Name: Assemblage in vitro de la semi-artificielle machine moléculaire et son utilisation pour la détection de lésions de lADN (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: Découvrez l'assemblage d'un capteur moléculaire d'ADN doublement marqué utilisant la topoisomérase de vaccinia pour détecter les cassures d'ADN dans les coupes tissulaires. Cette méthode permet une visualisation précise des dommages génétiques.

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Cette recherche a été financée par la subvention R01NS062842 de l&#39;Institut national des troubles neurologiques et les accidents cérébrovasculaires, National Institutes of Health (VVD) et par des subventions R21 NS064403 de l&#39;Institut national des troubles neurologiques et les accidents cérébrovasculaires, National Institutes of Health à l&#39;ARRA (VVD) et R21 EB006301 Institut national d&#39;imagerie biomédicale et bio-ingénierie, National Institutes of Health (VVD).

Les sections de la machine moléculaire basé sur la détection devrait être préparée d&#39;abord parce que leur préparation prend plus de temps que le montage du dispositif moléculaire. La construction fonctionne bien avec le 5-6 microns d&#39;épaisseur pans coupés du paraformaldéhyde-fixes, des blocs de tissus inclus en paraffine. Utiliser les marques diapositives qui conservent des sections bien, comme ProbeOn plus diapositives chargées et préalablement nettoyées (Fisher Scientific) ou similaire. Nous recommandons d&#39;abord en utilisant un tissu avec un motif bien connu de dommages à l&#39;ADN, qui contient à la fois la DNase I et II DNase de type casse, comme la dexaméthasone-rat traité apoptotiques thymus 13,14. 1. Préparation des sections <ol><li> Placer les coupes dans un rack de diapositives et déparaffinage au xylène pendant 15 min, le transfert à un bain de xylène frais pour 5 minutes supplémentaires. </li><li> Réhydrater en passant par la concentration d&#39;éthanol à 96% d&#39;éthanol-2x5min; 80% d&#39;éthanol - 5min; eau - 2x5 min. </li><li> Recueil section avec Proteinase K. Utiliser 100 pi d&#39;une solution 50μg/mL par section. Incuber 15 &#39;à température ambiante (23 ° C) dans une chambre humidifiée. Le temps peut nécessiter un ajustement en fonction du type de tissu. Tissus durs pourrait exiger plus de digestion. Les temps de 15-25 minutes sont généralement utilisés. La digestion insuffisant peut entraîner l&#39;affaiblissement du signal. Overdigestion sur les résultats d&#39;autre part dans la disparition du signal et des perturbations article. </li><li> Rincer à l&#39;eau distillée pour min 2x10. </li><li> Appliquer 100 ul par la section de BSA 2% pour preblocking. Incuber pendant 15 min à température ambiante (23 ° C). Pendant ce temps assemblage de la machine moléculaire. </li></ol> 2. Moléculaire de montage des machines Tous les réactifs sont mis à l&#39;échelle de 25 uL volume total, ce qui est suffisant pour une détection unique dans une coupe de tissu de taille moyenne (10x10mm). Le volume peut être adapté selon les besoins. <ol><li> Mélanger dans une petit tube en plastique dans cet ordre: </li></ol><table border="1"><tbody> &lt;tr&gt; <td><ol><li> Eau bidistillée; </li><li> Glycol, le polyéthylène-8000 15%; </li><li> Solution de 66 mM Tris-HCl, pH 7,5, MgCl2 5 mM, 0,1 mM dithioérythritol, ATP 1 mM, (c&#39;est à dire régulièrement tampon T4 DNA ligase); </li><li> 70 pmoles de l&#39;oligonucléotide 1, </li><li> 215 pmoles (1,76 à 7,1 mg) VACC TOPO </li><li> 10 unités de T4 ADN ligase (500 U / ml) </li></ol></td></tr></tbody></table><ol start="2"><li> Mélanger doucement par pipetage. Le moléculaires de construire presque instantanément s&#39;auto-assemble dans cette solution et peut être utilisé immédiatement à la température ambiante (23 ° C). Augmenter la température à 37 ° C bloque la T4 ADN ligase composante fondée sur l&#39;étiquetage. </li></ol> 3. L&#39;utilisation de machines moléculaires dans des coupes de tissus au 5&#39;OH étiquette double et 5&#39;PO4 cassures de l&#39;ADN <ol><li> Aspirer la solution preblocking et appliquer 25 pi du mélange de réaction complète contenant 70 pmoles de l&#39;oligonucléotide 1, 53 à 215 pmoles (1,76 à 7,1 mg) VACCTOPO et 10 unités de T4 ADN ligase (500 U / ml) dans une solution de 66 mM Tris-HCl, pH 7,5, 5 mM de MgCl2, 0,1 mM dithioérythritol, ATP 1 mM, et de polyéthylène glycol de 15%-8000. L&#39;oligonucléotide même séquence portant un label unique FITC, oligonucléotide 2, peut être utilisé à la place pour la détection d&#39;un seul type de cassures de l&#39;ADN. Dans ce cas omettre ligase de la réaction de marquage. Aussi, dans cette situation une solution de 50 mM Tris-HCL, pH 7,4, 15% de PEG-8000 peut être utilisé à la place de tampon ADN ligase T4. </li><li> Incuber