Reproductible écrasement du nerf sciatique de souris et l'évaluation subséquente de la régénération par l'analyse du Mont muscle entier

L’objectif global de cette procédure est de démontrer une méthode simple et reproductible d’écrasement du nerf sciatique et d’analyse de l’ensemble du montage de la réinnervation musculaire après un écrasement du nerf sciatique. Ceci est accompli en exposant d’abord le nerf sciatique, y compris la disposition appropriée des écarteurs chirurgicaux pour assurer un bon accès au nerf. Ensuite, écrasez le nerf avec une pince hémostatique et marquez le nerf avec du charbon de bois.

Ensuite, retirez les muscles individuels innervés par le nerf sciatique du membre postérieur. La dernière étape consiste à disséquer des muscles individuels pour une analyse de l’ensemble du montage après immuno-marquage. En fin de compte, les résultats démontrent qu’il est possible d’effectuer facilement un écrasement du nerf sciatique reproductible et que des supports de trous musculaires peuvent être utilisés pour analyser la régénération ultérieure.

Le principal avantage de cette procédure est qu’elle fournit une technique simple et reproductible pour écraser le nerf sciatique et ensuite marquer la régénération axonale. Commencez cette procédure en anesthésant la souris pour la chirurgie à l’aide d’un cocktail de 100 milligrammes par kilogramme de kétamine et de 10 milligrammes par kilogramme de xylazine par injection intrapéritonéale pour minimiser la douleur postopératoire. La souris reçoit également une injection sous-cutanée de 10 milligrammes par kilogramme de méloxicam.

Ensuite, rasez soigneusement les deux postérieurs à l’aide d’une tondeuse chirurgicale. Appliquez ensuite une crème dépilatoire pour un épuisement complet. Nettoyez la peau à l’aide d’un applicateur stérile à embout de coton et d’un gommage chirurgical à la bétadine.

Après cela, appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux avec un applicateur stérile à embout de coton. Placez la souris sur une plaque d’acier inoxydable propre sur une couverture homéothermique préchauffée et maintenez la température de l’animal à 37 degrés Celsius. Ensuite, collez tous les membres vers le bas.

Positionnez soigneusement le membre postérieur symétriquement de manière à ce que l’articulation du genou fasse un angle droit avec le corps. Par la suite, couvrez le champ opératoire avec un champ stérile sous le microscope. Faites une incision semi-circulaire sur la ligne médiane.

Séparez doucement la peau de la musculature sous-jacente et repliez-la de temps en temps. Appliquez environ 0,1 millilitre de solution saline stérile pour garder le site chirurgical humide pendant la procédure. Ensuite, ouvrez le plan fascial entre le grand fessier et la tête antérieure du biceps fémoral.

Mettre en évidence le nerf sciatique pour un contrôle chirurgical. Le nerf sciatique controlatéral doit être exposé et mobilisé, mais laissé intact. Ensuite, reposez et suturez la musculature fessière.

Exposez le nerf sciatique expérimental de la même manière avec des écarteurs. Pour faciliter la visualisation. Libérez doucement le nerf sciatique du tissu conjonctif environnant à l’aide d’une paire de ciseaux d’iridectomie.

Ensuite, utilisez la pince fine 5 45 pour placer le nerf au niveau de la mâchoire inférieure de la pince hémostatique super fine, alignez les trois fascias de manière adjacente et non l’une sur l’autre. La pince hémostatique a été gravée d’une marque à 1,5 millimètre de leur pointe. Placez la partie la plus externe de la sciatique dans l’alignement de cette marque avant de l’écraser.

Cela garantit un écrasement de largeur uniforme et que le nerf ne s’étend pas au-delà des mâchoires de la pince hémostatique lorsqu’il est aplati en raison de la force d’écrasement. Si le nerf s’étend au-delà des pointes des pinces, le nerf ne sera que partiellement écrasé. Utilisez une deuxième paire de pinces hémostatiques pré-trempées et du carbone en poudre pour marquer le site d’écrasement.

Écrasez le nerf au même endroit pendant 15 secondes en trois clics. Aucun marquage carbone ne doit s’étendre au-delà de la limite de l’écrasement initial. Ceci est particulièrement important si un marquage précis du site d’écrasement est nécessaire pour pré-tremper la pince dans du carbone et empêcher la propagation du carbone sur le site chirurgical.

Ouvrez la pince dans du carbone en poudre. Puis fermez-les doucement. Utilisez de la gaze stérile pour essuyer le carbone à l’extérieur des hémostats.

Vérifiez la pince sous un grossissement d’au moins trois x pour vérifier que les surfaces de broyage sont uniformément recouvertes de carbone en poudre. Si nécessaire, ils sont retrempés et essuyés pour reposer et suturer la musculature fessière de la même manière que le côté controlatéral. Enfin, fermez l’incision cutanée à l’aide des clips réflexes de neuf millimètres.

Si l’on constate que des clips réflexes de neuf millimètres limitent les mouvements, des clips reflex plus petits ou six sutures automatiques peuvent être utilisés. Au lieu de cela, après avoir sacrifié la souris, retirez quatre muscles. Le tibias, l’extenseur antérieur des doigts, le longus péronier et le soléaire du membre postérieur se penchent soigneusement à travers leurs tissus conjonctifs jusqu’à un plat recouvert de sard noir.

Ensuite, rincez-les au PBS. Par la suite, fixez-les dans 4 % d’aldéhyde paraforme pendant 30 minutes. Pour disséquer chaque muscle sur une boîte de Pétri recouverte de sard noir, retirez les tendons de celle-ci à l’aide des ciseaux d’iridectomie.

Après cela, amincissez les muscles en enlevant les fibres musculaires intérieures Préservez soigneusement la surface extérieure du muscle, y compris les bandes d’extrémité. Montez ensuite les muscles résultants sur des lames plus avec un bouclier vectoriel et des lamelles en verre de 22 x 40 millimètres scellant deux côtés avec du vernis à ongles transparent. Lorsqu’elles sont correctement montées sur la glissière, les bandes nplate doivent être en contact avec les lamelles de protection.

Voici un exemple de site d’écrasement in situ au niveau du membre postérieur gauche. Le site de broyage est indiqué par du carbone noir. L’astérisque marque une branche du nerf tibial qui innerve la musculature de la cuisse et sert de point de repère utile.

Lors de la chirurgie d’écrasement, la division tibiale du nerf sciatique est délimitée en bleu, le péronier et le vert et le srel et le jaune. Cette lame semi-mince démontre un écrasement complet effectué à l’aide de la pince hémostatique. Les pointes de flèches indiquent ici des fibres broyées.

Un écrasement incomplet effectué avec la pince coudée est indiqué dans une autre section de demi-ailette. Les pointes de flèche indiquent à nouveau des fibres écrasées tandis que les flèches indiquent des axones préservés. Ce sont les images rendues à partir de l’ensemble des muscles de la monture.

Après l’ablation du tissu conjonctif et l’amincissement ultérieur, les bandes nplate sont délimitées sur chaque muscle. On voit ici le muscle de la monture sous-entière. 14 jours après l’écrasement du nerf sciatique.

Les flèches indiquent les zones de la jonction neuromusculaire qui ont été réinnervées par un axone. Voici la démonstration de la jonction neuromusculaire dénervée. L’écart 43 processus positifs des cellules de Schwan sont indiqués par les pointes de flèches.

Aucun axone n’est visible dans cette jonction neuromusculaire dénervée. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’écraser de manière reproductible un nerf statique et de préparer des montures d’hormones musculaires pour l’analyse de la régénération.