γδ cellules T activées et élargies par le zolédronate et IL-2 développent complète des fonctions effectrices, reflétée par la production de cytokines et la cytotoxicité. Il a été rapporté que le pyrophosphate bromhydrine synthétiques phosphoantigènes (BrHPP) et le 2-méthyl-3-butényle-1-pyrophosphate (2M3B1PP) élargira également les cellules T γδ, mais ils ne sont pas disponibles dans le commerce. En revanche, le zolédronate est d...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires (optionnel) </th></tr><tr><td> ZOMETA </td><td> Novartis Pharma K. K </td><td></td><td> zolédronate </td></tr><tr><td> PROLEUKIN </td><td> Novartis Pharmaceuticals </td><td></td><td> IL-2 humaine recombinante </td></tr><tr><td> BD Vacutainer CPT Tube Préparation des cellules avec de l&#39;héparine de sodium </td><td> BD </td><td> 362753 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 21870-076 </td><td></td></tr><tr><td> ALyS203 moyennes </td><td> Cellule Science &amp; Technology Institute </td><td> 0301-7 </td><td></td></tr><tr><td> OpTmizer </td><td> Invitrogen </td><td> 0080022SA </td><td></td></tr><tr><td> Un bréfeldine </td><td> Sigma </td><td> B5936-200UL </td><td></td></tr><tr><td> phorbol 12-myristate 13-acétate (PMA) </td><td> Sigma </td><td> P1585-1MG </td><td></td></tr><tr><td> ionomycine </td><td> Sigma </td><td> 13909-1ML </td><td></td></tr><tr><td> IntraPrep </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07803 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD3-FITC ou PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07746 FITC A07749 PE/Cy5 </td><td></td></tr><tr><td> anti-CD4 humain DPE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6604727 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD8-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6607011 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD14-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07765 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD19-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07769 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD45-ECD </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07784 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD56-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07789 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain TCRap-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A39499 </td><td></td></tr><tr><td> TCR anti-humaine-FITC Vy9 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM1463 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD27-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6607107 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD45RA-DPE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM2711 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain CD69-PE </td><td> BD </td><td> 555531 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humain NKG2D-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A08934 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-humal IFN-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM2717U </td><td></td></tr><tr><td> Souris IgG1 isotype contrôle-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07796 </td><td></td></tr><tr><td> Souris IgG1 isotype contrôle-ECD ou PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07797 A07798 </td><td></td></tr></tbody></table>

