Imagerie de la dynamique subcellulaire du calcium dans les neurones de Caenorhabditis elegans

Prenez deux souches transgéniques distinctes de Caenorhabditis elegans sur des lames avec des tampons gélosés. Les coussinets contiennent une solution roulante avec un agent paralysant qui minimise les mouvements.

Le cordon nerveux ventral des vers, ou VNC, contient des interneurones excitateurs qui expriment des indicateurs de calcium cytoplasmique dans une souche et des indicateurs de calcium mitochondrial dans l’autre.

Placez une lamelle pour faire rouler les vers, en orientant le VNC pour la visualisation, puis positionnez-les sous un microscope à fluorescence.

Utilisez la lumière visible pour localiser les vers, puis passez en mode fluorescence.

Dans les neurones au repos, un faible taux de calcium intracellulaire maintient les indicateurs non liés, ce qui entraîne une faible fluorescence.

L’activité neuronale spontanée ouvre des canaux calciques voltage-dépendants, permettant l’afflux de calcium.

Dans la souche avec des indicateurs cytoplasmiques, le calcium se lie aux indicateurs, améliorant la fluorescence cytoplasmique.

L’excès de calcium cytoplasmique pénètre dans les mitochondries par les canaux. Dans la souche avec des indicateurs mitochondriaux, la liaison au calcium augmente