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<em>In vitro</em> Assembly of Semi-artificial Molecular Machine and its Use for Detection of DNA Damage

Naturally occurring bio-molecular machines work in every living cell and display a variety of designs 1-6. Yet the development of artificial molecular ...

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Assessing Phagocytic Clearance of Cell Death in Experimental Stroke by Ligatable Fluorescent Probes

We describe a new histochemical approach for visualization of phagocytic clearance in focal brain ischemia. The approach permits the study of elimination ...

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Assessment of DNase Activity by Ratiometric Fluorescence Resonance Energy Transfer

The present protocol describes a simple and sensitive ratiometric F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) assay for the detection and quantitative ...

Baylor College of Medicine 

Michael E. DeBakey Veterans Affairs Medical Center

Baylor College of Medicine

&#x867D;&#x7136;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5DF2;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x5236;&#x4F5C;&#x65B0;&#x751F;&#x5927;&#x9F20;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6027;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x8FD9;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x5728;&#x6210;&#x4EBA;&#x8111;&#x5C40;&#x7076;&#x6027;&#x7F3A;&#x8840;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x5E76;&#x4E0D;&#x660E;&#x663E;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x5728;&#x6210;&#x5E74;&#x5927;&#x9F20;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#x6781;&#x4F4E;&#x3002;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x662F;&#x5426;&#x6267;&#x884C;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x6C38;&#x4E45;&#x6027;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x635F;&#x5BB3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210; DNA &#x788E;&#x7247;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5C31;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;-3 &#x548C;-&#x5C40;&#x7076;&#x6027;&#x8111;&#x6897;&#x6B7B;&#x7684;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x3002;

Although extensive caspase-3 activation has been demonstrated in experimental brain ischemia produced in neonatal rat, the role this caspase plays in the focal ischemia of adult brain is not clear, as the levels of caspase-3 in adult rat brain are extremely low. This raises the question whether caspase-3 synthesis and activation are essential for execution of the apoptotic program and DNA fragmentation in permanent brain ischemia, a condition that impairs cellular protein synthesis.

Caspase-3-dependent and -independent apoptosis in focal brain ischemia.

Bien que vaste caspase-3 activation a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9;e dans l&#x26;#39;isch&#xE9;mie c&#xE9;r&#xE9;brale exp&#xE9;rimentale chez le rat nouveau-n&#xE9; produit, le r&#xF4;le de cette caspase joue dans l&#x26;#39;isch&#xE9;mie focale du cerveau adulte n&#x26;#39;est pas clair, que les niveaux de la caspase-3 dans le cerveau de rat adulte sont extr&#xEA;mement faibles. Cela soul&#xE8;ve la question de savoir si la caspase-3 de synth&#xE8;se et d&#x26;#39;activation sont essentielles pour l&#x26;#39;ex&#xE9;cution du programme apoptotique et fragmentation de l&#x26;#39;ADN dans l&#x26;#39;isch&#xE9;mie c&#xE9;r&#xE9;brale permanente, une condition qui affecte la synth&#xE8;se des prot&#xE9;ines cellulaires.

Caspase-3-d&#xE9;pendante et ind&#xE9;pendante de l&#x26;#39;apoptose dans l&#x26;#39;isch&#xE9;mie c&#xE9;r&#xE9;brale focale

Caspase-3-abh&#xE4;ngige und-unabh&#xE4;ngige Apoptose bei fokaler Isch&#xE4;mie im Gehirn.

Sebbene estesa attivazione di caspase-3 ha dimostrato nell&#39;ischemia cerebrale sperimentale prodotta nel ratto neonatale, il ruolo che svolge questo caspase nei ischemia focale del cervello adulto non &egrave; chiaro, come i livelli di caspase-3 nel cervello del ratto adulto sono estremamente bassi. Questo solleva la questione se caspase-3 sintesi e attivazione sono essenziali per l&#39;esecuzione del programma di apoptosi e frammentazione del DNA in ischemia cerebrale permanente, una condizione che altera la sintesi delle proteine cellulari.

Dipendente dalla caspasi-3 e - indipendente apoptosis in ischemia cerebrale focale.

&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x3067;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x6210;&#x4F53;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;3&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;&#x6975;&#x3081;&#x3066;&#x4F4E;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x8133;&#x306E;&#x5C40;&#x6240;&#x7684;&#x865A;&#x8840;&#x306B;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x660E;&#x78BA;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3068;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x6C38;&#x4E45;&#x7684;&#x306A;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3068;DNA&#x65AD;&#x7247;&#x5316;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C40;&#x6240;&#x6027;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC;-3&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;

&#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; caspase 3 &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xC2E0;&#xC0DD;&#xC544; &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801; &#xB1CC; &#xD5C8; &#xD608;&#xC5D0; caspase 3&#xC740; &#xC131;&#xC778; &#xC950; &#xB450;&#xB1CC;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740;&#xC774; caspase &#xC131;&#xC778; &#xB1CC;&#xC758; &#xCD08;&#xC810; &#xD5C8; &#xD608;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xBD84;&#xBA85;, &#xC99D;&#xBA85;. &#xC774; caspase 3 &#xD569;&#xC131;&#xACFC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; apoptotic &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xACFC; &#xC601;&#xAD6C;&#xC801;&#xC778; &#xB1CC; &#xD5C8; &#xD608;, &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC190;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xD30C;&#xD3B8;&#xC758; &#xC2E4;&#xD589;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218; &#xC778;&#xC9C0; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xC81C;&#xAE30;.

Caspase 3 &#xC885;&#xC18D; &#xBC0F;-&#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; apoptosis &#xCD08;&#xC810; &#xB1CC; &#xD5C8; &#xD608;&#xC5D0;.

