Name: Lisolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de lintestin de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Découvrez l'isolement rapide des cellules dendritiques et macrophages intestinaux de souris. Cette méthode utilise la digestion enzymatique et la cytométrie en flux pour caractériser les réponses immunitaires intestinales avec précision.

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Nous tenons à remercier Aaron Rae (Emory University Département de pédiatrie et des soins de santé pour enfants de Core flux Atlanta) pour le tri cellulaire. Ce travail a été soutenu par le NIH subvention AA01787001, une bourse de perfectionnement de carrière de la maladie de Crohn et la colite Foundation of America, et un enfants Emory-Egleston de recherche de semences Centre subvention pour TLD

1. Dissection et dissociation des cellules épithéliales intestinales Préparation des réactifs et du matériel: <ul><li> Chaude Ca 2 + / Mg 2 + sans PBS (FMC PBS) à la température ambiante. </li><li> Chaud Ca 2 + / Mg 2 +-libres HBSS avec 5% de FBS (HBSS CMF / FBS) et 2 mM EDTA à température ambiante. </li><li> Chaud Agitateur orbital à 37 ° C. </li></ul> Remarque: Les étapes 1.1 à 1.7 doit être effectuée aussi rapidement que possible afin de minimiser l&#39;étendue de la mort cellulaire et pour obtenir un rendement cellulaire maximale. <ol><li> Euthanasier les souris dans un chambre de CO 2 et d&#39;éthanol de pulvérisation de 70% sur l&#39;abdomen et du thorax. </li><li> Faire une petite incision horizontale au milieu de l&#39;abdomen avec une paire de ciseaux et peler la peau pour exposer le péritoine. </li><li> Passez à séparer l&#39;estomac de l&#39;intestin grêle supérieur en coupant au niveau du sphincter pylorique. Tease loin du mésentère avec des pinces et couper de nouveau àde la valvule iléo-caecale pour libérer tout l&#39;intestin grêle du gros intestin. Faites une entaille à la marge de l&#39;anus et encore démêler le mésentère jusqu&#39;à ce que le gros intestin est libre. </li><li> Couper le côlon longitudinalement l&#39;aide de ciseaux et rincer le contenu fécaux et de mucus dans la lumière intestinale dans le CMF PBS à température ambiante. </li><li> Utilisez des ciseaux et des pinces à disséquer macroscopiquement les plaques de Peyer le long de la surface anti-mésentérique de l&#39;intestin grêle et coupés de l&#39;intestin grêle longitudinalement. </li><li> Laver les lumière de l&#39;intestin grêle des matières fécales et de mucus dans CMF PBS à température ambiante. </li><li> Par ailleurs coupé l&#39;intestin grêle / de grande taille en pièces d&#39;environ 1,5 cm et les placer dans des tubes séparés 50 ml coniques contenant 30 ml de pré-chauffée HBSS CMF / FBS et 2 mM EDTA. Ne pas ajouter plus de 1 intestin par 50 ml tube conique. </li><li> Horizontalement placer chaque tube conique de 50 ml dans un agitateur orbital et agiter pendant à 250 rpm pendant 20 min à 37 ° C &lt;/ Li&gt; <li> Placez une passoire unique fil sur un seau de déchets et verser le contenu de chaque tube conique de 50 ml par de récupérer les 1,5 pièces cm de l&#39;intestin et les placer dans différents tubes coniques de 50 ml contenant 30 ml de préchauffées CHBSS / FB avec 2 mM d&#39;EDTA. </li><li> Répétez 1.8. </li></ol> 2. Digestion du tissu et l&#39;isolement des cellules intestinales Préparations à base de réactifs et d&#39;équipements: <ul><li> Solution de collagénase: 1,5 mg / ml Type VIII collagénase dissous dans préchauffé HBSS CMF / FBS avec 40 pg / ml de DNase I. </li><li> Préchauffé HBSS CMF / FBS et 2 mM EDTA. </li><li> Préchauffé agitateur orbital à 37 ° C. </li><li> Ice-froid HBSS CMF / FBS. </li></ul><ol><li> Après le second tour de la secousse, versez les contenus de chaque