Chromosomics: détection d'altérations numériques et structurelles dans les 24 chromosomes de l'homme en utilisant simultanément un dosage FISH Novel OctoChrome

Le test Octa Chrome Fish examine simultanément les 24 chromosomes humains en une seule hybridation sur une seule lame. Tout d’abord, préparez des étalements de métaphase sur la lame spécifique de huit carrés. Effectuez ensuite un balayage automatisé de la lame d’échantillon pour faciliter la localisation de toutes les phases méta et la réévaluation future de toutes les images cellulaires.

Position suivante, le huit carré glisse sur l’appareil Octa chrome et hybride les sondes. Les résultats obtenus peuvent montrer trois chromosomes entiers peints différents dans chaque carré en fonction de la disposition des combinaisons de chromosomes sur le dispositif d’osmose inverse. J’ai eu l’idée de cette méthode RO FISH pour la première fois lorsque j’ai commencé à appliquer les poissons dans les études de population humaine au début des années 1990.

Puis j’ai présenté mon idée de peinture en trois couleurs, huit diapositives carrées pour fixer la cellule lors de la conférence annuelle A A CR en 1994. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que la flexion chromosomique classique et le prototypage spectral moderne est qu’elle peut facilement analyser les 24 chromosomes humains dans un plus grand nombre de cellules. Commencer par une préparation de cellules en métaphase fixées en suspension comme une pipette de contrôle déposant des cellules sur une lame et vérifier la densité appropriée.

Trempez maintenant dans huit carrés de chrome OC, glissez-le dans de l’éthanol pur pendant deux minutes. Dans une séquence de carrés alternés, répartissez cinq microlitres de suspension cellulaire sur la lame de matrice pour éviter que les étalements de cellules n’interfèrent les uns avec les autres. Faites sécher les échantillons à l’air libre avant de repérer les paires adjacentes.

Appliquez 20 microlitres de 0,2 microgramme par millilitre de colorant DAPI au centre de chaque moitié de la lame et placez un lambousculade. Maintenant, effectuez un balayage automatisé de la lame d’échantillon pour localiser les cellules de métaphase. Utilisez un logiciel métavers pour faciliter la localisation de toutes les phases méta et la réévaluation future de toutes les images cellulaires.

Affichez les résultats de l’analyse manuellement et supprimez les artefacts non métaphasés. Tout d’abord, retirez la coloration DPI dans deux tampons XSSC, puis déshydratez les échantillons par une série de lavages à l’éthanol. Faites sécher la lame à l’air libre, puis placez-la sur une plaque de houblon à 37 degrés Celsius pendant cinq minutes.

Équilibrez maintenant la sonde chromatique, la chambre d’hybridation multi-sondes et le tampon d’hybridation dans un bain-marie à 37 degrés Celsius avec l’étiquette vers le bas. Placez l’appareil OC chrome sur une plaque chauffante à 37 degrés Celsius. Ajoutez deux microlitres de solution d’hybridation préchauffée à chacune des huit zones.

Inversez et orientez soigneusement le modèle. Faites glisser sur l’appareil chrome OC. Vérifiez que le modèle de diapositive est aligné sur l’appareil Octa Chrome.

Ensuite, abaissez soigneusement la glissière sur les gouttes de solution d’hybridation et appliquez une pression douce et uniforme pour étaler la solution d’hybridation sur les bords de chacune des zones surélevées sur l’appareil OC chrome. Soulevez l’extrémité givrée de la glissière en verre et retournez-la de sorte que la diapositive se trouve sous l’appareil OC chrome. Placer sur une plaque chauffante à 37 degrés Celsius pendant 10 minutes.

Transférez-le ensuite sur une plaque chauffante à 75 degrés Celsius pendant cinq minutes. Pour dénaturer les échantillons pour l’étape d’hybridation, transférer dans une sonde chromatique, chambre d’hybridation multi sondes. Remettez le couvercle et faites flotter la chambre dans le bain-marie à 37 degrés Celsius pendant la nuit.

Retirez délicatement la diapositive de l’appareil et lavez-la dans un excès de 0,4 SC à 72 degrés Celsius pendant deux minutes. Effectuez le deuxième lavage à température ambiante pendant 30 secondes. Procédez à l’ajout de 20 microlitres de DPI au centre de chaque moitié de la lame et positionnez une lamelle.

Incuber les échantillons dans l’obscurité pendant 10 minutes à température ambiante avant de les observer par microscopie à fluorescence. Le test du poisson chrome Octa facilite l’examen simultané des 24 chromosomes humains à l’aide d’une seule hybridation sur une seule lame. Chaque carré porte trois sondes de peinture de chromosomes entiers différentes directement étiquetées avec des fluors de couleurs différentes.

L’examen d’une cellule métaphasique normale dans le carré deux du système Octa CHRO montre que les chromosomes 8, 21 et 12 sont peints en rouge, vert et bleu. Ils peuvent être visualisés individuellement à l’aide des filtres respectifs ou visualisés simultanément à l’aide d’un triple filtre DAPI Fitzy, Texas Red. Cette approche chromosomique est utile dans la détection des cellules anormales atteintes de leucémie spécifique chromosomique, de translocation et d’aneuploïdie.

Par exemple, T 8 21 est une translocation chromosomique courante dans la leucémie myéloïde aiguë. La trisomie 21 3 copies du chromosome 21 est une aneuploïdie courante dans la leucémie après le développement. Cette technique a ouvert la voie aux scientifiques du domaine de la cytogénétique moléculaire et de l’épidémiologie moléculaire pour explorer les réarrangements chromosomiques les plus courants détectés dans la leucémie et le lymphome, et pour examiner la ploïdie sélective parmi tous les chromosomes humains chez les patients cliniques ou les populations exposées à des produits chimiques toxiques.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon d’examiner simultanément les 24 chromosomes humains en une seule hybridation sur une seule lame par le test Octo Chrome Fish. Et nous définissons cela comme des chromosomes.