Name: Aiguë et chronique Test tactile sensorielle après un traumatisme médullaire chez le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-04T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Apprenez deux méthodes de test tactile Von Fry pour évaluer les changements sensoriels aigus et chroniques après lésion médullaire chez le rat. Ces techniques validées détectent efficacement l'allodynie et aident à comprendre les mécanismes de récupération.

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NIH NS43798 (DMB); NIH F31 NS058138 (MRD); P30-NS045758 (CBSCR), et les anciens combattants paralysés d&#39;Amérique # 2451 (DMB) et # 2707 (MRD).

1. Up / Down plantaire Von Frey Test Le but du test est de déterminer la sensibilité tactile en mesurant la force beaucoup plus est nécessaire pour obtenir retrait de la patte de la relance. Disponibles dans le commerce calibrés monofilaments Von Frey cheveux entre les gammes de 4,56 et 6,10 sont utilisés pour stimuler la patte. Autre entrée sensorielle comme la visualisation du stimulus ou de la proprioception peut confondre des mesures de seuil tactiles afin réponses basées sur l'entrée visuelle ou proprioceptive ne sont pas valides. Pour éviter la visualisation du monofilament de toucher la peau, nous testons seulement tandis que le rat est de manger des céréales. Cette distraction cognitive, garantit également que tous les rats sont testés au niveau de référence similaires de confort. Pour éviter les réponses dues à proprioceptif plutôt que d'entrée tactile, nous n'incluons pas les essais où le monofilament soulève ou déplace la patte. Méthodes d'acclimatation A. POUR LA DÉMARCHE HAUT-BAS <ol><li> Présent fruits cereal dans la cage afin rats reconnaître et chercher la récompense alimentaire. Les rats n'ont pas besoin d'être privés de nourriture à n'importe quel moment dans le processus de Gentling ou des tests. </li><li> Les rats sont prêts à être acclimatés à l'environnement de test et les procédures une fois qu'ils mangent des céréales de fruits dans la cage. Acclimatation se déroule sur au moins 4 séances de 10 minutes chacun, mais plus peuvent être nécessaires. Dix minutes par séance sont utilisés de telle sorte que les rats ne deviennent pas rassasiée avant la fin de la session. </li><li> Placez le rat dans la chambre d'essai avec trois morceaux de céréales fruits. Fournir des céréales de fruits supplémentaire de une à deux à un moment où ils sont consommés. Sur la troisième session tandis que le rat est de manger, de produire des mouvements de la main sous le plancher du fil de telle sorte que le rat s'habitue au mouvement en dessous de sa patte. Sur la quatrième session, appliquer le monofilament 5.18 à la surface plantaire de la patte d'environ une fois par minute pour un total de dix présentations. Un rat naïf ne doit pas répondre à ce stimulus seuil sous. </li><li> Grandy les morceaux de céréales consommées, la fréquence des mictions et la défécation, la congélation, et les comportements de toilettage. Le comportement de congélation se produit de deux façons: a) le rat est accroupi au ras du sol en général près de la paroi arrière ou opposé à l'examinateur et reste immobile; b) le rat est penché sur le milieu de la cage et bavarde habituellement ses dents . Comportements de congélation peut se poursuivre pendant de longues périodes de temps. </li><li> Un rat adouci qui est prêt pour les tests mangent presque sans interruption pendant 10 minutes. Il se déplace facilement dans la cage et de chercher des céréales de fruits très rapidement après avoir consommé la dernière. Surtout, le rat ne sera pas arrêter de manger ou d'être distrait par les mouvements des mains sous le plancher du fil monofilament ou l'application à la patte. </li></ol> ESSAIS B. POUR L'APPROCHE UP-DOWN <ol><li> Les rats produisent des vocalisations de détresse qui sont au-dessus de notre gamme sonore humaine. Les rats qui attendent d'être testés doivent être conservés dans une pièce séparée