pendant 1 heure à température ambiante (23 ° C) dans une chambre humidifiée avec une lamelle de plastique. Protéger de la lumière. Abaissement de la température à 16 ° C réduit le signal de ligase-fondée; l&#39;augmentation de la température à 37 ° C élimine complètement le signal ligase basé. Une inhibition partielle de la ligase survient parfois dans le mélange réactionnel, possiblement en raison de contaminants introduits avec des préparations topoisomérase. Par conséquent, incubation plus longue (2-4 heures) pourrait être nécessaire en particulier lorsque sRINCIPALES numéros de ligase marqué des pauses sont présents. Bien que les deux signaux ligase et topo peut être observée à ce stade, dans de nombreux cas le signal ligase peut être renforcée par une nouvelle application du mélange réactionnel sans VACC TOPO et double-oligonucléotide marqué, mais contenant un oligonucléotide en épingle à cheveux en forme (oligonucléotide 3) (35 mg / mL) et l&#39;ADN ligase T4 (250 U / ml). Pour améliorer le signal passer à l&#39;étape 3, pour voir la réaction sans amélioration passez à l&#39;étape 5. </li><li> Retirez délicatement par des lamelles immergeant la coulisse verticalement dans une jarre de Coplin contenant de l&#39;eau à température ambiante. Aspirer l&#39;excès d&#39;eau. </li><li> Améliorer le signal ligase en appliquant 25 uL du mélange réactionnel sans VACC TOPO et l&#39;oligonucléotide 1, mais contenant l&#39;oligonucléotide 3: 66 mM Tris-HCl, pH 7,5, MgCl2 5 mM, 0,1 mM dithioérythritol, ATP 1 mM, et de polyéthylène glycol de 15% 8000, 5 unités de T4 ADN ligase, 35 mg / ml Oligonucleotide 3 (en épingle à cheveux à bouts francs). Le volume total de la solution d&#39;étiquetage can être élargi pour accueillir les sections plus grandes. Incuber pendant 18 heures (une nuit) à la température ambiante (23 ° C) dans une chambre humidifiée avec une lamelle de plastique. </li><li> Retirez délicatement par des lamelles immergeant la coulisse verticalement dans un bocal contenant de l&#39;eau Coplin à température ambiante. Puis, lavez la section 3x10 min dans de l&#39;eau distillée. </li><li> Rincer avec un tampon de bicarbonate de sodium. Solution alcaline rincez améliore fluorescence FITC, qui est sensible au pH et est considérablement réduite en dessous de pH 7. </li><li> Couvrir la section avec une solution antidécoloration (Vectashield avec DAPI), la lamelle et d&#39;analyser le signal en utilisant un microscope à fluorescence. Cassures de l&#39;ADN double-brin avec une fluorescence verte 5&#39;OH, 5&#39;PO 4 pauses - une fluorescence rouge (figure 2). </li></ol> 4. Les résultats représentatifs <img alt="Figure 2." src="/files/ftp_upload/3628/3628fig2.jpg" /> Figure 1. Semi-artificielle machine moléculaire détecte deux types deDommages à l&#39;ADN in situ. La machine fluorescente s&#39;auto-assemble en VACC TOPO se lie à l&#39;épingle double-32-Mer. La machine commence à fonctionner en se divisant en deux unités de détection par la topo-isomérase fait coupé à l&#39;extrémité 3 &#39;de la séquence de reconnaissance. Il en résulte un processus cyclique où l&#39;unité marquée au FITC sépare en continu et religates revenir à la marqué à la rhodamine unité. Cette persiste jusqu&#39;à une cassure de l&#39;ADN détectable est rencontré. Quand un tel accepteurs alternatifs (5&#39;OH pause émoussé l&#39;ADN de fin) est présent dans la section de tissu, la partie sera FITC ligaturer à elle. La partie restante sera la rhodamine attacher à 5 &#39;PO 4 cassures de l&#39;ADN extrémité émoussée avec l&#39;aide de l&#39;ADN ligase T4. En conséquence, deux types de cassures de l&#39;ADN sont détectés simultanément. <img alt="Figure 1." src="/files/ftp_upload/3628/3628fig1.jpg" /> Figure 2. Étiquettes machine moléculaire double de deux types de cassures de l&#39;ADNdans une section de tissu de dexaméthasone-traitée thymus. Cassures de l&#39;ADN à extrémité franche de DNase I et de type DNase II sont détectés dans les zones corticales thymiques en apoptose. Vert fluorescence cytoplasmique (5&#39;OH cassures de l&#39;ADN) des marques macrophages corticale digérer des matières nucléaires de thymocytes apoptotiques. Ce signal est produit par VACC TOPO, et se localise dans phagolysosomes avec de l&#39;ADN contenant 5&#39;OH cassures double brin 11,12. Fluorescence rouge (5&#39;PO 4 pauses) des noyaux de thymocytes apoptotiques étiquettes n&#39;est pas englouti par les macrophages. Un très grand nombre de thymocytes simultanément apoptose accompagné génération de 5&#39;PO 4 cassures double brin, visualisés par ligase étiquetage basé. Ces pauses sont situés à la périphérie du noyau, formant motifs en forme d&#39;anneau. Tous les noyaux cellulaires sont visualisés par une contre-coloration au DAPI (fluorescence bleue).

