Name: Lisolement des cellules de souris poumon dendritiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Découvrez l'isolement des cellules dendritiques pulmonaires de souris par digestion au collagénase, enrichissement magnétique et tri cytométrique. Cette méthode permet d'obtenir une préparation hautement purifiée pour les études immunologiques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Les auteurs tiennent à remercier Dietrich à Marilyn à l&#39;installation de débit de base UGB Cytométrie pour son aide avec le tri cellulaire et Peter Mottram pour son aide avec les microphotographies. Ce travail a été financé par le Flight Attendant Institut de recherche médicale, le Prix du LSU-concurrentiel du Programme de recherche et les subventions du NIH / NIAID P20 RR020159 et R03AI081171.

1. Perfusion pulmonaire et la suspension seule cellule <ol><li> Euthanasier la souris avec une injection intrapéritonéale de kétamine / xylazine mélange anesthésique (en mg / souris kétamine 1.8, xylazine 0,19) et une exsanguination par la veine fémorale </li><li> Exposer la cavité thoracique en coupant et en tirant doucement en arrière la peau externe du péritoine. Procéder à l&#39;ouverture du diaphragme par la coupe de la cage thoracique afin d&#39;exposer à la fois le cœur et les poumons. </li><li> Perfuser délicatement les poumons en utilisant une seringue de 5 ml remplie avec de l&#39;EDTA-HBSS (1mM EDTA en calcium / magnésium sans HBSS). Connecter une aiguille de 25 G et insérer l&#39;aiguille dans le ventricule droit. Pour éviter les fuites lors de l&#39;injection, sécuriser le tissu myocardique autour de l&#39;aiguille en utilisant une pince. Doucement injecter la solution, tout en maintenant une pression constante. Perfusion précis se traduira par l&#39;inflation du poumon et un changement de couleur rose / blanc. </li><li> Retirer les ganglions lymphatiques drainant à écarter toute contamination éventuelle de ce tissu. </li><li> Recueillirtissu pulmonaire, transfert à une boîte de Pétri sur la glace, et le hacher en petits morceaux à l&#39;aide d&#39;une lame de rasoir. </li><li> Transfert des tissus à la terre dans un tube gentleMACS C contenant 5 ml / poumon de la solution de digestion par la collagénase (collagénase de type 1A 0,5 mg / ml, plus de type IV pancréatique bovine DNase 20 ug / ml dans du HBSS contenant 5% de FBS, 100 U / ml de pénicilline et 100 ug ml de streptomycine /). </li><li> Utilisez le dissociateur gentleMACS pour obtenir une suspension cellulaire unique. Choisissez le programme: m_lung_01. Incuber l&#39;échantillon à 37 ° C pendant 30 minutes. Agiter le tube toutes les 5 minutes pour remettre les fragments de tissus. Procéder à m_lung_02 programme. </li><li> Transférer l&#39;échantillon dans un tube de 15 ml conique et centrifuger pendant 10 minutes à 335 x g à 4 ° C. Après cette étape, gardez tous les réactifs et centrifugations à 4 ° C pour empêcher la réduction de la viabilité cellulaire. </li><li> Rejeter le surnageant et lyser les globules rouges restants en ajoutant 2 ml de tampon de lyse ACK pendant 1 minute à température ambiante. Laver les cellules avec 13ml de BSA PBS/0.5% froid et centrifuger pendant 10 minutes à 335 x g à 4 ° C. </li><li> Rejeter le surnageant, resuspendre nombre total de cellules dans 5 ml de BSA PBS/0.5% froid et passer un maillage complet 100 um en nylon. </li><li> Déterminer le nombre total de cellules en utilisant colorant exclusion du bleu trypan. </li></ol> 2. Isolation magnétique et CD11c + cellules d&#39;enrichissement <ol><li> Centrifuger la suspension seule cellule pendant 10 minutes à 200 x g à 4 ° C et éliminer le surnageant. </li><li> Resuspendre le culot cellulaire dans 400 pl de tampon de séparation (PBS, BSA 0,5%, et 2 mM d&#39;EDTA) par 10 8 cellules totales. Bloc-Fc des anticorps médiée imprécise de liaison en utilisant des anticorps anti-CD16/CD32 (0.5μg / 10 6 cellules) pendant 30 minutes à 4 ° C. </li><li> Laver les cellules avec 10 ml de tampon de séparation à froid et centrifuger pendant 10 minutes à 200 x g à 4 ° C. Resuspendre les cellules dans 400 ul de tampon de séparation. </li><li> Ajouter 100 ul de microbilles CD11c par 10 8 </soutien cellules&gt; total. Bien mélanger et incuber pendant 15 minutes au réfrigérateur (2-8 ° C). </li><li> Laver les cellules avec 10 ml de tampon de séparation à froid et centrifuger pendant 10 minutes à 200 x g à 4 ° C et éliminer le surnageant. </li><li> Reprendre le culot cellulaire dans 3 ml de tampon de séparation à froid. </li><li> Effectuer la séparation magnétique à l&#39;aide de la autoMACS Pro TM Séparateur en sélectionnant le posseld programme. Recueillir la fraction positive (0,5 ml). </li></ol> 3. Cellules dendritiques classiques (CDC) d&#39;isolation <ol><li> Incuber enrichi CD11c suspension cellulaire positifs avec des anti-CD11c PE-Cy7 et anti-IA/IE (CMH-II)-FITC anticorps pendant 30 minutes à 4 ° C. La concentration