Imagerie de la libération de neurotransmetteurs à l’aide de rapporteurs fluorescents de neurotransmetteurs à base de cellules
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 4:13 min • June 17th, 2025
Prenez une souris avec une fenêtre crânienne contenant une fine couche de crâne pour permettre la visualisation du cerveau.
Le mouvement de la tête est limité à l’aide d’une barre de tête attachée.
Le cortex est pré-injecté de neurotransmetteurs fluorescents (CNiFER), qui sont des cellules rapporteures qui permettent la détection en temps réel de la libération de neurotransmetteurs.
Les CNiFER expriment un récepteur de neurotransmetteur couplé aux protéines G et un détecteur de calcium cytoplasmique, qui consiste en un domaine de liaison au calcium fusionné à des fluorophores donneurs et accepteurs.
À l’aide d’un microscope à deux photons, excitez le détecteur pour provoquer l’émission de fluorescence du donneur et activez la visualisation CNiFER.
L’activité neuronale atteignant le cortex provoque la libération de neurotransmetteurs.
Ces neurotransmetteurs se lient aux récepteurs CNiFER et activent les voies de signalisation qui induisent la libération de calcium du réticulum endoplasmique.
L’augmentation du calcium cytoplasmique se lie au détecteur, provoquant un changement de conformation qui rapproche les fluorophores.
Le donneur transfère de l’énergie à l’accepteur pour stimuler l’émis
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