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</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Dans cette vidéo, nous démontrons comment assembler et à utiliser un capteur à double marquage de l&#39;ADN des dommages. Le capteur est une machine moléculaire tirée par la bio-moléculaires moteur, un virus protéine codée VACC TOPO liés à des composants artificiels. Le développement a présenté illustre une approche bio-permis qui prône l&#39;adaptation des structures biologiques, des architectures et des pièces réelles et des composants de cellules à la conception des dispositifs de non-toxique à l&#39;échelle molécula...

<ol><li> Xylène </li><li> 80 et 96% d&#39;éthanol. </li><li> Solution à 2% d&#39;albumine sérique bovine (BSA) dans l&#39;eau distillée. </li><li> Oligonucleotide 1: une épingle double, double marqués à la fluorescéine et tétraméthylrhodamine: </li></ol> 5&#39;-AAG GGA CCT GC F GCA GGT CCC TTA ACG CAT R AT GCG TT-3 &#39;; F - FITC-dT, R - tétraméthylrhodamine-dT. Autres décalée vers le rouge des fluorophores tels que BODIPY TR, la rhodamine ou TAMRA peut être utilisé au lieu de tétraméthylrhodamine que R. Sinon, vous pouvez utiliser deux oligonucléotides. - Un simple double-épingle marqués à la fluorescéine (pour la détection d&#39;un seul type de cassures de l&#39;ADN (DNase II de type seulement) La sonde unique fluorophore comptable est nettement moins cher et c&#39;est très pratique quand une seule type de cassure de l&#39;ADN doit être étiqueté: 5&#39;-AAG GGA CCT GC F GCA GGT CCC TTA ACG CAT ATG CGT T-3 &#39;; F - FITC-dT </p&gt; <ol start="5"><li> Oligonucléotide 3. Blunt-clos marqué à la rhodamine en épingle à cheveux pour l&#39;amélioration du signal de la ligature en place avec l&#39;ADN ligase T4: 5&#39;-GCG CTA GAC C R G GTC TAG CGC-3 &#39;; R - tétraméthylrhodamine-dT </li><li> Vaccinia ADN topoisomérase l (VACC TOPO) - 3000 U / uL (Technologies Vivid). Dans les expériences initiales, nous avons utilisé 215 pmoles (7,1 ug) de l&#39;TOPO VACC par tous les uL 25 du mélange de réaction. Toutefois, la concentration topoisomérase peuvent être considérablement réduits sans perte de sensibilité. Nous avons ensuite utilisé une quantité quatre fois moindre de VACC TOPO par section (1,76 g dans 25 uL du mélange réactionnel par section) avec des résultats similaires. Réduire le montant de l&#39;enzyme à 880 ng (dans 25 uL du mélange de réaction) ont abouti à un signal plus faible et de 8,8 ng d&#39;VACC TOPO produit aucun signal détectable. </li><li> T4 ADN ligase 5 U / uL (Roche). Cette préparation très concentrée ligase donne le meilleur signal dans nos conditions expérimentales. </li&gt; <li> 10 x tampon de réaction de l&#39;ADN ligase T4: 660 mM Tris-HCl, 50 mM MgCl 2, 10 dithioérythritol mM, 10 mM d&#39;ATP, pH 7,5 (20 ° C) (Roche). ATP dans un tampon de réaction est facilement détruite dans des cycles répétitifs de dégel-gel. Aliquoter le tampon dans de petites portions de 15 à 20 uL et stocker à - 20 ° C. Utiliser une seule fois. </li><li> 30% (p / v) de PEG-8000 (Sigma) dans l&#39;eau bidistillée. 15% de PEG-8000 dans le mélange réactionnel stimule fortement la détection, l&#39;augmentation des concentrations efficaces de ses constituants par l&#39;exclusion du volume. </li><li> Protéinase K (Roche) 20 solution stock mg / mL dans de l&#39;eau distillée. Entreposer à - 20 ° C. Dans la solution d&#39;utilisation de réaction 50mg/ml dans du PBS, préparé à partir du stock. Ne pas réutiliser. </li><li> Vectashield au DAPI (Vector Laboratories). </li><li> Tampon bicarbonate de sodium: 50 M de NaHCO 3, 15m M de NaCl, pH 8,2. </li><li> De verre 22x22mm ou 22x40mm ou de lamelles de plastique. Lamelles en plastique sont préférables lors de la réaction, comme ils unere plus facile à enlever de la section. </li></ol>