d&#39;anticorps est optimisée 0,5 pg / 10 6 de cellules. </li><li> Laver les cellules avec de la BSA PBS/0.5% froid et centrifuger pendant 10 minutes à 335 x g à 4 ° C. Resuspendre les cellules dans 0,5 ml de BSA PBS/0.5% et les faire passer à travers une maille de 40 um de nylon. </li><li> Passez àtrier les cellules en utilisant le trieur FACS Aria cellulaire dans le mode de pureté. Ajouter 100 ul de BSA PBS/0.5% sur les tubes de collecte afin de prévenir tout dommage des cellules purifiées. Gardez vos cellules à une température réfrigérée au long du processus de tri cellulaire. </li></ol> 4. Protocole alternatif pour l&#39;obtention d&#39;une suspension cellulaire unique et CD11c + cellules d&#39;enrichissement <ol><li> En remplacement de la dissociateur gentleMACS, le tissu pulmonaire à la terre de l&#39;étape 1.5 peut être transféré à un tube de 15 ml conique contenant 5 ml de solution de collagénase par poumon et incuber pendant 1 heure à 37 ° C. Vortex cellules toutes les 15 minutes afin de remettre en suspension des fragments de tissus. Perturber le tissu en passant l&#39;échantillon 6-8 fois dans et à travers une seringue de 3 ml connecté à une aiguille 20 G. Évitez de faire des bulles pendant le processus, sinon la viabilité des cellules sera compromise. Une fois la suspension cellulaire unique est obtenue, passez à l&#39;étape 1.8. </li><li> En remplacement de la séparation AutoMACSPro MCTor, isolation magnétique pour l&#39;enrichissement des cellules CD11c, peut également être effectuée par le passage de la suspension cellulaire manuelle à travers des colonnes MACS deux. La sélection des colonnes appropriées varieront en fonction de la taille de l&#39;échantillon. </li></ol> 5. Les résultats représentatifs: Lung CDC sont identifiés comme CD11c Salut / CMH-II population de cellules Salut. Comme indiqué dans la Fig. 1, CDC représentent un pourcentage inférieur de 1,4% par rapport à certains autres tissus tels que la rate (4,8%). Cependant, contrairement à la rate, les poumons des cellules CD11c positifs d&#39;exprimer des quantités différentes de CMH-II, y compris une population cellulaire différent de celui des CDC. Après la préparation à cellule unique, le rendement cellulaire des cellules pulmonaire totale était d&#39;environ 3,0 à 3,8 x 10 7 cellules / poumon avec une viabilité de 60-70% à partir de laquelle un peu plus de 1% a représenté sous la CDC. Ce pourcentage a augmenté après l&#39;isolement CD11c magnétique où le poumon totale CDC a été incrémenté environ 10 tIMES (&gt; 16%) de la préparation originale (figure 2A). Cependant, les cellules CD11c exprimer de faibles quantités de CMH-II (CD11c Salut / CMH-II lo, les macrophages) représentent une population de cellules contaminantes haute (&gt; 70%) qui a été mélangé avec le sous-ensemble des poumons CDC. Comme indiqué dans la Fig. 2B, ces cellules ont été éliminées après l&#39;étape de tri cellulaire lorsque la pureté CDC atteint&gt; 96%. Le rendement habituel de la CDC, après toute la procédure était de 5 x 10 4 cellules / poumon. Microphotographies montrent des caractéristiques morphologiques de la CDC comme des cellules arrondies avec les dendrites typiques (panneau supérieur). D&#39;autre part, CD11c Salut / CMH-II lo représenté un sous-ensemble morphologiquement différentes qui montre protubérances cellulaires qui sont typiques des macrophages (MΦ, panneau inférieur) 12. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/3563/3563fig1.jpg" /> Figure 1. Différentiel DC fréquence des poumons de souris et la rate. Lung unetissu splénique ND de souris C57BL / 6 ont été collectées et traitées avec de la collagénase. Après digestion à la collagénase, les cellules ont été colorées avec anti-souris CD11c-PE-Cy7 et anti-souris IA / IE-FITC. Parcelles représentant de cytométrie en flux montrent des pourcentages de la CDC (CD11c Salut / CMH-II Salut) dans les poumons et la rate. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/3563/3563fig2.jpg" /> Figure 2. Isolement de la CDC à partir des poumons de souris. Poumons de souris des cellules de suspension unique a été étiqueté avec des anti-CD11c microbilles et passé à travers un séparateur de cellules automatique. A) Un graphique représentatif montre les pourcentages de la CDC (CD11c Salut / CMH-II Salut) et Les macrophages (MΦ, CD11c Salut / CMH-II LO) des populations après enrichissement CD11c. Coloration plus de la fraction enrichie en utilisant suivi anti-souris CD11c-PE-Cy7 et anti-souris IA / IE-FITC. Double cellules positives ont été triées et analysées par cytométrie en flux. Pourd&#39;identifier leur morphologie, les cellules ont été cytospun et colorées avec une modification Wright-Giemsa coloration. B) parcelles représentant montrent des pourcentages de la CDC et MΦ après tri cellulaire. Microphotographies montrent une image représentative du poumon et de la CDC MΦ poumon. Barre d&#39;échelle = 20 um.