afin qu'ils ne peuvent pas entendre ces COVgénéralisations. </li><li> Les rats avec lésion de la moelle épinière qui sont appropriés pour des tests de haut en bas von Frey cheveux doivent démontrer de port de poids avec les membres. Membres qui sont incapables de soutenir le rat ne peut pas être fiable testé parce que l'application de monofilaments déplace la patte avant les virages cheveux. </li><li> Placez un rat dans la chambre d'essai avec 2 ou 3 morceaux de céréales fruits. Les rats doivent être manger pendant chaque application VFH. </li><li> Lancez un dé pour déterminer qui HL pour commencer à tester en premier. Même les chiffres représentent la patte droite et nombres impairs représentent la gauche. </li><li> Commencez la séance d'essais avec le monofilament 5.18. Réponses de retrait peut se produire de 4,56 à 6,10 chez les rats normaux et la SCI et le monofilament 5,18 tombe dans le milieu de la fourchette. </li><li> Ne pas appliquer un monofilament tandis qu'un rat se fige, se tapit ou ne pas manger. Si le testeur attend, parfois, ces conditions permettra de résoudre et les essais peuvent reprendre. Si le rat affiche ces comportements et la durée totale de l'applicationAratus est de 20 minutes, arrêter le test retest et depuis le début de la journée suivante. Ne retirez pas le rat alors qu'il est l'affichage de ces comportements car cela peut augmenter leur fréquence. Attendez jusqu'à ce que le rat éclate de ces modèles avant de le manipuler afin d'éviter le renforcement de ces comportements. </li><li> Appuyez sur le monofilament au dermatome L5 plantaire de la patte arrière entre les patins pied jusqu'à ce qu'il se plie (voir la figure 1A). Cette application en douceur constante devrait prendre environ une seconde, puis l'enlever de la peau. Évitez de toucher n'importe quelle partie des coussinets que la sensibilité de la peau est beaucoup plus faible dans ces domaines. Cette touche unique constitue un essai. </li><li> Une réponse positive se produit lorsque le rat soulève rapidement la patte jusqu'à loin de le monofilament. Le retrait doit être lancé au moment où le monofilament est retiré afin de confirmer que la réponse est associée à l'application monofilament. </li><li> Regarder l'animal pour une autre preuve de conscience de la mocontact nofilament tels que la vocalisation, regardant vers le bas, vers l'arrière ou à la patte testé, lécher la patte, retrait de la patte soutenue ou secousses musculaires des oreilles. Les noter sur une feuille de données. Lorsque ces comportements se produisent avec retrait de la patte il sert comme preuve de la perception du stimulus supraspinal. </li><li> S'il ya une réponse positive, appliquer le monofilament la plus basse suivante. S'il n'y a pas de réponse (négative), se déplacer jusqu'à la monofilament supérieur. Laisser 30 secondes entre chaque application monofilament pour les récepteurs sensoriels de revenir à feu de base avant un nouveau test (pour prévenir l'adaptation). </li><li> Poursuivre l'application de monofilaments supérieures ou inférieures à la patte arrière en fonction des réponses positives ou négatives jusqu'à ce que vous avez 10 essais. Ensuite, répétez sur l'autre patte arrière. (Voir la fiche technique par exemple). </li><li> La plus haute VFH qui peut être testée sans introduire d'entrée proprioceptive et en soulevant la patte est de 6,10. Le 6.45VFH et plus ne doit pas être utilisé parce que la patte se soulève avant le monofcoudes ilament. S'il n'y a pas de réponse à 6,10, puis la prochaine épreuve sera appliquer le nouveau 6,10. </li><li> Une réponse devrait être annulée et le procès doit être re-testé si l'un des événements suivants se produisent lors de l'application de relance ou de retrait de la patte: <ol class="lalpha"><li> Le rat n'est pas continuellement manger. </li><li> Le rat s'éloigne de la relance VFH avant le pliage du monofilament, ce qui rend impossible de connaître la force appliquée qui provoque la réponse de retrait. </li><li> La