expansion du sang périphérique humain cellules t γδ utilisant zolédronate

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

L&#39;homme des cellules T γδ peuvent reconnaître et répondre à une grande variété de stress induit par les antigènes, développant ainsi une large activité innée anti-tumorale et anti-infectieux. 1 La majorité des cellules T γδ dans le sang périphérique ont le récepteur des cellules T Vγ9Vδ2. Ces cellules reconnaissent un antigène dans un complexe d&#39;histocompatibilité majeure manière indépendante et de développer de solides cytolytique et Th1-like fonctions effectrices. 1 Par conséquent, γδ lymphocytes T sont des cellules effectrices candidat intéressant pour l&#39;immunothérapie du cancer. Vγ9Vδ2 cellules T de répondre à phosphoantigènes tel que (E)-4-hydroxy-3-méthyl-but-2-ényle pyrophosphate (HMBPP), ce qui est synthétisée dans la bactérie via la biosynthèse des isoprénoïdes; 2 et isopentényl pyrophosphate (IPP), qui est produite dans les cellules eucaryotes par la voie du mévalonate. 3 Dans l&#39;état physiologique, la génération des IPP dans la cellule non transformée n&#39;est pas suffisant pour l&#39;activation des cellules T γδ. Le dérèglement de voie du mévalonate dans les cellules tumorales conduit à l&#39;accumulation des IPP et γδ lymphocytes T d&#39;activation. 3 Parce aminobisphosphonates (comme le pamidronate ou zolédronate) inhibent farnésyl pyrophosphate synthase (FPPS), l&#39;enzyme agissant en aval de la PIP dans la voie du mévalonate, les taux intracellulaires de IPP et sensitibity aux cellules T γδ reconnaissance peut être thérapeutique augmenté de aminobisphosphonates. IPP accumulation est moins efficace dans les cellules nontransfomred que des cellules tumorales avec une concentration pharmacologiquement pertinentes de aminobisphosphonates, qui nous permettent d&#39;immunothérapie pour le cancer en activant les cellules T γδ avec aminobisphosphonates 4. Fait intéressant, IPP s&#39;accumule dans les monocytes lors PBMC sont traitées avec aminobisphosphonates, en raison de l&#39;efficacité l&#39;absorption des médicaments par ces cellules. 5 monocytes qui s&#39;accumulent IPP deviennent cellules présentatrices d&#39;antigène et stimuler Vγ9Vδ2 cellules T dans le sang périphérique. 6 Basé sur ces mécanismes, nous avons développé une technique à grande échelle l&#39;expansion des cultures de cellules T γδ utilisant zolédronate et l&#39;interleukine -2 (IL-2). 7 D&#39;autres méthodes pour l&#39;expansion des cellules T γδ utiliser le pyrophosphate bromhydrine synthétiques phosphoantigènes (BrHPP) 8 ou 2-méthyl-3-butényle-1-pyrophosphate (2M3B1PP) 9. Toutes ces méthodes permettent ex l&#39;expansion in vivo, ce qui entraîne un grand nombre de cellules T γδ pour une utilisation en immunothérapie adoptive. Toutefois, seul le zolédronate est un réactif approuvé par la FDA disponible commercialement. Zolédronate-élargi γδ lymphocytes T CD27 écran - CD45RA - phénotype mémoire effecteurs et leur fonction peut être évaluée par l&#39;IFN-γ test de production 7.

Une méthode pour développer des cellules T γδ à partir des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) est décrite. PBMC dérivés des lymphocytes T γδ sont stimulés et étendu en utilisant le zolédronate et l&#39;interleukine-2 (IL-2). L&#39;expansion à grande échelle de cellules T γδ peuvent être appliquées à l&#39;immunothérapie cellulaire autologue de cancer.

Expansion du sang périphérique humain cellules T γδ utilisant zolédronate

Les lymphocytes T $\gamma\delta$ humains peuvent reconnaître et répondre à une grande variété d'antigènes induits par le stress, développant ainsi une réponse antitumorale innée large et...

Ce vidéo montre l'expansion à grande échelle de cellules T gamma delta provenant du sang périphérique humain à l'aide de zolédronate. Tout d'abord, le sang total est soumis à une centrifugation en gradient de densité afin d'isoler les cellules mononucléées du sang périphérique, ou PBMC. Les PBMC sont stimulés par le zolédronate, ce qui induit la transformation des monocytes en cellules présentatrices d'antigènes, ainsi que par l'IL-2 afin de stimuler les cellules T gamma delta.Les cellules sont incubées jusqu'à 14 jours afin de favoriser la prolifération des lymphocytes T gamma delta. L'analyse de la culture par cytométrie en flux montre que la majorité des cellules récoltées présentent un phénotype CD trois positif V gamma neuf positif. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes est qu'elle est déjà autorisée pour des applications cliniques avec Zometa.Par conséquent, un réactif fiable est facilement disponible pour la préparation clinique de lymphocytes T gamma delta, ce qui montre que la procédure sera une culture cellulaire makoto condo et amichi izumi. Les techniciens de mon laboratoire commencent cette procédure en isolant les cellules mononu

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Expansion ex vivo des cellules tumorales T-réactive par le moyen de 1/Ionomycin Bryostatine et la chaîne gamma commune cytokines Formulation

Nous décrivons ici une méthode pour développer efficacement et de purifier de grands nombres de cellules NK humaines et d'évaluer leur fonction.

Expansion, purification et d&#39;évaluation fonctionnelle des cellules NK humaines périphérique Sang

Ce protocole décrit le développement d’un in vitro humain modèle préclinique d’osteoclastogenesis de monocytes du sang périphérique, cultivées avec des lignées de cellules cancéreuses du sein pour imiter l’interaction cellule-ostéoclastes de cancer. Le modèle pourrait être utilisé pour approfondir nos connaissances de la formation de métastases osseuse et améliorer les options thérapeutiques.