<ol><li>Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensing+pathogens+and+tuning+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Sensing pathogens and tuning immune responses.</a> Science. 293, 253-256 (2001).</li>
<li>Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).</li>
<li>Manicassamy, S., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cell+control+of+tolerogenic+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Dendritic cell control of tolerogenic responses.</a> Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).</li>
<li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology%2C+quantitation%2C+tissue+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).</li>
<li>Asselin-Paturel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+type+I+IFN-producing+cells+are+immature+APCs+with+plasmacytoid+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology.</a> Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).</li>
<li>Chan, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon-producing+killer+dendritic+cells+provide+a+link+between+innate+and+adaptive+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity.</a> Nat. Med. 12, 207-213 (2006).</li>
<li>Taieb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+dendritic+cell+subset+involved+in+tumor+immunosurveillance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance.</a> Nat. Med. 12, 214-219 (2006).</li>
<li>Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subversion+of+pulmonary+dendritic+cell+function+by+paramyxovirus+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections.</a> Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).</li>
<li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+leukocyte+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).</li>
<li>Sung, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+major+lung+CD103+%28alphaE%29-beta7+integrin-positive+epithelial+dendritic+cell+population+expressing+Langerin+and+tight+junction+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins.</a> J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).</li>
<li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+CD11c%2B+MHC+class+II-+precursors+generate+lung+dendritic+cells+during+respiratory+viral+infection%2C+but+are+depleted+in+the+process%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process.</a> J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).</li>
<li>Bhatia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+host+defense+against+Aspergillus+fumigatus+involves+alveolar+macrophages+with+a+predominance+of+alternatively+activated+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype.</a> PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).</li>
<li>Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fms-like+tyrosine+kinase+3+ligand+regulates+migratory+pattern+and+antigen+uptake+of+lung+dendritic+cell+subsets+in+a+murine+model+of+allergic+airway+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation.</a> J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).</li>
<li>Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+response+of+respiratory+dendritic+cell+subsets+to+influenza+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection.</a> J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).</li>
</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

