L'énucléation des yeux de souris à distance pour le phénotypage à haut débit
19 novembre 2011
La technique de dissection illustre énucléation de l'oeil de la souris pour la fixation des tissus pour réaliser le phénotypage à haut débit écrans.
Cette vidéo illustrera l’œil de la souris et la nucléation ou l’ablation du globe oculaire de l’orbite. Le globe oculaire est délimité par le bord inférieur de la paupière. Voici le canthus médial ou nasal.
À l’arrière se trouve le canthus temporal ou latéral. Au-dessus se trouve la marge supérieure de la paupière. Voici un spécimen chirurgical.
L’aiguille pointe vers la cornée claire. Nous pouvons voir un peu de l’objectif dépasser l’iris. L’iris est ici en marron, couvrant le verre.
Le point de repère chirurgical le plus important est cette ligne blanche, sinon le limbe fera une plaie perforante juste derrière elle. La moitié arrière du globe se trouve derrière le limbe et nous pointons vers une insertion musculaire. Vous pouvez voir le muscle couché contre le globe ici, puis le tissu conjonctif qui remplit l’orbite et comprend la glande arienne.
Et enfin, il s’agit de la longue bande blanche de nerf optique issue d’une dissection contondante. À l’aide d’une pince à pansement incurvée, personnalisée avec une pointe pointue, commencez par écarter les paupières. Cela a tendance à caler le toast l’œil vers l’extérieur et à l’écart.
Utilisez soigneusement vos pinces pour aller dans l’orbite et derrière le globe oculaire, comprimez-les doucement derrière le globe oculaire sans le serrer et tirez vers l’avant. Vous auriez dû être capable de saisir le tissu conjonctif et non le globe oculaire. Si vous retournez le globe oculaire sur le côté, vous pouvez voir le tissu orbitaire ainsi que le nerf optique blanc.
Il s’agit d’une deuxième dissection juste pour montrer qu’encore une fois, vous entrez dans le canthus, poussez la pince derrière le globe oculaire, saisissez le tissu conjonctif et tirez-le vers l’avant sans appuyer sur le globe oculaire lui-même. Encore une fois, vous pouvez voir le tissu conjonctif dans la longue bande de nerf optique blanc. Pour faire une plaie par perforation, saisissez le globe oculaire par une insertion musculaire et insérez une aiguille derrière le limbe juste à côté de l’endroit où vous tenez l’œil pour le stabiliser.
Cela permettra au fixateur de pénétrer dans l’œil. Si vous faites la ponction loin de l’endroit où vous tenez l’œil, le globe oculaire sera très instable et il sera difficile de faire cette blessure tant que vous ne comprimez pas l’œil ou n’appliquez pas de pression excessive. Vous pouvez également saisir tout le tissu conjonctif juste derrière le globe oculaire lui-même.
Certains fixateurs ne nécessitent pas de plaie perforante. En général, nous mettons l’œil dans un flacon à scintillation de cinq cc avec au moins trois cc de fixateur pour nous assurer que l’œil est immergé. Pour les animaux fixes à profusion, une dissection nette est nécessaire.
Nous utilisons une pince calibri incurvée et des ciseaux wescott incurvés. Saisissez la paupière inférieure avec la pince calibri. Insérez vos ciseaux contre l’os orbitaire et commencez à couper le tissu conjonctif.
Nous utilisons la courbe à l’opposé du globe oculaire et évitons la taille. N’importe quel œil travaillera tout le long du bord de la paupière inférieure d’un canthus à l’autre. À un certain moment, la majeure partie du tissu conjonctif sera retirée et vous pourrez glisser vos ciseaux derrière le globe et le retirer.
Voici un autre exemple encore, en insérant les ciseaux dans l’orbite, mais contre l’os orbitaire plutôt que contre le globe oculaire et en coupant le tissu conjonctif. Cela commencera à libérer le globe oculaire, qui est comme un ballon de basket dans un panier. Utilisez la pince pour rétracter les paupières et faites des raccourcis doux autour du globe oculaire.
Ici, nous saisissons le tissu conjonctif ou une insertion musculaire avec le Collibra et finissons de couper le globe oculaire du tissu conjonctif orbitaire. Une fois que les globes oculaires sont correctement fixés, et s’ils doivent être transportés, nous plaçons un film para. Nous avons fait le tour de la fiole de sation.