A pesar de una amplia activaci&#xF3;n de la caspasa-3 se ha demostrado en la isquemia cerebral experimental producida en ratas reci&#xE9;n nacidas, el papel que esta juega en la caspasa isquemia focal del cerebro adulto no est&#xE1; clara, ya que los niveles de caspasa-3 en el cerebro de rata adulta son extremadamente bajos. Esto plantea la cuesti&#xF3;n de si la caspasa-3 y la activaci&#xF3;n de la s&#xED;ntesis son esenciales para la ejecuci&#xF3;n del programa de apoptosis y fragmentaci&#xF3;n del ADN en la isquemia cerebral permanente, una afecci&#xF3;n que altera la s&#xED;ntesis de prote&#xED;nas celulares.

Caspasa-3-dependiente y independiente de la apoptosis en la isquemia cerebral focal

&#x5E73;&#x6ED1;&#x672B;&#x7AEF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;DNA&#x5207;&#x65AD;&#x306F;&#x3001;DNA&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3084;&#x58CA;&#x6B7B;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x640D;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x306F;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x53D6;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x306E;&#x3064;&#x304B;&#x306A;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5E73;&#x6ED1;&#x672B;&#x7AEF;DNA&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x6A19;&#x8B58;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5C40;&#x6240;&#x6027;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5834;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x304C;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30C0;&#x30D6;&#x30EB;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x5E73;&#x6ED1;&#x672B;&#x7AEF;DNA&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x6A19;&#x8B58;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8133;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x4E0D;&#x80FD;&#x306A;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;

&#x949D;&#x5668;&#x4E24;&#x7AEF;&#x4E3A;&#x53CC;&#x94FE; DNA &#x65AD;&#x88C2;&#x8868;&#x793A;&#x6700;&#x4E25;&#x91CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684; DNA &#x635F;&#x4F24;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x80FD;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x4FEE;&#x590D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6216;&#x574F;&#x6B7B;&#x4E2D;&#x751F;&#x6210;&#x548C;&#x4E0D;&#x6B63;&#x5E38;&#x6216;&#x77AC;&#x6001;&#x53D7;&#x635F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4F5C;&#x7684;&#x65E0;&#x6CD5;&#x633D;&#x56DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4F30;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x4F7F;&#x7528;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8D34;&#x6807;&#x949D;&#x7ED3;&#x675F; DNA &#x65AD;&#x88C2;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x6807;&#x5FD7;&#x7269;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x5141;&#x8BB8;&#x8FD9;&#x79CD;&#x539F;&#x4F4D;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x65B0;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x5927;&#x8111;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x53CC;&#x94FE;&#x949D;&#x7ED3;&#x675F; DNA &#x65AD;&#x88C2;&#x65E0;&#x6CD5;&#x5F25;&#x8865;&#x7F3A;&#x8840;&#x6027;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;

Double-strand DNA breaks with blunt ends represent the most serious type of DNA damage, and cannot be efficiently repaired by cells. They are generated in apoptosis or necrosis and are absent in normal or transiently damaged cells. Consequently, they can be used as a molecular marker of irreparable cellular damage. We evaluated the effects of focal brain ischemia using selective labeling of blunt-ended DNA breaks as a marker of irreversible tissue damage. A new approach permitting such analysis in situ is introduced.

Visualization of irreparable ischemic damage in brain by selective labeling of double strand blunt-ended DNA breaks.

Cassures de l&#x26;#39;ADN double-brin avec des extr&#xE9;mit&#xE9;s franches repr&#xE9;sentent le type le plus grave de dommages &#xE0; l&#x26;#39;ADN, et ne peuvent pas &#xEA;tre efficacement r&#xE9;par&#xE9;s par les cellules. Elles sont g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es dans l&#x26;#39;apoptose ou la n&#xE9;crose et sont absents dans les cellules normales ou transitoire endommag&#xE9;. Par cons&#xE9;quent, ils peuvent &#xEA;tre utilis&#xE9;s comme un marqueur mol&#xE9;culaire des dommages cellulaires irr&#xE9;versibles. Nous avons &#xE9;valu&#xE9; les effets d&#x26;#39;une isch&#xE9;mie c&#xE9;r&#xE9;brale focale &#xE0; l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;&#xE9;tiquetage s&#xE9;lectif des cassures de l&#x26;#39;ADN &#xE0; extr&#xE9;mit&#xE9; franche comme un marqueur des l&#xE9;sions tissulaires irr&#xE9;versibles. Une nouvelle approche permettant une telle analyse in situ est introduit.

Visualisation des dommages irr&#xE9;parables au cerveau isch&#xE9;mique par marquage s&#xE9;lectif des cassures double brin d&#x26;#39;ADN &#xE0; extr&#xE9;mit&#xE9; franche

Visualisierung von irreparablen isch&#xE4;mische Sch&#xE4;digung des Gehirns durch selektive Markierung von Doppelstrang-DNA mit stumpfen Enden bricht.

Rotture del DNA double-strand con estremit&agrave; smussata rappresentano il tipo pi&ugrave; grave danni al DNA e non possono essere riparati in modo efficiente da parte delle cellule. Essi sono generati in apoptosi o necrosi e sono assenti in normale o transitoriamente cellule danneggiate. Di conseguenza, pu&ograve; essere utilizzati come marcatore molecolare di irreparabili danni cellulari. Abbiamo valutato gli effetti dell&#39;ischemia cerebrale focale mediante etichettatura selettiva delle rotture del DNA smussato-conclusa come marker di danno tissutale irreversibile. &Egrave; stato introdotto un nuovo approccio che consenta tale analisi in situ.