L&#39;isolement de la souris pulmonaires DC est une technique importante pour l&#39;étude d&#39;un large éventail de stimuli respiratoires. Le processus d&#39;obtention de ces cellules comprend des étapes critiques qui empêchent la perte de cellules ainsi que la viabilité des cellules et la pureté. Perfusant le poumon avant la collecte aidera à éliminer toutes les cellules périphériques ainsi que de réduire les érythrocytes contaminant. L&#39;utilisation de la dissociation peut être automatisé advanteogus quand un grand...

<table width="200" border="1"><tr><td> Nom du réactif </td><td> Société </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> Tampon de lyse ACK </td><td> Invitrogen </td><td> D6-0005DG </td><td></td></tr><tr><td> Anti-souris CD11c (HL3) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5580979 </td><td> PE-Cy7 conjugués </td></tr><tr><td> Anti-souris IA / IE (269) </td><td> BD-Pharmingen </td><td> 553623 </td><td> Conjugué au FITC </td></tr><tr><td> Collangenase type 1A </td><td> Sigma </td><td> 9891-500MG </td><td></td></tr><tr><td> Crépines cellulaire </td><td> BD Falcon </td><td> 352340, 352360 </td><td></td></tr><tr><td> CD11c (N418) Microbilles </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-001 </td><td></td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Sigma </td><td> D5025-150KU </td><td></td></tr><tr><td> Hank solution saline équilibrée </td><td> Invitrogen </td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td> Solution tampon HEPES </td><td> Invitrogen </td><td> 15630 </td><td></td></tr><tr><td> Boîtes de Pétri de 60 mm </td><td> BD Falcon </td><td> 351016 </td><td></td></tr><tr><td> GentleMACS ™ C tubes </td><td> Miltenyi </td><td> 130-093-237 </td><td></td></tr><tr><td> Douceur dissociateur MACS </td><td> Miltentyi </td><td> 130-093-235 </td><td></td></tr><tr><td> Automacs-Pro ™ </td><td> Miltenyi </td><td> 130-092-545 </td><td></td></tr><tr><td> FASCS Aria </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr></table>