patte est levée par le VFH (soit avant ou après la VFH est plié) fournissant proprioceptive, en plus de la stimulation tactile. </li></ol></li><li> Une session de test peuvent généralement être achevé en moins de 15 minutes pour les deux membres postérieurs. </li></ol> C. TRAITEMENT DES DONNEES POUR LA DÉMARCHE HAUT-BAS <ol><li> Un test réussi aura 10 essais séquentiels pour chaque patte. </li><li> La valeur du seuil tactile est le plus bas monofilament qui produit le retrait de la patte &amp; ge; 50% des présentations et des 3 ou plus des présentations du monofilament ont accordée (voir la fiche technique, par exemple, les seuils sont encerclés). </li><li> Un monofilament avec seulement 2 essais au total n'est pas sélectionné comme le seuil, même si un essai est positif et un négatif. Présentations multiples de la relance sont de meilleurs indicateurs de la répartition des réponses à cette force. </li><li> S'il n'ya pas de monofilament qui produit des réponses positives sur au moins 50% des tests, le rat est donné un score de 6,45. Cela signifie que le rat n'a pas détecté le plus élevé vérifiable monofilament de 6,10 au-delà de hasard. Une valeur de 6,45 est donné parce qu'il représente la valeur immédiatement supérieure à la plage testable de monofilaments. </li><li> Convertissez la valeur seuil pour les pattes droite et gauche en vigueur gramme. Les valeurs de force grammes sera fourni par le fournisseur des poils de von Frey. . Pour les données de blessures bilatérales, la force de gramme de seuil pour les deux pattes peuvent être moyennées ensemble pour donnerun score unique. </li></ol> 2. Dorsale de Von Frey Test Le but de ce test est de déterminer la sensibilité tactile chez le rat avec le contrôle moteur tels les pauvres qu'ils ne peuvent pas être testées en utilisant les méthodes typiques vfh plantaires. Il quantifie le degré de force tactile est nécessaire pour produire une réponse aversive. Pour éviter les réactions aux stimuli proprioceptifs, nous n'incluons pas les essais dans lesquels la patte est déplacé par le VFH lors de l'application. En outre, nous n'incluons pas les essais dans lesquels l'VFH glisse ou brossé sur la surface dorsale du pied. Méthodes d'acclimatation pour dorsale A. ESSAIS Von Frey <ol><li> Rats doux pour quatre séances de 10 minutes chacun avant les tests de base et de lésions de la moelle épinière. </li><li> Enroulez le rat dans une petite serviette de sorte que les membres postérieurs sont exposés comme le montre ci-dessous (figure 1B). Placez le rat au cours d'une table avec les pattes de derrière légèrement reposant sur la surface. Utilisez la mêmeserré, mais pas une pellicule étanche et maintenez pour chaque rat. Contreventement votre avant-bras sur le bord de la table peut réduire la variabilité entre les rats. </li><li> Un rat adouci qui est prêt pour les tests ne seront pas résister à la tenue à la serviette pendant plusieurs minutes consécutives, mais vous pourriez avoir à ré-enrouler le rat 1 ou 2 fois au cours de l'essai de deux pattes de derrière. </li></ol> ESSAIS B. pour dorsale ESSAIS Von Frey <ol><li> Lancez un dé pour déterminer qui derrière branche de commencer à tester en premier. Même les chiffres représentent la patte droite et nombres impairs représentent la gauche. </li><li> Enroulez le rat dans la serviette en laissant l'arrière-train exposés. </li><li> Stimulus tactile est appliqué seulement après que le rat est calme et tranquille pour au moins 10 secondes. </li><li> En commençant par le VFH 4,56, appliquer le monofilament perpendiculairement à la surface dorsale entre le premier métatarsien et second environ 1 cm en amont de l'articulation (figure 1C). Appliquer le monofilament dans une surface lisse, steady manière sur une intervalle d'une seconde jusqu'à ce qu'il se plie puis l'enlever. Cette touche unique constitue un essai. </li><li> Une réponse positive se produit lorsque le rat se déplace rapidement la patte loin de la relance. La direction du mouvement