Visualizzazione di irreparabile danno ischemico nel cervello di etichettatura selettiva di double strand breaks DNA smussato-conclusa.

&#xBB34;&#xB518; &#xB05D;&#xACFC; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xB098;&#xB204;&#xAE30; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xC885;&#xB958;&#xC758; DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xBA70; &#xC140;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; apoptosis &#xB610;&#xB294; &#xAD34; &#xC0AC; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xC815;&#xC0C1; &#xB610;&#xB294; transiently&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC190;&#xC0C1;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC190;&#xC0C1; &#xBD84;&#xC790; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC870;&#xC9C1; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; DNA &#xB098;&#xB204;&#xAE30; &#xBE14;&#xB7F0;&#xD2B8; &#xC885;&#xB2E8;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD08;&#xC810; &#xB1CC; &#xD5C8; &#xD608;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC811;&#xADFC;&#xC740; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; DNA &#xB098;&#xB204;&#xAE30; &#xBE14;&#xB7F0;&#xD2B8; &#xC885;&#xB2E8;&#xC758; &#xB77C;&#xBCA8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB1CC;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

Hebra doble de ADN se rompe con extremos romos representan el tipo m&#xE1;s grave de da&#xF1;o en el DNA, y no pueden ser eficazmente reparado por las c&#xE9;lulas. Se generan en la apoptosis o necrosis y est&#xE1;n ausentes en las c&#xE9;lulas normales o da&#xF1;ado de forma transitoria. En consecuencia, se puede utilizar como un marcador molecular de da&#xF1;o celular irreparable. Se evaluaron los efectos de la isquemia cerebral focal utilizando el etiquetado selectivo de roturas en el ADN de extremos romos como un marcador de da&#xF1;o irreversible del tejido. Un nuevo enfoque que permite el an&#xE1;lisis in situ como se introduce.

Visualizaci&#xF3;n de un da&#xF1;o irreparable en el cerebro isqu&#xE9;mico, mediante el etiquetado selectivo de roturas de doble cadena de ADN de extremos romos

&#x4EBA;&#x5DE5;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5668;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x662F;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5728; macromachines &#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x4E0D;&#x5BB9;&#x6613;&#x7EB3;&#x7C73;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x9002;&#x5E94;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6784;&#x9020;&#x4E00;&#x4E2A;&#x534A;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x7F16;&#x7801;&#x81EA;&#x7136;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x4E00;&#x75D8;&#x82D7;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x81EA;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x6784;&#x9020;&#x4F7F;&#x5F97;&#x4E24;&#x53F0;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5668;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x80FD;&#x591F;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684; DNA &#x65AD;&#x88C2;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5B9E;&#x7528;&#x5206;&#x5B50;&#x5668;&#x4EF6;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

DNA &#x635F;&#x4F24;&#x68C0;&#x6D4B;&#x534A;&#x81EA;&#x52A8;&#x5316;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5668;&#x3002;

The design of artificial molecular machines is complicated because the mechanics used in macromachines is not readily adaptable for nano environments. We constructed a semi-artificial molecular device, which contains a naturally occurring molecular machine-a vaccinia virus encoded protein-linked with an artificial part. The self-assembled construct makes two fluorescently labeled detector units. It is the first sensor capable of selectively detecting different types of DNA breaks, exemplifying a practical approach to the design of molecular devices.

Semi-artificial Fluorescent Molecular Machine for DNA Damage Detection.

La conception de machines mol&#xE9;culaires artificielles est compliqu&#xE9;e parce que les m&#xE9;caniciens utilis&#xE9;s dans macromachines n&#x26;#39;est pas ais&#xE9;ment adaptable pour les environnements nano. On construit un dispositif semi-artificiel mol&#xE9;culaire, qui contient une origine naturelle mol&#xE9;culaire machine une prot&#xE9;ine cod&#xE9;e par le virus de la vaccine-li&#xE9;e &#xE0; une partie artificielle. La construction auto-assembl&#xE9;s fait deux unit&#xE9;s de d&#xE9;tection marqu&#xE9;s par fluorescence. Il est le premier capteur capable de d&#xE9;tecter de fa&#xE7;on s&#xE9;lective les diff&#xE9;rents types de cassures de l&#x26;#39;ADN, ce qui illustre une approche pratique pour la conception de dispositifs mol&#xE9;culaires.

Semi-artificielle machine mol&#xE9;culaire fluorescent pour la d&#xE9;tection de l&#x26;#39;ADN des dommages

Die Gestaltung des k&uuml;nstlichen molekulare Maschinen ist kompliziert, weil die Mechanik verwendet in Macromachines nicht leicht anpassbar f&uuml;r Nano-Umgebungen ist. Konstruierten wir ein semi-artificial Molekulare Ger&auml;t, enth&auml;lt einen nat&uuml;rlich vorkommendes molekulare Maschine-a des Vaccinia Virus kodiert Protein-verbunden mit einem k&uuml;nstlichen Teil. Das zusammengebauten Konstrukt macht zwei Leuchtstoff beschriftetem Detektor-Einheiten. Es ist der erste Sensor gezielt Aufsp&uuml;ren von verschiedene Arten von DNA-Br&uuml;chen, Beispiel f&uuml;r einen praktischen Ansatz f&uuml;r die Gestaltung von molekularen Ger&auml;te.

Semi-Artificial fluoreszierenden molekulare Maschine f&uuml;r DNA-Sch&auml;den-Erkennung.