Développement d’un humain modèle préclinique de Osteoclastogenesis de Monocytes du sang périphérique conjointement mis en culture avec des lignées cellulaires de Cancer du sein

Ici, nous présentons un protocole pour induire et marquer la maladie dans un modèle xnogeneic de greffe-contre-hôte de la maladie (xenoGVHD). xenoGVHD fournit un modèle in vivo pour étudier l'immunosuppression des lymphocytes T humains. En outre, nous décrivons comment détecter les lymphocytes T humains dans les tissus avec PCR numérique comme outil pour quantifier l'immunosuppression.

Induction et notation de la maladie de graft-Versus-Host dans un modèle xénogéné de murine et quantification des cellules t humaines dans des tissus de souris utilisant PCR numérique

Nous décrivons une cellule mononucléaire périphérique humaine de sang (PBMC) — modèle humanisé basé de souris de xénogreffe pour la recherche translationnelle d'immuno-oncologie. Ce protocole pourrait servir de ligne directrice générale pour établir et caractériser des modèles similaires pour l'évaluation de la thérapie I-O.

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research (A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research (A-O)

La maladie de greffe-contre-hôte est une complication principale après la transplantation allogeneic de moelle. Les cellules dendritiques jouent un rôle critique dans la pathogénie de la maladie de greffe-contre-hôte. L’article actuel décrit une nouvelle plate-forme de transplantation de moelle osseuse pour étudier le rôle des cellules dendritiques dans le développement de la maladie de greffe-contre-hôte et de l’effet de greffe-contre-leucémie.

Plate-forme de transplantation de moelle osseuse pour étudier le rôle des cellules dendritiques dans la maladie de greffe-contre-hôte

Présenté est un protocole pour l’expansion du produit médicamenteux Gamma-Delta (γδ) T cell. Les lymphocytes sont isolés par élutriation et enrichis en γδ en acide zolédronique et en interleukine-2. Les lymphocytes T alpha-bêta sont épuisés à l’aide d’un dispositif de séparation magnétique de qualité clinique. Les cellules γδ sont co-cultivées avec des cellules productrices d’antigènes artificiels dérivées de K562 et expansées.

Expansion et enrichissement des lymphocytes T gamma-delta (γδ) à partir d’un produit humain aphéré

Les ostéoclastes sont des cellules clés qui résorbent les os dans le corps. Ce protocole décrit une méthode fiable pour la différenciation in vitro des ostéoclastes des monocytes du sang périphérique humain. Cette méthode peut être utilisée comme un outil important pour mieux comprendre la biologie des ostéoclastes dans l’homéostasie et dans les maladies.

Différenciation des ostéoclastes fonctionnels des monocytes CD14+ du sang périphérique humain

Ici, nous avons établi in vivo des ostéo-organoïdes déclenchés par des échafaudages de gélatine chargés de protéine 2 morphogénétique osseuse pour récolter des cellules souches/progénitrices hématopoïétiques thérapeutiques pour la reconstruction d’un système hématopoïétique et immunitaire endommagé. Dans l’ensemble, cette approche peut fournir une source cellulaire prometteuse pour les thérapies cellulaires.

Approche ostéo-organoïde in vivo pour la récolte de cellules souches/progénitrices hématopoïétiques thérapeutiques

Nous décrivons ici une méthode pour l'activation et l'expansion des cellules NKT de gros populations de cellules T en utilisant des cellules présentant l'antigène artificielles (VAMP). L'utilisation de CD1d basée aAPC offre une méthode normalisée pour générer des nombres élevés de cellules NKT fonctionnelles.

Présentatrice d&#39;antigène artificielle d&#39;activation à médiation cellulaire (AAPC) et l&#39;expansion des cellules T tueuses naturelles

Découvrez l'expansion des cellules T γδ du sang périphérique humain utilisant le zolédronate et l'IL-2 pour l'immunothérapie cellulaire anticancéreuse. Cette méthode clinique permet une prolifération efficace en 14 jours.

Expansion du sang périphérique humain cellules T γδ utilisant zolédronate

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