assemblage in vitro de la semi-artificielle machine moléculaire et son utilisation pour la détection de lésions de l&#39;adn

In vitro Assembly of Semi-artificial Molecular Machine and its Use for Detection of DNA Damage

Naturelle bio-moléculaire des machines de travail dans chaque cellule vivante et d&#39;afficher une variété de modèles 1-6. Pourtant, le développement de centres de machines moléculaires artificielles sur des appareils capables de mouvement directionnel, c&#39;est à dire les moteurs moléculaires, et sur ​​leur échelle réduite des pièces mécaniques (roues, essieux, etc pendentifs) 7-9. Cette imite les machines macro-, même si les propriétés physiques essentielles pour ces appareils, tels que l&#39;inertie et la conservation du moment, ne sont pas utilisables dans les environnements nanomonde 10. Conceptions alternatives, qui ne suivent pas les schémas mécaniques macromachines et utiliser des mécanismes développés dans l&#39;évolution des molécules biologiques, peuvent profiter des conditions spécifiques du nanomonde. Par ailleurs, l&#39;adaptation réelle des molécules biologiques aux fins de la nano-conception permet de réduire les dangers potentiels des produits des nanotechnologies peuvent présenter. Ici nous démontrons l&#39;assemblage et l&#39;application d&#39;une telle bio-permis de construire, commeemi-artificiel appareil moléculaire, qui associe une machine naturelle moléculaire avec des composants artificiels. Du point de vue de l&#39;enzymologie, notre construction est un concepteur fluorescents complexes enzyme-substrat mis ensemble pour remplir une fonction spécifique utile. Cet ensemble est par définition une machine moléculaire, car il contient un 12. Pourtant, son intégration avec la partie ingénierie - fluorescentes épingle double - le re-dirige vers une nouvelle tâche d&#39;étiquetage 12 dommages à l&#39;ADN. Notre construire assemble d&#39;un ADN de 32-mer et d&#39;une enzyme topoisomérase I vaccine (VACC TOPO). La machine utilise alors son propre matériel pour fabriquer deux unités de détection marqués par fluorescence (figure 1). L&#39;une des unités (fluorescence verte) effectue VACC TOPO covalente à son extrémité 3 &#39;et une autre unité (fluorescence rouge) est une épingle à cheveux libres avec un 3&#39;OH terminal. Les unités sont de courte durée et rapidement montés de nouveau dans la construction d&#39;origine, qui recleaves ultérieurement.En l&#39;absence d&#39;ADN pauses ces deux unités séparées en continu et religate de façon cyclique. Dans des coupes de tissus avec des dommages à l&#39;ADN, l&#39;unité de détecteur de topoisomérase porteurs attache sélective aux cassures de l&#39;ADN à bouts francs avec 5&#39;OH (DNase II de type casse) 11,12, fluorescence leur étiquetage. La seconde, sans enzyme épingle formé après clivage oligonucléotidique, sera ligaturer à un 5&#39;PO 4 à extrémité franche rupture (DNase I type pauses) 11,12, si l&#39;ADN ligase T4 est présent dans la solution 13,14. Lorsque l&#39;ADN ligase T4 est ajouté à une coupe de tissu ou d&#39;une solution contenant de l&#39;ADN avec des 5&#39;PO 4 bouts francs pauses, la ligase réagit avec 5&#39;PO 4 extrémités d&#39;ADN, formant semi-stable enzyme-ADN. Les épingles à bouts francs vont interagir avec ces complexes libérant épingles ligase et lier de façon covalente à l&#39;ADN, ce qui étiquetage 5&#39;PO 4 cassures de l&#39;ADN à bouts francs. Ce développement illustre une nouvelle approche pratique pour ela conception électronique de machines moléculaires et offre un capteur utile pour la détection de l&#39;apoptose et endommagent l&#39;ADN dans les cellules et les tissus fixes.