La progettazione di macchine molecolari artificiali &egrave; complicata perch&eacute; la meccanica utilizzata in macromachines non &egrave; facilmente adattabile per ambienti nano. Abbiamo costruito un dispositivo molecolare semi-artificial, che contiene un virus vaccinia una macchina molecolare naturale codificato proteina legata con una parte artificiale. Il costrutto autoassemblano rende due unit&agrave; rivelatore fluorescente contrassegnati. &Egrave; il primo sensore in grado di rilevare selettivamente diversi tipi di rotture del DNA, esemplificando un approccio pratico alla progettazione di dispositivi molecolari.

Semi-Artificial fluorescente macchina molecolare per il rilevamento di danni del DNA.

macromachines&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x529B;&#x5B66;&#x3001;&#x30CA;&#x30CE;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x304C;&#x8907;&#x96D1;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5929;&#x7136;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x68B0; - &#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x306A;&#x90E8;&#x5206;&#x3067;&#x30EF;&#x30AF;&#x30B7;&#x30CB;&#x30A2;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x534A;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x5206;&#x5B50;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x691C;&#x51FA;&#x5668;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306B;&#x5B9F;&#x7528;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F8B;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3001;DNA&#x5207;&#x65AD;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

DNA&#x640D;&#x50B7;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x534A;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x7684;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x30DE;&#x30B7;&#x30F3;

Macromachines&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xB098;&#xB178; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC801;&#xC751;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC778;&#xACF5; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4;&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC740; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAC74;&#xC124; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC778; &#xBD84;&#xC790; &#xC7A5;&#xCE58; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; &#xC790;&#xC5F0;&#xC2A4;&#xB7FD; &#xAC8C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4;&#xB294; vaccinia &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC778;&#xACF5; &#xBD80;&#xD488; &#xC5F0;&#xACB0;. &#xC870;&#xB9BD;&#xB41C; &#xAD6C;&#xC870; &#xB450; &#xBD99;&#xC77C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xB41C; &#xAC10;&#xC9C0;&#xAE30; &#xB2E8;&#xC704;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E0;&#xB2E4;. &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; DNA &#xB098;&#xB204;&#xAE30;, &#xBD84;&#xC790; &#xC18C;&#xC790;&#xC758; &#xC124;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC801;&#xC778; &#xC811;&#xADFC; &#xC608;&#xC99D;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC13C;&#xC11C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

DNA &#xC190;&#xC0C1; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xACC4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El dise&#xF1;o de m&#xE1;quinas moleculares artificiales es complicado porque los mec&#xE1;nicos utilizados en macromachines no es f&#xE1;cilmente adaptable a entornos nano. Se construy&#xF3; un dispositivo molecular semi-artificial, que contiene un origen natural molecular m&#xE1;quina un virus vaccinia codificada prote&#xED;na ligada con una parte artificial. La construcci&#xF3;n de auto-ensamblado hace dos marcados con fluorescencia unidades detectoras. Es el primer sensor capaz de detectar selectivamente diferentes tipos de roturas en el ADN, que ejemplifica un enfoque pr&#xE1;ctico para el dise&#xF1;o de dispositivos moleculares.

Semi-artificial, m&#xE1;quina fluorescente molecular para la detecci&#xF3;n de da&#xF1;os en el ADN

&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#xFF0C;&#x5728;&#x521D;&#x59CB;&#x9AF9;&#x7684;&#x81EA;&#x6740;&#x9636;&#x6BB5;&#x751F;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5C38;&#x4F53;&#xFF0C;&#x800C;&#x5728;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x5E9F;&#x7269;&#x7BA1;&#x7406;&#x9636;&#x6BB5;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E13;&#x4E1A;&#x548C;&#x4E1A;&#x4F59;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x541E;&#x566C;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x6D88;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x6837;&#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x4FDD;&#x5F7B;&#x5E95;&#x6D88;&#x9664;&#x901A;&#x5E38;&#x5305;&#x542B;&#x75C5;&#x7406;&#x3001; &#x75C5;&#x6BD2;&#x6216;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x6750;&#x6599;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x541E;&#x566C;&#x9636;&#x6BB5;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x6267;&#x884C;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x6709;&#x51E0;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7279;&#x522B;&#x9002;&#x5408;&#x4E8E;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x90E8;&#x5206;&#x683C;&#x5F0F;&#x53CA;&#x5176;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;&#x8981;&#x89E3;&#x51B3;&#x6B64;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x65B0;&#x8367;&#x5149;&#x63A2;&#x9488;&#x539F;&#x4F4D;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x8FDB;&#x884C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x5904;&#x7406;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6CBF;&#x88AD;&#x79EF;&#x6781;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x4E13;&#x4E1A;&#x3001; &#x4E1A;&#x4F59;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EC6;&#x80DE;) &#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x548C;&#x6D88;&#x5316;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7EC6;&#x80DE; DNA&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8367;&#x5149;&#x63A2;&#x9488;&#x90FD;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&quot;&#x8D77;&#x59CB;&quot;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x62D3;&#x6251;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x9176; DNA &#x4E2D;&#x95F4;&#x4F53;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; II &#x5288;&#x88C2;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4E13;&#x95E8;&#x5728;&#x541E;&#x566C;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x53D1;&#x751F;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6D88;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x8D1F;&#x8D23;&#x5B9E;&#x9645;&#x6267;&#x884C;&#x7684;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C38;&#x4F53;&#x541E;&#x566C;&#x964D;&#x89E3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x53D1;&#x751F;&#x7BA1;&#x7406;&#x5355;&#x5143;&#x62CD;&#x6444;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x4E86;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x53CD;&#x5E94;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x80F8;&#x817A;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5207;&#x7247;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x7684;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x6027;&#x8D28;&#x3001; &#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178; II &#x578B;&#x7B26;&#x5C5E;&#x6027;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x5176;&#x4E2D;&#x6B7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x95F4;&#x9699;&#x662F;&#x5FC5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x5C11;&#x7684;&#x5982;&#x764C;&#x75C7;&#x3001; &#x708E;&#x75C7;&#x3001; &#x611F;&#x67D3;&#x548C;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x63A2;&#x9488;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF1A; &#x62D3;&#x6251;&#x5F02;&#x6784;&#x9176;&#x548C; DNA &#x7684;&#x9176;-&#x5E95;&#x7269;&#x7EDC;&#x5408;&#x7269;&#x3002;