est souvent postérieure ou externe avant le membre postérieur est fléchie. Le retrait doit être lancé au moment où le monofilament est retiré afin de confirmer que la réponse est associée à l'application monofilament. </li><li> Appliquer le monofilament 4,56 fois plus avec au moins 30 secondes entre les applications afin d'éviter sensorielle "liquidation" et de permettre aux récepteurs sensoriels de revenir aux valeurs de base de tir avant de nouveaux essais (pour empêcher l'adaptation). </li><li> Un test de stimulation doit être appliqué de nouveau si les bulletins de vfh et frôle la peau en douceur, ce qui rend la prestation plus de force d'un brossage ou un balayage plutôt que d'un contact pointu. </li><li> Si il ya moins de 2 (soit 1 ou 0) des réponses positives à la monofilament 4,56, l'VFH supérieure est appliquée 3fois de la même manière. </li><li> De cette façon, VFHs progressivement plus de 4,56 par 5,88 sont appliqués jusqu'à ce que deux ou plusieurs réponses positives se produisent ou jusqu'à ce que le plus grand VFH est atteint. </li><li> Le seuil de retrait de la patte est le plus bas VFH qui provoque au moins 2 réponses positives sur 3 essais. </li><li> Répéter l'opération sur l'autre patte. </li><li> Une session de test peuvent généralement être achevé en 15 minutes pour les deux pattes de derrière. </li></ol> 3. Les résultats représentatifs Un test réussi se traduira par le retrait immédiat, rapide de la patte arrière à une VFH perpendiculairement appliquée à la région mi-plantaire (figure 1A) ou de la surface dorsale entre le 1 er et 2 ème métatarse 1 cm de l'articulation (figure 1C) . Ces réponses sont comptabilisés pour calculer seuil tactile pour chaque patte arrière. Seuils tactiles de dorsales essais vfh en SCI aiguë a montré une excellente fidélité avec plantaires seuils vfh tirerd à des moments chroniques (figure 2). La baisse des seuils tactiles à partir de tests plantaires ou dorsaux se produire pour graduée SCI (Figure 3 3,5). Cette hypersensibilité se manifeste dès 7 jours après la SCI et est maintenue pendant toute la durée de l'expérience 3-4,6. Alors que toute une gamme de sévérités SCI n'affectent pas les seuils sensoriels tactiles de la patte, la baisse des seuils de se produire pour plus sévère SCI (Figure 3). Surtout, le développement de la ci-dessous au niveau allodynie est une réponse tout ou rien qui se produit quand il ya une perte de plus de 60% de la substance blanche à l'épicentre lésion. (Figure 4 3). Seuils tactiles peuvent se désintégrer et de produire des réponses artificielles aux forces vfh faibles. Au moins deux conditions peut produire la carie seuil - rapidement l'application de la VFH à la peau d'une manière ou piquer piquant ou ne pas attendre assez longtemps entre les applications de relance. Pour être sûr queles seuils tactiles sont authentiques, des précautions doivent être prises pour appliquer chaque VFH en utilisant une approche similaire à faible vitesse et l'intervalle interstimulus doit être d'au moins 30 sec. Nous avons également montré que le comportement alimentaire réduit la carie 5 seuil. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 1"> Figure 1. Schéma et photographie montrant l'emplacement de la stimulation de la VFH plantaire et dorsale von Frey cheveux (VFH) tests. A) Pour les tests VFH plantaire, les cheveux de von Frey devrait être appliquée perpendiculairement à la patte arrière mi-plantaire d'environ 1 cm en arrière de la phalange moyenne (comme indiqué par la boîte rouge dans le diagramme de la surface plantaire de la patte arrière) à une vitesse lente vitesse constante jusqu'à ce qu'elle se plie. B et C) Pour la technique VFH dorsale, le rat est vaguement enveloppée dans une serviette chirurgicale comme le montre la photo. Le VFH est appliqué à la surface dorsale de la patte entre la première et la deuxième approximatel métatarsieny 1 cm en amont de l'articulation. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 2"> Figure 2. Dorsaux seuils von Frey cheveux sensorielles en corrélation avec VFH plantaire standard. (N-44; coefficient de Pearson = 0,503, p &lt;0,01, r2 = 0,67). Les lignes pointillées indiquent le seuil de coupure de la sensation allodynique en utilisant soit la VFH dorsale ou les techniques vfh plantaires et indiquer que les seuils allodyniques à 7 jours après un traumatisme médullaire en utilisant le test VFH dorsale chronique prédire ci-dessous au niveau allodynie déterminée par des méthodes vfh plantaires. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 3"> Figure 3. Les premières dorsales seuils von Frey cheveux sensorielles prédire allodynique et non-allodynique sensibilité tactile dans des sévérités de blessures à timepoints plus tard. Comparables seuils sensoriels ont eu lieu entre 7 jours après vfh dorsale SCI et 28 jours post-mesures SCI vfh plantaires. Similitude remarquable s'est produite pour une large éventail de SCI, avec allodynie significative noté dans modérée à sévère SCI (p &lt;0,05 vs 1,1 mm de déplacement tous les autres groupes). <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 4"> Figure 4. Pourcentage de rats recevant une laminectomie (pas de SCI) et des groupes SCI montrant patte arrière allodynie moins 6 semaines après la SCI. Allodynie a été seulement observée chez les rats avec modérés ou graves SCI (OSU ESCID dispositif de 0,9, 1,1, 1,25, 1,3 déplacements de la moelle mm) tandis que les rats ayant une forme légère SCI (0,3, 0,5, 0,7 mm déplacements de la moelle épinière) exposés des réactions normales à la stimulation tactile. Représentant coupes coronales de la moelle épinière colorées pour la myéline à l'épicentre de la lésion pour laminectomie (contrôle indemne), légère (0,5 mm de déplacement), modérées (1,1 mm de déplacement) et sévère (1,3 mm de déplacement) contusions de la moelle épinière sont inclus pour montrer le degré de axonale ménager qui est associé à cette hypersensibilité. (Barre d'échelle = 0,5 mm). k "&gt; <img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/3247/3247fig5.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figure 5"> Figure 5. Une fiche de données d'échantillon pour les tests de haut en bas von Frey cheveux. La valeur des cheveux et le résultat (positif ou négatif) sont enregistrées pour chaque essai. Indications de sensibilisation supraspinal des tests sont notés. A la fin du test, les réponses à chaque valeur de cheveux sont comptés. La valeur du seuil sélectionné pour les données d'exemple est encerclé.

<ol><li>Cruz-Almeida, Y., Felix, E. R., Martinez-Arizala, A., Widerstrom-Noga, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+symptom+profiles+in+persons+with+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Pain+Med%22%5BJournal%5D)">Pain symptom profiles in persons with spinal cord injury.</a> Pain Med. 10, 1246-1259 (2009).</li>
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<li>Hutchinson, K. J., Gomez-Pinilla, F., Crowe, M. J., Ying, Z., Basso, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+exercise+paradigms+differentially+improve+sensory+recovery+after+spinal+cord+contusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Three exercise paradigms differentially improve sensory recovery after spinal cord contusion in rats.</a> Brain. 127, 1403-1414 (2004).</li>
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</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Les méthodes d&#39;essai vfh présentés ici représentent deux paradigmes de test qui sont sensibles et valable pour une utilisation dans des modèles de rats SCI. Il est important, le test dorsale VFH a été créé pour l&#39;évaluation de la reprise de la sensation tactile des pattes postérieures aiguë après la mi-thoracique SCI lorsque les rats sont incapables de se tenir sur leurs membres postérieurs. Ce paradigme de test peut également être utilisé lorsque les rats à retrouver la capacité pour supporter leur poids et pou...