Nous démontrons l&#39;assemblage et l&#39;application d&#39;un dispositif à l&#39;échelle moléculaire alimenté par une protéine topoisomérase. La construction est un capteur bio-moléculaires dont les étiquettes deux grands types de cassures de l&#39;ADN dans les coupes de tissus en attachant deux fluorophores différents à leurs extrémités.

Assemblage in vitro de la semi-artificielle machine moléculaire et son utilisation pour la détection de lésions de l&#39;ADN

Des machines biomoléculaires naturelles fonctionnent dans chaque cellule vivante et présentent une variété de conceptions 1-6. Pourtant, le développement de molécules artificielles...

L'objectif général de cette procédure est de démontrer comment assembler et utiliser un capteur d'endommagement de l'ADN à double marquage permettant d'identifier deux types majeurs de cassures de l'ADN dans des sections de tissu. Le capteur est composé d'un oligonucléotide d'ADN tumoral 30, doublement marqué avec ZI et Rumine, et d'une enzyme, la vaccinia topo isomérase 1 ou vac topo, qui s'assemble spontanément. Lorsque la vac topo se lie au tumoral 30, le fonctionnement du dispositif démarre lorsque la topo isomérase clive l'oligonucléotide à l'extrémité trois prime de la séquence de reconnaissance, produisant ainsi une unité activée de vac topo marquée Fitzy et un brin en forme d'épingle à cheveux libre marqué par une amine.Avec un hydroxyle terminal en trois-prime, les unités ont une durée de vie brève et sont rapidement réassemblées en la structure d'origine, qui est ensuite clivée. En l'absence de cassures supplémentaires dans l'ADN extra-moléculaire, ces deux unités se séparent et se réassemblent continuellement de manière cyclique. Lorsque le capteur moléculaire est appliqué à des coupes de tissu présentant des dommages à l'ADN, l'unité détectrice marquée par Fitz s'attach

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L’imagerie spectroscopique électronique permet d’imager et de distinguer l’acide nucléique de la protéine à une résolution nanométrique. Il peut être combiné avec le système miniSOG, qui est capable de marquer spécifiquement les protéines marquées dans des échantillons de microscopie électronique à transmission. Nous illustrons l’utilisation de ces technologies en utilisant des foyers de réparation de cassures double brin à titre d’exemple.

Visualisation des miniSOG protéines marquées de réparation d&#39;ADN en combinaison avec Electron imagerie spectroscopique (ESI)

Est présenté ici, un workflow automatisé pour effectuer le montage de « dispositif » ADN modulaire en utilisant une méthode d’assemblage des ADN clonage modulaire sur les robots de manutention liquide. Le protocole utilise un outil logiciel intuitif pour générer des listes déroulantes gestionnaire liquide pour combinatoire génération de bibliothèque dispositif ADN, qui nous montrent l’utilisation de deux plates-formes de manipulation de liquides.