In apoptosis, the initial self-driven suicide phase generates cellular corpses which are digested in the phagolysosomes of professional and amateur phagocytes during the subsequent waste-management phase. This ensures the complete elimination of the genetic material which often contains pathological, viral or cancerous DNA sequences. Although the phagocytic phase is critical for the efficient execution of apoptosis, there are currently few methods specifically adapted for its detailed visualization in the fixed tissue section format. To resolve this we developed new fluorescent probes for in situ research. The probes selectively visualize active phagocytic cells of any lineage (professional, amateur phagocytes or surrounding tissue cells) which engulf and digest apoptotic cell DNA. These fluorescent probes are the covalently-bound enzyme-DNA intermediates produced in a topoisomerase reaction with specific "starting" oligonucleotides. They detect a specific marker of DNase II cleavage activity, which occurs exclusively in phagolysosomes of the cells that engulfed apoptotic nuclei. The probes provide snap-shot images of the digestion process occurring in cellular organelles responsible for the actual execution of phagocytic degradation of apoptotic cell corpses. We applied the probes for visualization of the phagocytic reaction in tissue sections of normal thymus and in several human lymphomas. We also discuss the nature, stability and properties of DNase II-type breaks as a marker of phagocytic activity. This development provides a useful fluorescent tool for studies of pathologies where clearance of dying cells is essential, such as cancers, inflammation, infection and auto-immune disorders.

Fluorescent probes detecting the phagocytic phase of apoptosis: enzyme-substrate complexes of topoisomerase and DNA.

Dans l&#x26;#39;apoptose, la phase initiale de suicide auto-pilot&#xE9; g&#xE9;n&#xE8;re cadavres cellulaires qui sont dig&#xE9;r&#xE9;s dans les phagolysosomes des phagocytes professionnels et amateurs au cours de la suite de gestion des d&#xE9;chets de phase. Cela garantit l&#x26;#39;&#xE9;limination compl&#xE8;te du mat&#xE9;riel g&#xE9;n&#xE9;tique qui contient souvent des s&#xE9;quences d&#x26;#39;ADN pathologiques, virale ou canc&#xE9;reuse. Bien que la phase phagocytaire est essentiel &#xE0; la bonne ex&#xE9;cution de l&#x26;#39;apoptose, il ya actuellement peu de m&#xE9;thodes sp&#xE9;cifiquement adapt&#xE9;es pour la visualisation d&#xE9;taill&#xE9;e dans le format de section du tissu fix&#xE9;. Pour r&#xE9;soudre ce que nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; de nouvelles sondes fluorescentes pour la recherche in situ. Les sondes de mani&#xE8;re s&#xE9;lective les cellules phagocytaires visualiser actifs de toute la lign&#xE9;e (professionnels, amateurs ou des cellules phagocytes tissus environnants) qui engloutissent et de l&#x26;#39;ADN condens&#xE9; cellulaire par apoptose. Ces sondes fluorescentes sont li&#xE9;s par covalence les enzymes d&#x26;#39;ADN interm&#xE9;diaires produits dans une r&#xE9;action avec la topoisom&#xE9;rase sp&#xE9;cifique de &#x26;quot;d&#xE9;part&#x26;quot; oligonucl&#xE9;otides. Ils d&#xE9;tectent un marqueur sp&#xE9;cifique de l&#x26;#39;activit&#xE9; DNase II clivage, qui se produit exclusivement dans les cellules de phagolysosomes qui ont frapp&#xE9; noyaux apoptotiques. Les sondes fournissent snap-shot images du processus de digestion produisent dans des organites cellulaires responsables de l&#x26;#39;ex&#xE9;cution effective de la d&#xE9;gradation phagocytaire des cadavres de cellules apoptotiques. On applique les sondes pour la visualisation de la r&#xE9;action phagocytaire dans des coupes tissulaires de thymus normal et dans plusieurs lymphomes humains. Nous discutons aussi de la nature, la stabilit&#xE9; et les propri&#xE9;t&#xE9;s de DNase II de type pauses comme un marqueur de l&#x26;#39;activit&#xE9; phagocytaire. Ce d&#xE9;veloppement constitue un outil utile pour les &#xE9;tudes de fluorescence pathologies o&#xF9; le d&#xE9;gagement des cellules mourantes est essentielle, tels que les cancers, l&#x26;#39;inflammation, l&#x26;#39;infection et maladies auto-immunes.