L’emballage doit être conforme aux réglementations de votre université et du gouvernement. Nous les plaçons généralement dans un récipient avec du coton Pour récupérer tout liquide, ce récipient doit être très hermétique. Ce conteneur d’expédition est ensuite placé dans un sac à bulles.
Celui-ci est placé dans un emballage d’expédition de laboratoire liquide, avec toute documentation.
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Aperçu
Cette vidéo illustre la technique d'énucléation de l'œil de souris, qui est cruciale pour la fixation des tissus dans les criblages phénotypiques à haut débit. La procédure consiste à retirer le globe oculaire de sa cavité orbitale, en mettant en évidence les repères anatomiques pour plus de clarté.
Composantes Clés de l'Étude
Domaine de la Science
- Neurosciences
- Biologie
Contexte
- L'énucléation est une technique essentielle dans diverses études biologiques.
- La compréhension de l'anatomie oculaire facilite les procédures chirurgicales précises.
- Cette méthode est essentielle pour les applications de criblage à haut débit.
- Une fixation correcte des tissus est nécessaire pour un phénotypage précis.
Objectif de l'Étude
- Démontrer la technique d'énucléation à des fins éducatives.
- Fournir un guide visuel pour les chercheurs effectuant des procédures similaires.
- Améliorer la compréhension des repères anatomiques pendant la chirurgie.
Méthodes Utilisées
- Démonstration vidéo du processus d'énucléation.
- Identification des caractéristiques anatomiques clés de l'œil de souris.
- Guide étape par étape pour effectuer la procédure.
- Aides visuelles pour soutenir l'apprentissage et l'application.
Principaux Résultats
- Visualisation claire de la technique d'énucléation.
- Identification du canthus médial et latéral.
- Démonstration de la pièce chirurgicale après énucléation.
- Amélioration de la compréhension de la procédure pour les criblages à haut débit.
Conclusions
- La vidéo constitue un outil éducatif efficace pour les chercheurs.
- La compréhension du processus d'énucléation est essentielle pour une fixation réussie des tissus.
- Une technique appropriée peut améliorer les résultats dans les études de phénotypage.
Foire Aux Questions
Executive Industry Relevance
Remote high-throughput phenotyping of mouse eyes enables distributed genetic resource utilization and accelerates discovery of genotype-phenotype correlations in ophthalmic disease models. Standardized enucleation and tissue transfer protocols reduce geographic and operational barriers, supporting scalable, multi-site preclinical research. This approach enhances portfolio-wide access to rare or geographically dispersed transgenic lines for early-stage target validation and phenotypic screening.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Facilitates systematic collection of ocular tissues from diverse genetic backgrounds for hypothesis-driven studies.
- Enables functional validation of candidate genes implicated in ocular development and disease.
- Supports predictive confidence in linking genetic perturbations to phenotypic outcomes.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, fixed tissue samples suitable for downstream molecular and morphological assays.
- Improves reproducibility and comparability across multi-site phenotyping screens.
- Enables scalable preparation of samples for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Aligns mouse phenotyping with translational biomarker discovery for human ophthalmic diseases.
- Supports continuity from genetic discovery to preclinical validation of disease mechanisms.
- Reduces logistical barriers to accessing rare or geographically distributed mouse models.
Pipeline & Workflow Integration
This remote enucleation and tissue transfer protocol integrates into the early discovery and preclinical continuum, bridging genetic model generation with centralized phenotyping and analysis.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and mechanistic de-risking by providing access to diverse genetic models.
- Screening: Standardizes sample preparation for reproducible, quantitative phenotyping assays.
- Analytics: Supports acquisition of morphological and molecular readouts for comparative analysis.
- Translational Research: Facilitates alignment of mouse phenotypes with human disease biomarkers.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable protocol for distributed tissue acquisition across research networks.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in genotype-phenotype associations and target validation.
- Operational Value: Streamlines logistics, standardizes procedures, and enables multi-site scalability.
- Strategic Value: Enhances go/no-go decision-making by broadening access to phenotypic data from rare models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of genetic targets and disease models.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency in mouse eye enucleation and tissue handling.
- Needs access to fixation reagents, validated shipping containers, and compliance with shipping regulations.
- Demands cross-site standardization of collection and documentation protocols.
- Adaptable to both unfixed and perfusion-fixed tissue workflows as supported by the protocol.
- Dependent on institutional and governmental guidelines for biological sample transport.