tube de 50 ml conique à travers le filtre et transférer 1,5 pièces cm de l&#39;intestin à un petit plastique pèsent bateau après tamponnant loin des médias en excès en utilisant une serviette en papier. </li><li> Rapidement émincer le 1.5 Pièces cm de l&#39;intestin à l&#39;aide de ciseaux directement dans le bateau de poids et d&#39;ajouter l&#39;intestin hachées 20 ml de solution de collagénase. Horizontalement placer chaque tube conique de 50 ml dans un agitateur orbital et faire digérer à 200 rpm pendant 10-20 min à 37 ° C. S&#39;il vous plaît voir ci-dessous portant sur ​​l&#39;optimisation. </li><li> En bref vortex pour s&#39;assurer la dissociation complète de tout tissu restant intestinale et le filtre à travers une passoire 100 um cellules directement dans un tube de 50 ml conique. </li><li> Haut de chaque tube conique de 50 ml avec du HBSS CMF / FBS et centrifuger à 1500 rpm pendant 5 min à 4 ° C. Si un solide culot n&#39;est pas observée pour les échantillons du côlon après centrifugation, les échantillons doivent être centrifugés à nouveau de 3,5 min. Répétez cette étape de lavage une fois de plus. </li><li> Décanter le surnageant et remettre en suspension le culot cellulaire dans glacée HBSS CMF / FBS et des échantillons de placer sur la glace. </li><li> Passez à la section 3 pour l&#39;acquisition de FACS / analyse ou de la section 4 pour magnétique talon d&#39;enrichissement pour la cellule haute-vitesse Sorting. </li></ol> 3. Coloration des anticorps pour l&#39;analyse des flux multi-couleur par cytométrie de pays en développement et les macrophages Préparations à base de réactifs et d&#39;équipements: <ul><li> Ice-froid CMF PBS. </li><li> Tampon de coloration glacée (CMF PBS + 5% de FBS). </li><li> Préparer cellules mortes tache dans glacée CMF PBS à 1:1000 dilution à l&#39;aide LIVE / DEAD Kit fixable Aqua Dead Cell taches. </li><li> Préparer le cocktail d&#39;anticorps coloration en ajoutant les suivantes marquées par fluorescence des anticorps monoclonaux (mAb) à la glace froide tampon de coloration: CD45-PerCP, CD103-PE, CD11c-APC, CMH-II (IA b)-Alexa Fluor 700, CD11b -eFluor 450, F4/80-PE-Cy7. </li></ul><ol><li> Transfert des cellules dans un 5 ml polystyrène à fond rond (FACS) du tube. </li><li> Laver les cellules deux fois dans la glace froide CMF PBS. </li><li> Échantillons Incuber avec cellule morte tache pendant 15 min sur la glace dans l&#39;obscurité. </li><li> Laver les cellules deux fois dans la glace froide CMF PBS. </li><li> Cellules de bloc avec 2.4G2 anti-FcγRIII/II dans glacée colorationtampon pendant 10 min sur la glace. </li><li> Laver les cellules dans un tampon de coloration glacée. </li><li> Incuber les échantillons avec un cocktail d&#39;anticorps coloration pendant 20 min sur la glace dans l&#39;obscurité. </li><li> Laver les cellules avec du tampon glacé coloration à deux reprises et remettre en suspension des échantillons dans 400 ul de tampon glacé coloration et passer à travers bouchon 40 um filtre sur tubes FACS. </li><li> Acquérir des échantillons sur LSR II cytomètre (BD) tels que définis par la stratégie de porte à la section 5 et la figure 1. </li></ol> 4. Enrichissement des pays en développement et les macrophages de l&#39;intestin Préparations à base de réactifs et d&#39;équipements: <ul><li> Tampon de coloration glacée (CMF PBS + 5% de FBS). </li></ul><ol><li> Incuber la suspension cellulaire unique obtenue à l&#39;étape 2.5 avec CD11b et CD11c perles MACS selon les instructions du fabricant. </li><li> Laver les cellules avec un tampon de coloration glacée suivie d&#39;une centrifugation. </li><li> Rejeter le surnageant et remettre en suspension le culot cellulaire dans 1 ml de tampon coloration glacéeet passer à travers une passoire 100 