Sondes fluorescentes d&#xE9;tection de la phase phagocytaire de l&#x26;#39;apoptose: enzyme-substrat Complexes de la topoisom&#xE9;rase et l&#x26;#39;ADN

Die anf&auml;ngliche selbstregelnden Selbstmord-Phase generiert in Apoptosis zellul&auml;re Leichen, die in der nachfolgenden Phase der Abfallwirtschaft in der Phagolysosomes von Profi- und Amateursport Fresszellen verdaut werden. Dies gew&auml;hrleistet die vollst&auml;ndige Beseitigung des genetischen Materials der oft pathologische, virale oder Krebs-DNA-Sequenzen enth&auml;lt. Obwohl die phagozytische Phase entscheidend f&uuml;r die effiziente Ausf&uuml;hrung von Apoptosis ist, gibt es derzeit einige Methoden, die speziell f&uuml;r die detaillierte Visualisierung im festen Gewebe Abschnitt Format. Um dieses Problem zu beheben haben wir neue fluoreszierende Sonden f&uuml;r in-situ Forschung entwickelt. Die Sonden selektiv visualisieren aktive phagozytische Zellen Verwandtschaftsgruppe (professionelle, Amateur Fresszellen oder umliegenden Gewebezellen) die verschlingen und verdauen Apoptotic Zelle DNA. Die fluoreszierenden Sonden sind die kovalent gebundene Enzym-DNA-Zwischenprodukte in eine Topoisomerase-Reaktion mit bestimmten &quot;Start&quot; Oligonukleotide hergestellt. Sie erkennen eine spezifische Markierung der DNase II Schneidefunktion, die ausschlie&szlig;lich in Phagolysosomes der Zellen vorkommt, die Apoptotic Kerne einh&uuml;llte. Die Sonden bieten Momentaufnahme-Bilder von der Verdauung-Proze&szlig; im zellularen Organellen f&uuml;r die tats&auml;chliche Ausf&uuml;hrung phagozytische Verschlechterung der apoptotischen Zelle Leichen verantwortlich. Wir angewandt die Sonden zur Visualisierung der phagozytische Reaktion im Gewebe Abschnitte des normalen Thymus und in mehreren menschlichen Lymphome. Wir diskutieren auch die Natur, die Stabilit&auml;t und die Eigenschaften der DNase-Typ-II-Pausen als eine Markierung der phagozytische Aktivit&auml;t. Diese Entwicklung stellt ein n&uuml;tzliches fluoreszierende f&uuml;r Studien von Pathologien wo Abfertigung der sterbende Zellen entscheidend, wie Krebs, Entz&uuml;ndung, Infektion und Auto-immun-Erkrankungen ist.

Fluoreszierende Sonden erkennen die phagozytische Phase der Apoptose: Enzym-Substrat-komplexen Topoisomerase und DNA.

Nell&#39;apoptosi, la fase iniziale suicidio autoazionati genera corpi cellulari che sono digeriti nel phagolysosomes dei fagociti professionali e amatoriali durante la successiva fase di gestione dei rifiuti. Questo assicura la completa eliminazione del materiale genetico che contiene spesso sequenze di DNA patologiche, virale o cancerose. Sebbene la fase fagocitaria &egrave; critica per l&#39;esecuzione efficiente di apoptosi, attualmente esistono alcuni metodi specificamente adattati per la sua visualizzazione dettagliata in formato sezione tessuto fisso. Per risolvere questo problema abbiamo sviluppato nuove sonde fluorescenti per la ricerca in situ. Le sonde di visualizzare selettivamente cellule fagocitiche attive di qualsiasi lignaggio (professionale, amatoriale fagociti o cellule del tessuto circostante) che inglobano e digeriscono apoptotic delle cellule DNA. Queste sonde fluorescenti sono intermedi associati a legame covalente enzima-DNA prodotti in una reazione di topoisomerasi con specifici oligonucleotidi &quot;partenza&quot;. Rilevano un marcatore specifico di attivit&agrave; di clivaggio dnasi II, che si verifica esclusivamente in phagolysosomes delle cellule che inghiott&igrave; i nuclei apoptotic. Le sonde di fornire immagini di snap-shot del processo di digestione che si verificano in organelli cellulari responsabili per l&#39;esecuzione effettiva della degradazione fagocitaria dei cadaveri delle cellule apoptotic. Abbiamo applicato le sonde per la visualizzazione della reazione fagocitaria in sezioni di tessuto di timo normale e in diversi linfomi umani. Discutiamo anche la natura, la stabilit&agrave; e la propriet&agrave; di interruzioni di dnasi II-tipo come un marcatore di attivit&agrave; fagocitaria. Questo sviluppo fornisce un utile strumento fluorescente per gli studi di patologie dove la liquidazione delle cellule morenti &egrave; essenziale, quali tumori, infiammazioni, infezioni e malattie autoimmuni.

Fluorescente sonde di rilevamento della fase fagocitaria dell&#39;apoptosi: complessi enzima-substrato della topoisomerasi e DNA.

&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x4E3B;&#x5C0E;&#x578B;&#x306E;&#x81EA;&#x6BBA;&#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x5EC3;&#x68C4;&#x7269;&#x7BA1;&#x7406;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x30D7;&#x30ED;&#x3068;&#x30A2;&#x30DE;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A2;&#x306E;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x6D88;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6B7B;&#x4F53;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x3001;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x764C;&#x306E;DNA&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x907A;&#x4F1D;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x98DF;&#x6BB5;&#x968E;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x57F7;&#x884C;&#x304C;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306F;&#x7279;&#x306B;&#x56FA;&#x5B9A;&#x7D44;&#x7E54;&#x5207;&#x7247;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3057;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x5834;&#x3067;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x8CAA;&#x98DF;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x30D7;&#x30ED;&#x3001;&#x30A2;&#x30DE;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A2;&#x98DF;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x3080;&#x3068;&#x30C0;&#x30A4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30B9;&#x30C8;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;DNA&#x3002;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E; &#x26;quot;&#x958B;&#x59CB;&#x26;quot;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30C8;&#x30DD;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3067;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x5171;&#x6709;&#x7D50;&#x5408;&#x6027;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;-DNA&#x306E;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x6838;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x3093;&#x3060;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BD;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x3067;&#x6392;&#x4ED6;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x306E;DNase II&#x306E;&#x5207;&#x65AD;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6B7B;&#x4F53;&#x306E;&#x98DF;&#x52A3;&#x5316;&#x306E;&#x5B9F;&#x969B;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x306B;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x5C0F;&#x5668;&#x5B98;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x6D88;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B9;&#x30CA;&#x30C3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30C8;&#xB7;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x80F8;&#x817A;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x5207;&#x7247;&#x3067;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8CAA;&#x98DF;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x8CAA;&#x98DF;&#x80FD;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;DNase II&#x578B;&#x6539;&#x306E;&#x6027;&#x8CEA;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x764C;&#x3001;&#x708E;&#x75C7;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3084;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x75BE;&#x60A3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6B7B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x8CAA;&#x98DF;&#x4F4D;&#x76F8;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#xFF1A;&#x30C8;&#x30DD;&#x30A4;&#x30BD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;DNA&#x306E;&#x9175;&#x7D20; - &#x57FA;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;