l&#39;isolement des cellules de souris poumon dendritiques

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Cellules dendritiques pulmonaires (DC) jouent un rôle fondamental dans la détection des pathogènes envahisseurs 1,2 ainsi que dans le contrôle des réponses tolérogènes 3 dans les voies respiratoires. Au moins trois sous-ensembles principaux de cellules dendritiques pulmonaires ont été décrites chez la souris: DC conventionnelles (CDC) 4, DC plasmacytoïdes (pDC) 5 et le tueur de l&#39;IFN-production DC (IKDC) 6,7. Le sous-ensemble CDC est le sous-ensemble DC les plus éminents dans les poumons 8. Le marqueur commun connus pour identifier des sous-DC est CD11c, un type que je transmembranaire intégrines (β2) qui est également exprimé sur les monocytes, les macrophages, les neutrophiles et des cellules B 9. Dans certains tissus, en utilisant comme marqueur CD11c pour identifier la souris DC est valable, comme dans la rate, où la plupart des cellules CD11c + représentent le sous-ensemble des CDC, qui exprime des niveaux élevés de l&#39;complexe majeur d&#39;histocompatibilité de classe II (CMH-II). Toutefois, le poumon est un tissu plus hétérogène, où secôté des sous-ensembles DC, il ya un pourcentage élevé d&#39;une population de cellules distinctes qui exprime des niveaux élevés de CD11c bout de faibles niveaux de CMH-II. Basé sur sa caractérisation et surtout sur ​​l&#39;expression de ses F4/80, un marqueur des macrophages spléniques, le CD11c Salut CMH-II de la population lo cellules du poumon a été identifié comme les macrophages pulmonaires 10 et plus récemment, comme un précurseur potentiel DC 11. Contrairement à la souris PDC, l&#39;étude du rôle spécifique de la CDC dans la réponse immunitaire pulmonaire a été limitée en raison de l&#39;absence d&#39;un marqueur spécifique qui pourrait aider dans l&#39;isolement de ces cellules. Par conséquent, dans ce travail, nous décrivons une procédure pour isoler hautement purifiée de souris pulmonaires CDC. L&#39;isolement des sous-ensembles DC pulmonaires représente un outil très utile afin de mieux connaître la fonction de ces cellules en réponse à des agents pathogènes des voies respiratoires ainsi que les facteurs environnementaux qui peuvent déclencher la réponse immunitaire de l&#39;hôte dans les poumons.

Une préparation hautement purifiée de cellules de souris pulmonaires dendritiques est décrite. Un accent particulier est donné à l&#39;isolement de sous-ensemble de cellules dendritiques conventionnelles.

L&#39;isolement des cellules de souris poumon dendritiques

Les cellules dendritiques (DC) pulmonaires jouent un rôle fondamental dans la détection des agents pathogènes envahissants 1,2 ainsi que dans le contrôle des réponses tolérogènes 3 dans le ...

L'objectif général de cette procédure est d'obtenir une préparation hautement purifiée de cellules dendritiques pulmonaires de souris. Cela est réalisé en premier lieu en prélevant le tissu pulmonaire sans inclure les ganglions lymphatiques drainants. Ensuite, une suspension monocellulaire est obtenue par digestion à la collagénase.L'étape suivante consiste à enrichir les cellules positives pour CD11c à l'aide d'un système d'isolement magnétique des cellules. Ensuite, le sous-ensemble de cellules dendritiques conventionnelles est isolé par tri cellulaire en cytométrie en flux. Enfin, les cellules dendritiques conventionnelles isolées à partir du tissu pulmonaire de souris peuvent être analysées par cytométrie en flux et microscopie optique.Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l'immunologie, comme quel est le rôle du sous-ensemble de cellules dendritiques conventionnelles dans l'immunité innée et les maladies infectieuses au niveau du tractus respiratoire ? La procédure sera démontrée par Issa Lancelin, chercheur associé de mon laboratoire, ainsi que par moi-même. Après l'euthanasie de la souris, commencez par inciser puis retirer délicatement

Research

Recherche

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie et infection

Dissocier les cellules de différents types de tissus spécifiques requiert des paramètres spécifiques à l'agitation des tissus pour obtenir un volume élevé de viabilité, de cellules cultivables. Le Miltenyi gentleMACS dissociateur optimise cette tâche avec un simple, protocole pratique. Dans cette publication, l'utilisation de cet appareil sur le tissu pulmonaire est expliqué.

Préparation standardisée des suspensions unicellulaires provenant de tissus pulmonaires de la souris en utilisant les dissociateur gentleMACS

Dans cet article, nous démontrons l'isolement des souris des cellules pulmonaires souches résidentes mésenchymateuses (CSM poumons), leur expansion, la caractérisation et l'analyse des propriétés immunomodulatrices.