Automatisé de robotique Liquid Handling assemblage de dispositifs modulaires ADN

Ici, il est démontré comment le dosage in situ de ligature de proximité (PLA) peut être utilisé pour détecter et visualiser les interactions directes protéines-protéines entre ATM et p53 dans des cultures de cellules en suspension exposées au stress génotoxique.

Détection et visualisation des complexes protéiques induits par endommagement de l&#39;ADN dans des cultures cellulaires en suspension utilisant l&#39;essai de ligature de proximité

Réparation des cassures double brin de l’ADN est un processus dynamique, qui exige non seulement la formation de complexes de réparation sur les sauts, mais également leur résolution après que la lésion est adressée. Ici, nous utilisons la microscopie d’immunofluorescence pour les pauses bicaténaire transitoires et de longue durée comme outil de disséquer ce mécanisme de maintenance du génome.

Caractériser les processus de réparation de l’ADN à des cassures de l’ADN bicaténaires durables et transitoires de la microscopie par Immunofluorescence

Une méthode non marqué, non-radio-isotopiques pour la relecture de l’ADN polymérase et un test de réparation de l’ADN a été développée à l’aide de haute résolution spectrométrie de masse MALDI-TOF et une stratégie d’extension de nucléotide. Le test s’est avéré être très précis, simple, rapide et facile à réaliser pour la relecture et réparer les correctifs inférieure à 9-nucléotides.

Correction d’épreuves et de test de réparation d’ADN en utilisant l’analyse de spectrométrie de masse MALDI-TOF et de nucléotide simple Extension

Cet article présente les étapes essentielles de immunoprecipitation d’immunostaining et de chromatine. Ces protocoles sont couramment utilisés pour étudier les processus cellulaires liés aux dommages à l’ADN et pour visualiser et quantifier le recrutement des protéines impliquées dans la réparation de l’ADN.

Visualisation et quantification des dommages à l’ADN spécifiques au site à base d’endonucléase

La méthodologie aide à l’analyse de la variation de la dynamique de réplication de l’ADN en présence de nanoparticules. Différentes méthodologies peuvent être adoptées en fonction du niveau de cytotoxicité du matériau d’intérêt. En outre, une description de l’analyse de l’image est fournie pour aider à l’analyse des fibres d’ADN.

Démonstration du test de fibre d’ADN pour étudier les dommages à l’ADN et la dynamique de réparation induits par les nanoparticules

Les nanomachines basées sur DNAzyme peuvent être utilisées pour la détection hautement sélective et sensible des acides nucléiques. Cet article décrit un protocole détaillé pour la conception de nanomachines basées sur DNAzyme avec un cœur de 10 à 23 à l’aide de logiciels libres et leur application dans la détection d’un fragment de virus d’Epstein-Barr à titre d’exemple.

Nanomachines à base de DNAzyme 10-23 pour la reconnaissance des acides nucléiques

Nous rapportons un ensemble hybride et un test à molécule unique pour imager et quantifier directement le mouvement de l’hélicase Cdc45/Mcm2-7/GINS (CMG) entièrement reconstituée et marquée par fluorescence sur des molécules d’ADN linéaires maintenues en place dans un piège optique.

Ensemble hybride et dosage d’une seule molécule pour imager le mouvement d’une CMG entièrement reconstituée

«E-DNA» de capteurs, sans réactif, les biocapteurs électrochimiques qui se comportent bien, même si contesté directement dans le sang et d'autres matrices complexes, ont été adaptés à la détection d'une large gamme d'acides nucléiques, de protéines et de petites molécules d'analytes. Nous présentons ici une procédure générale pour la fabrication et l'utilisation de tels capteurs.

La fabrication des électrochimique de l&#39;ADN des Biocapteurs pour la détection sans réactif d&#39;acides nucléiques, protéines et petites molécules

Découvrez l'assemblage d'un capteur moléculaire d'ADN doublement marqué utilisant la topoisomérase de vaccinia pour détecter les cassures d'ADN dans les coupes tissulaires. Cette méthode permet une visualisation précise des dommages génétiques.

Assemblage in vitro de la semi-artificielle machine moléculaire et son utilisation pour la détection de lésions de l'ADN

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