Apoptosis, &#xCD08;&#xAE30; &#xC790;&#xAC00; &#xC790;&#xC0B4; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC774;&#xD6C4;&#xC758; &#xD3D0;&#xAE30;&#xBB3C; &#xAD00;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD504;&#xB85C; &#xC544;&#xB9C8;&#xCD94;&#xC5B4; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; phagolysosomes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC2DC;&#xCCB4;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB807;&#xAC8C; &#xD558;&#xBA74; &#xC885;&#xC885; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778;, &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB610;&#xB294; &#xC554; DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC81C;&#xAC70;. Phagocytic &#xC704;&#xC0C1; apoptosis&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC2E4;&#xD589;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD604;&#xC7AC; &#xD2B9;&#xBCC4;&#xD788; &#xC870;&#xC815;&#xB41C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC139;&#xC158; &#xD615;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xC751; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBC29;&#xBC95;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD615;&#xAD11; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB294; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; phagocytic &#xC140; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; (&#xD504;&#xB85C;, &#xC544;&#xB9C8;&#xCD94;&#xC5B4; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xB610;&#xB294; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC870;&#xC9C1; &#xC138;&#xD3EC;)&#xB294; &#xC544;&#xB9C8; &#xACE0; apoptotic &#xC138;&#xD3EC; DNA&#xB97C; &#xC18C;&#xD654;. &#xC774; &#xD615;&#xAD11; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; &quot;&#xC2DC;&#xC791;&quot; oligonucleotides&#xC640; topoisomerase &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#x70AD; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xD6A8;&#xC18C; DNA &#xC911;&#xAC04;&#xCCB4;. Apoptotic &#xD575;&#xC744; &#xAC00;&#xB4DD; &#xCC44;&#xC6B0;&#xACE0; &#xC140;&#xC758; phagolysosomes&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xB3C5;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; 2 &#xCC28; DNase &#xBD84;&#xC5F4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xD734;&#xB300; organelles apoptotic &#xC138;&#xD3EC; &#xC2DC;&#xCCB4; phagocytic &#xC800;&#xD558;&#xC758; &#xC2E4;&#xC81C; &#xC2E4;&#xD589;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xD654; &#xACFC;&#xC815;&#xC758; &#xC2A4;&#xB0C5; &#xC0F7; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; thymus&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xB2E8;&#xBA74;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; lymphomas phagocytic &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC801;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; phagocytic &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC790;&#xC5F0;, &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; DNase II &#xD615; &#xBE0C;&#xB808;&#xC774;&#xD06C;&#xC758; &#xC18D;&#xC131; &#xC124;&#xBA85;. &#xC774; &#xAC1C;&#xBC1C; pathologies &#xC8FD;&#xC5B4;&#xAC00;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD074;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xB7F0;&#xC2A4;&#xB294; &#xD544;&#xC218;, &#xC554;, &#xC5FC;&#xC99D;, &#xAC10;&#xC5FC; &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC9C8;&#xD658; &#xB4F1;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; apoptosis&#xC758; phagocytic &#xC704;&#xC0C1; &#xAC80;&#xCD9C;: topoisomerase&#xC640; DNA&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C;-&#xAE30;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xC9C0;.

En la apoptosis, la primera fase de auto-impulsado por el suicidio genera cuerpos celulares que son digeridos en los fagolisosomas de los fagocitos profesionales y aficionados durante la posterior fase de gesti&#xF3;n de residuos. Esto asegura la completa eliminaci&#xF3;n del material gen&#xE9;tico que a menudo contiene secuencias de ADN patol&#xF3;gicos, virales o cancerosas. Aunque la fase fagoc&#xED;tica es cr&#xED;tico para la correcta ejecuci&#xF3;n de la apoptosis, en la actualidad hay pocos m&#xE9;todos adaptados espec&#xED;ficamente para su visualizaci&#xF3;n detallada en el formato de los tejidos secci&#xF3;n fija. Para resolver este hemos desarrollado nuevas sondas fluorescentes para la investigaci&#xF3;n in situ. Las sondas activas visualizar selectivamente las c&#xE9;lulas fagoc&#xED;ticas de cualquier linaje (los fagocitos profesionales, aficionados o rodea a las c&#xE9;lulas del tejido), que engullen y digieren el ADN de las c&#xE9;lulas apopt&#xF3;ticas. Estas sondas fluorescentes son los covalentemente enlazados a ADN-enzima intermedios producidos en una reacci&#xF3;n con la topoisomerasa espec&#xED;ficos &#x26;quot;inicial&#x26;quot; oligonucle&#xF3;tidos. Detectan un marcador espec&#xED;fico de la actividad DNasa divisi&#xF3;n II, que se produce exclusivamente en fagolisosomas de las c&#xE9;lulas en que se sumi&#xF3; n&#xFA;cleos apopt&#xF3;ticos. Las sondas ofrecen instant&#xE1;nea las im&#xE1;genes del proceso de digesti&#xF3;n que ocurre en los org&#xE1;nulos celulares encargados de la ejecuci&#xF3;n real de la degradaci&#xF3;n de los cad&#xE1;veres de fagocitosis de c&#xE9;lulas apopt&#xF3;ticas. Se aplicaron las sondas para la visualizaci&#xF3;n de la reacci&#xF3;n fagoc&#xED;tica en secciones de tejido de timo normal y en varios linfomas humanos. Tambi&#xE9;n se discute la naturaleza, la estabilidad y las propiedades de DNasa tipo II se rompe como un marcador de la actividad fagoc&#xED;tica. Este desarrollo proporciona una herramienta &#xFA;til fluorescentes para el estudio de patolog&#xED;as en las que la liquidaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas que mueren es esencial, como el c&#xE1;ncer, inflamaci&#xF3;n, infecci&#xF3;n y trastornos autoinmunes.