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Semmes-Weinstein Monofilaments </td><td> Stoelting Co </td><td> 58011 </td><td></td></tr><tr><td> Boîte éleveur de poissons </td><td> Magasin d&#39;approvisionnement de l&#39;Aquarium </td><td></td><td> Trou percé dans le côté pour la livraison de céréales </td></tr><tr><td> Treillis métallique surélevé (1/4 &quot;X 1/4&quot; de la grille) </td><td> Quincaillerie </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Élastique pour maintenir la boîte éleveur de poissons en place </td><td> Craft Boutique </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Céréales sucrées </td><td> Grocery Store </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Chirurgicale serviettes Huck 16 &quot;x 23&quot; </td><td> Magasin de fournitures médicales </td><td></td><td></td></tr></tbody></table><pclass = &quot;jove_content&quot;&gt;

aiguë et chronique test tactile sensorielle après un traumatisme médullaire chez le rat

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

Lésions de la moelle épinière (SCI) altère les systèmes sensoriels causant l&#39;allodynie 1-8. Pour identifier les causes cellulaires et moléculaires de l&#39;allodynie, sensibles et valide les tests sensoriels dans des modèles de rats SCI est nécessaire. Cependant, jusqu&#39;à récemment, aucune méthode de test simple a été validé pour SCI afin que les méthodes normalisées n&#39;ont pas été mises en œuvre dans les laboratoires. En outre, les méthodes d&#39;essai disponibles n&#39;a pas pu être mis en œuvre de façon aiguë ou dans les cas graves déficiences motrices existé, ce qui empêche les études du développement de la SCI-induite allodynie 3. Ici, nous présentons deux méthodes validées à l&#39;aide de tests sensoriels von Frey cheveux (VFH) monofilaments qui quantifient les changements dans tactiles seuils sensoriels après SCI 4-5. Un test est le bien-établie Up-Down test qui démontre une sensibilité et une spécificité élevées dans des sévérités différentes SCI lors d&#39;un essai chronique 5. L&#39;autre test est un test récemment mis au point VFH dorsale qui peut être appliquée aiguë après SCI quand unllodynia développe, avant la récupération motrice 4-5. Chaque monofilament VFH applique une force calibrée lors d&#39;un contact à la peau de la patte arrière jusqu&#39;à ce qu&#39;il plie. Dans la méthode de haut en bas, VFHs alternance des forces supérieures ou inférieures sont utilisées sur le dermatome L5 plantaire pour délimiter les limites de retrait fléchisseurs. Forces successivement plus élevés sont appliqués jusqu&#39;au retrait se produit alors VFHs force inférieure sont utilisées jusqu&#39;à ce prélèvement cesse. Le seuil tactile reflète la force nécessaire pour obtenir le retrait de 50% des stimuli. Pour ce nouveau test, chaque VFH est appliqué à la dermatome L5 dorsale de la patte tandis que le rat est pris en charge par l&#39;examinateur. La stimulation se produit VFH dans l&#39;ordre croissant de la force jusqu&#39;à ce que au moins 2 des 3 applications à une force donnée produit retrait de la patte. Tactile seuil de sensibilité est la plus faible force de retrait pour provoquer 66% du temps. Procédures d&#39;acclimatation, les essais et la notation sont décrits. Essais aberrants qui exigent un procès retest et typique sont définis. L&#39;utilisation des animaux wtel qu&#39;approuvé par l&#39;Ohio State University et de protection des animaux Comité utilisation.

Nous décrivons deux méthodes de tests sensoriels tactiles pour des périodes aiguës ou chroniques de lésions de la moelle épinière chez le rat. Ces procédures validées peut détecter le développement et la maintenance de l&#39;allodynie des sensations semblables.

Aiguë et chronique Test tactile sensorielle après un traumatisme médullaire chez le rat

Les lésions de la moelle épinière (LME) altèrent les systèmes sensoriels, provoquant une allodynie1-8. Afin d'identifier les causes cellulaires et moléculaires de l'allodynie, des systèmes sensoriels sensibles et validés...