Isolement et caractérisation de Hoechst Faible CD45 Négatifs Souris Cellules souches mésenchymateuses du poumon

Ici, nous détaillons une méthode pour l'isolement rapide des cellules dendritiques de souris intestinales (DCS) et les macrophages. Caractérisation phénotypique des CD intestinales et les macrophages est effectuée en utilisant plusieurs couleurs d'écoulement analyse cytométrique tandis magnétique enrichissement bourrelet suivie par tri cellulaire est utilisé pour donner des populations de grande pureté pour des études fonctionnelles.

L&#39;isolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de l&#39;intestin de souris

Ce protocole décrit en détail une méthode pour isoler des cellules présentant l'antigène à partir de thymus humain par l'intermédiaire de différentes étapes de digestion enzymatique du tissu suivie d'une centrifugation de densité de la suspension de cellules individuelles et enfin le tri magnétique et / ou FACS des populations de cellules d'intérêt.

Isolement des cellules dendritiques myéloïdes et les cellules épithéliales du thymus humain

Des sous-ensembles distincts de cellules dendritiques existent en tant que populations rares dans les organes lymphoïdes, et sont donc difficiles à isoler en nombre suffisant et en pureté suffisante pour des expériences immunologiques. Nous décrivons ici une méthode à haute efficacité et à haut rendement pour l’isolement de tous les principaux sous-ensembles actuellement connus de cellules dendritiques spléniques de souris.

Une méthode de rendement efficace et haute pour l&#39;isolement des souris dendritiques sous-ensembles cellulaires

Nous décrivons un procédé pour générer des tranches de poumon couper avec précision (PCLS) et les immunocoloration pour visualiser la localisation de divers types de cellules immunitaires dans le poumon. Notre protocole peut être étendu pour visualiser l'emplacement et la fonction de différents types de cellules dans une variété de conditions.

coupe de précision de la souris Tranches Lung pour visualiser les cellules vivantes pulmonaire dendritiques

Macrophages dérivés de monocytes DC (RCSCND) peut détecter de petites quantités de molécules associées à risque et sont donc facilement apprêté. Nous fournissons un protocole détaillé pour l’isolement des RCSCND de sang et de tumeurs et de leur mise en route avec les complexes immuns tout en soulignant des précautions qui doivent être menées afin d’éviter leur activation prématurée.

Protocole d’isolement de cellules dendritiques macrophages dérivés de monocytes de souris et leur Activation ultérieure In Vitro avec tumeur Complexes immuns

Nous présentons ici une méthode économique et efficace pour isoler et générer des cellules dendritiques dérivées de la moelle osseuse de haute pureté à partir de souris après 7 jours de culture avec 10 ng / mL GM-CSF / IL-4.

Protocole économique et efficace pour isoler et cultiver des cellules dendritiques dérivées de la moelle osseuse à partir de souris

Dans cet article, des cellules endothéliales pulmonaires primaires ont été isolées et cultivées à partir de souris néonatales.

Isolement de cellules endothéliales pulmonaires primaires de souris

Nous fournissons un protocole détaillé pour isoler et identifier des populations rares de lymphocytes T spécifiques de l’antigène dans les poumons de souris grâce à l’enrichissement des lymphocytes T à base de billes magnétiques et aux tétramères du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH).

Identification de lymphocytes T rares spécifiques de l’antigène dans des poumons de souris avec un peptide : tétramères du complexe majeur d’histocompatibilité

Ce protocole détaille l’isolement de populations immunes et non immunes vivantes du poumon de souris à l’état d’équilibre et après une infection grippale. Il fournit également des stratégies de contrôle pour identifier les sous-ensembles de cellules épithéliales et myéloïdes.

Isolement de populations de cellules myéloïdes et épithéliales vivantes à partir du poumon de souris

Découvrez l'isolement des cellules dendritiques pulmonaires de souris par digestion au collagénase, enrichissement magnétique et tri cytométrique. Cette méthode permet d'obtenir une préparation hautement purifiée pour les études immunologiques.

L'isolement des cellules de souris poumon dendritiques

Explorer plus de vidéos