La detecci&#xF3;n de sondas fluorescentes de la fase fagocitaria de la apoptosis: enzima-sustrato Complejos de la topoisomerasa de ADN y

The targeted delivery of fluorescently labeled, DNA-modifying proteins into cellular nuclei permits investigation of DNA damage and chromatin function in living cells. Commercially available protein delivery vectors cannot provide selective intranuclear transportation and primarily unload their cargo in the cytoplasm. Here we describe a simple approach for specific intranuclear transportation of vaccinia topoisomerase protein based on its cationization. The delivered protein can be observed and monitored by fluorescence microscopy. The technique is cost-efficient and time-saving. It can be useful in live cell studies.

Selective transport of cationized fluorescent topoisomerase into nuclei of live cells for DNA damage studies.

We describe a new type of bio-nanomachine which runs on thermal noise. The machine is solely powered by the random motion of water molecules in its environment and does not ever require re-fuelling. The construct, which is made of DNA and vaccinia virus topoisomerase protein, can detect DNA damage by employing fluorescence. It uses Brownian motion as a cyclic motor to continually separate and bring together two types of fluorescent hairpins participating in FRET. This bio-molecular oscillator is a fast and specific sensor of 5'OH double-strand DNA breaks present in phagocytic phase of apoptosis. The detection takes 30 s in solution and 3 min in cell suspensions. The phagocytic phase is critical for the effective execution of apoptosis as it ensures complete degradation of the dying cells' DNA, preventing release of pathological, viral and tumor DNA and self-immunization. The construct can be used as a smart FRET probe in studies of cell death and phagocytosis.

Nanoblinker: Brownian motion powered bio-nanomachine for FRET detection of phagocytic phase of apoptosis.

Lysosomes contain hydrolytic enzymes that can degrade proteins and DNA. Leakage of these reactive compounds through a compromised lysosomal membrane causes lysosomal cell death, which can have apoptotic, necrotic, or mixed morphology. Lysosomal cathepsin proteases, such as cathepsin D, and the lysosomal endonuclease, DNase II, have both been implicated in lysosome-related cell death. Here, we present a fluorescence dual-labeling technique for simultaneous visualization of these two markers of lysosomal activity linked to cell death. The approach labels the intracellular distribution of cathepsin D and the sites with DNase II-type breaks in fixed tissue sections. It determines the lysosomal or extra-lysosomal localization of the markers and can be useful in studying pathways and signals of lysosomal cell death.

Dual Detection of Nucleolytic and Proteolytic Markers of Lysosomal Cell Death: DNase II-Type Breaks and Cathepsin D.

Blunt-ended DNase II-type breaks with 5' hydroxyls are generated in phagocytic cells of any lineage during digestion of the engulfed DNA. These breaks indicate the ongoing active phagocytic reaction. They are produced by the acid deoxyribonuclease-DNase II which is the primary endonuclease responsible for DNA degradation after its engulfment.Here, we present an express approach that detects blunt-ended 5' OH DNA breaks in fixed tissue sections. The technique is simple to perform and takes only 60 min to complete. It can be useful in studies of the clearance of dying cells in oncological, inflammatory, and autoimmune disorders.

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Publication title Cited by 4	2012
Publication title Cited by 4	2014
Publication title	2025

Article	Year
Caspase-3-dependent and -independent apoptosis in focal brain ischemia. Molecular medicine (Cambridge, Mass.)\| PubMed ID: 12393932	2002
Visualization of irreparable ischemic damage in brain by selective labeling of double strand blunt-ended DNA breaks. Molecular medicine (Cambridge, Mass.)\| PubMed ID: 12606816	2002
Semi-artificial Fluorescent Molecular Machine for DNA Damage Detection. Nano letters\| PubMed ID: 17330146	2004
Fluorescent probes detecting the phagocytic phase of apoptosis: enzyme-substrate complexes of topoisomerase and DNA. Molecules (Basel, Switzerland)\| PubMed ID: 21642935	2011
Selective transport of cationized fluorescent topoisomerase into nuclei of live cells for DNA damage studies. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)\| PubMed ID: 24162988	2014
Nanoblinker: Brownian motion powered bio-nanomachine for FRET detection of phagocytic phase of apoptosis. PloS one\| PubMed ID: 25268504	2014
Dual Detection of Nucleolytic and Proteolytic Markers of Lysosomal Cell Death: DNase II-Type Breaks and Cathepsin D. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)\| PubMed ID: 28185196	2017
Quick Detection of DNase II-Type Breaks in Formalin-Fixed Tissue Sections. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)\| PubMed ID: 28710757	2017

Candace L. Minchew

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