L'objectif général de cette procédure est de quantifier les modifications de la sensibilité tactile aux points temporels aigus et chroniques suivant une lésion médullaire, en utilisant deux méthodes distinctes de test de Von Frey. Cela est réalisé en premier lieu en habituant les rats à une chambre en plexiglas pour le test de Von Frey en mode « up-down » et à être maintenus en serviette pour le test de Von Frey dorsal. La deuxième étape de la procédure consiste à appliquer une stimulation tactile soit sur la surface plantaire, soit sur la face dorsale de la patte postérieure à l’aide de monofilaments de Von Frey.Une réponse positive se produit lorsque le rat soulève rapidement la patte loin du monofilament. La dernière étape de la procédure consiste à déterminer le seuil sensoriel tactile de la patte postérieure en quantifiant le nombre de réponses positives ou de retraits de la patte en réponse à chaque force appliquée. En fin de compte, les résultats obtenus peuvent montrer que les techniques de test von Frey en montée, en descente et dorsale sont sensibles aux diminutions des seuils tactiles survenant après une lésion médullaire modérée à sévère.Aujourd'hui, nous allons démontrer deux techniques permettant d'évaluer la sensibilité tactile de la patte de rats ayant subi une lésion de la moelle épinière. Ces techniques nous aideront à déterminer des traitements futurs pour les personnes souffrant de douleurs invalidantes et de lésions médullaires. Au moins les deux tiers des personnes ayant une lésion de la moelle épinière développent par la suite une douleur neuropathique sévère et invalidante.Pour nous, chercheurs, il est important d'utiliser des techniques de tests comportementaux précises, sensibles et valides afin d'identifier les mécanismes cellulaires et moléculaires destinés à de futures thérapeutiques. Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur la récupération sensorielle après une contusion médullaire thoracique moyenne, elle s'avère également utile pour d'autres types de pathologies et de lésions affectant la sensation tactile. La démonstration visuelle de ce test est essentielle, car l'évaluation de la sensibilité repose sur l'interprétation de la réponse de retrait de la patte chez le rat.Pour les nouveaux utilisateurs, il peut être difficile de déterminer si la réponse est effectivement due à un stimulus tactile plutôt qu'à des indices proprioceptifs ou visuels. Après avoir visionné cette vidéo, vous serez en mesure de manipuler délicatement les animaux et de les habituer à l'environnement de test. Appliquez des monofilaments de von Frey sur la surface dorsale ou plantaire de la patte postérieure, interprétez une réponse positive de retrait de la patte.Et enfin, déterminer le seuil sensoriel tactile chez les animaux. Présentez d'abord au rat des céréales aux fruits dans sa cage d'habitation afin qu'il reconnaisse et recherche la récompense alimentaire. Une fois que le rat mange confortablement les céréales dans sa cage d'habitation, placez-le dans la chambre de test avec trois autres morceaux de céréales aux fruits.Fournir des morceaux supplémentaires de céréales aux fruits au fur et à mesure qu’ils sont consommés. Un rat docile prêt à être testé mangera presque sans interruption pendant 10 minutes et ne sera pas distrait par des mouvements de main sous la grille métallique ou par l’application subliminale d’un monofilament à la patte. Placer un rat docile dans la chambre de test avec deux ou trois morceaux de céréales aux fruits.Lancez un dé pour déterminer quelle patte postérieure tester en premier, les nombres pairs correspondant à la patte droite et les nombres impairs à la patte gauche, pendant que le rat mange. Commencez la session de test avec le monofilament 5,18. Si le rat fige les CRO ou ne mange pas, attendez qu’il se calme.Avant de procéder au test, appliquez le monofilament sur le dermatome plantaire L5 de la patte arrière entre les coussinets plantaires jusqu'à ce qu'il fléchisse. Cette application lisse et régulière doit durer environ une seconde avant de retirer le monofilament. Une réponse positive se produit lorsque le rat soulève rapidement la patte loin du monofilament.Surveillez et enregistrez tout autre signe d'awareness au toucher du monofilament, comme une vocalisation, le fait de regarder ou de lécher la patte testée, ou un frémissement des oreilles. En cas de réponse positive, appliquez le monofilament immédiatement inférieur. En l'absence de réponse, passez au monofilament immédiatement supérieur, en attendant 30 secondes