TRANSFERT DE GÈNES ASSISTÉ PAR ÉLECTROPORATION INCORPORÉ DANS L’AGAROSE DANS DES PROGÉNITEURS D’INTERNEURONES CORTICAUX DE SOURIS
Encyclopédie des expériences JoVE
Neurosciences
0 vues • 2:59 min • August 7th, 2025
Remplissez une micropipette avec un mélange d’ADN contenant des vecteurs plasmidiques porteurs du gène d’intérêt et un colorant de suivi. Fixez-le dans un micromanipulateur.
Placez un bloc d’agarose sous le microscope et placez une tranche de cerveau embryonnaire de souris incrustée d’agarose avec des interneurones corticaux dessus.
Abaissez la micropipette et injectez le mélange d’ADN dans la région progénitrice de l’interneurone. Le colorant de suivi marque le site d’injection.
Positionnez un autre bloc d’agarose sur une électrode de boîte de Pétri et une colonne d’agarose sur l’électrode de couverture.
Transférez la tranche sur le bloc et alignez l’électrode du couvercle sur le site d’injection.
Appliquez de brèves impulsions électriques pour perméabiliser temporairement les membranes cellulaires, permettant aux plasmides de pénétrer dans le noyau.
Incuber la tranche dans un milieu pour maintenir la viabilité cellulaire.
À l’intérieur du noyau, le plasmide déclenche l’expression des gènes, produit la protéine cible et module les fonctions progénitrices de l’interneurone.
Pour l’injection, mélanger l’ADN du vecteur d’expression et de contrôle à une concentration de 1 microgramme par mic
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