entre chaque application de monofilament afin que les récepteurs sensoriels retrouvent un niveau de décharge de base avant de retester.Soyez vigilant aux essais non valides dans lesquels le poil déplace physiquement la patte. Dans ces essais, le poil fournit à la fois une rétroaction tactile et proprioceptive, et ces données doivent être exclues de toute analyse ultérieure.Continuer à appliquer des monofilaments de force supérieure ou inférieure à la patte postérieure en fonction des réponses positives ou négatives. Pour un total de 10 essais, envelopper lâchement un rat dans une petite serviette de manière à exposer son arrière-train. Placer le rat au-dessus d'une table de sorte que les pattes postérieures reposent légèrement sur la surface.Stabiliser votre avant-bras sur le bord de la table peut réduire la variabilité entre les rats, bien qu'un rat docile prêt à être testé ne résiste pas à être maintenu dans la serviette pendant plusieurs minutes consécutives. Toutefois, vous devrez peut-être réenrouler le rat pendant le test des deux pattes postérieures. Encore une fois, faites rouler un dé pour déterminer quelle patte postérieure tester en premier. Commencez par enrouler lâchement un rat docile dans la serviette, en laissant la région postérieure exposée.Une fois que le rat est calme depuis au moins 10 secondes, appliquez le filament de von Frey de 4,56 perpendiculairement à la surface dorsale entre le premier et le deuxième métatarsien, à environ un centimètre en direction proximale par rapport à l'articulation, de manière fluide et régulière pendant un intervalle d'une seconde, jusqu'à ce qu'il fléchisse. Une réponse positive se produit lorsque le rat déplace rapidement la patte vers l'arrière ou vers l'extérieur avant de fléchir le membre postérieur. Une réponse négative se produit lorsqu'il n'y a aucun mouvement de la patte postérieure en réponse au filament ou lorsque le mouvement n'est pas directement lié à l'application du filament de von Frey.Appliquez à nouveau le monofilament 4,56 deux fois supplémentaires, avec un intervalle d'au moins 30 secondes entre chaque application, afin d'éviter les adaptations. S'il y a moins de deux réponses positives au monofilament 4,56, appliquez le monofilament immédiatement supérieur de la même manière. Le test est terminé lorsqu'un monofilament provoque au moins deux réponses positives sur trois essais. Ici, les réponses provenant des deux approches de test au poil von Frey sont cumulées afin de déterminer les seuils tactiles pour chaque patte postérieure. Les seuils tactiles obtenus lors des tests von Frey dorsaux chez des rats présentant une lésion médullaire aiguë montrent une excellente fidélité avec la méthode ascendante-descendante von Frey.Les seuils pileux dérivés à des moments chroniques montrent une diminution des seuils tactiles obtenus lors des tests plantaires ou dorsaux, diminution observée dans les lésions médullaires traumatiques (LMT) de gravité progressive. Cette hypersensibilité apparaît chez les rats présentant les LMT les plus sévères dès sept jours après la lésion et persiste pendant toute la durée de l'expérience. De manière importante, le développement d'une allodinie sous-lésionnelle constitue une réponse tout-ou-rien qui se produit lorsqu'il existe une perte supérieure à 60 % de la substance blanche au niveau du centre de la lésion. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en environ 15 à 20 minutes par rat lorsqu'elle est effectuée correctement.Pour utiliser ces techniques avec précision, il est important de contrôler les variables de confusion dans l'environnement, car elles peuvent introduire une variabilité dans les facteurs comportementaux ; par exemple, effectuer les tests à la même heure de la journée et dans une pièce aux conditions de température et d'humidité contrôlées permettra de minimiser cette variabilité. De plus, les rats émettent des vocalisations ultrasonores, il est donc essentiel de les maintenir à l'extérieur de la salle de test jusqu'au moment où ils doivent être testés. Nous administrons également des céréales sucrées afin de stabiliser les seuils sensoriels.Nous constatons que, lorsqu'on administre les céréales, les seuils sont stables, plus stables que lorsqu'on ne donne pas les céréales. Ce comportement est probablement dû à des comportements anticipatoires et à la menace de douleur, qui active les centres de la peur et des émotions et induit un comportement d'hypervigilance et de catastrophisation chez les rats.

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