um cellulaire suivie d&#39;une passoire cellule 40 um. </li><li> Enrichir pour billes magnétiques joints par sélection positive des cellules en utilisant MACS LS colonne magnétique. </li><li> Répétez l&#39;étape 4.2 et éliminer le surnageant. </li><li> Incuber les cellules avec des mAbs marqueurs de surface tels que décrits à l&#39;étape 3.7. </li><li> Lavez-bille magnétique enrichis cellules deux fois avec tampon de coloration glacée. Remettre en suspension les culots de cellules dans 500 ul tampon de coloration glacée sans l&#39;azoture de sodium, et de passer à 40 um tamis cellulaire dans un tube FACS. </li><li> Passez à la FACS-tri sur la trieuse de BD ARIA II cellulaire pour trier DC intestinale et / ou sous-ensembles de macrophages d&#39;intérêt. </li></ol> 5. Stratégie d&#39;ouverture de porte pour LP APC Note: S&#39;il vous plaît noter que les cellules intestinales non colorées peuvent être utilisées comme contrôle négatif pour aider à la mise en place correcte des portes pour séparer les populations positives et négatives. <ol><li> Comme le montre la figure1, créez un tracé de points et exclure les cellules qui sont positives pour la cellule morte tache (fig. 1A), suivie par l&#39;exclusion d&#39;événements doublet (Fig. 1B et C). Puis, la porte sur les cellules d&#39;intérêt en fonction de transmettre et de diffusion latérale en veillant à exclure les débris (Fig. 1D). </li><li> Créez un autre tracé de points et porte en outre sur les CD45 + et IA b + cellules, ce qui caractérise phénotypiquement APC (Fig. 1E). </li><li> Sur un tracé de points distincts, d&#39;analyser et d&#39;expression pour CD11b CD11c de distinguer DC spécifique et sous-ensembles des macrophages (R1, R2 et R3; Fig. 1F). Les cellules de R1 sont CD11c + CD11b ternes / - cellules. La région, R2, est délimité de telle sorte que ces cellules ont des niveaux similaires de l&#39;expression en surface de CD11c comme dans les cellules de R1, mais les cellules de R2 expriment également CD11b. Par la suite, la région R3 est désigné pour les cellules qui sont + CD11b et terne / CD11c -. </li><li> Unalyze régions R1, R2, R3 et autre expression pour F4/80 et CD103 pour différencier des macrophages et des populations de DC, respectivement. Le CD11c + CD11b terne / - cellules expriment des niveaux de R1 élevés de l&#39;intégrine αE, CD103, et de faibles niveaux de F4/80 (Fig. 1G). CD11b + CD11c + cellules de R2 sont composés de deux contrôleurs et des macrophages sur la base de leur expression dichotomique de CD103 et F4/80 (figure 1H). Enfin, CD11b + CD11c ternes / - cellules de macrophages constituent R3 basées sur le profil phénotypique de F4/80 + et CD103 - (Fig. 1I) 16. </li></ol> 6. Les résultats représentatifs <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/4040/4040fig1.jpg" /> Figure 1. Stratégie d&#39;ouverture de porte pour les PED intestinales et les macrophages. Cellules mortes (A) et doublets (B et C) ont d&#39;abord été exclus de l&#39;analyse, puis petite intestinalecellules internes ont fermée en conséquence de transmettre et de côté de dispersion (D), et CPA ont été défini comme CD45 + b + IA (E). Les macrophages et les PED ont été identifiés par l&#39;expression de CD11b et CD11c (F). CD103 et F4/80 expression pour les cellules pré-dépendants sur R1 (G), R2 (H) et R3 (I), les populations ont été analysées. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/4040/4040fig2.jpg" /> Figure 2. Rendement cellulaire et qualité de la coloration d&#39;anticorps dépend du temps de digestion. CD11b et CD11c motif de coloration et le rendement total de cellules de la sous-(A, D), de façon optimale (B, E) ou sur-digéré (C, F) du tissu intestinal. Les cellules intestinales ont été isolés à partir d&#39;un intestin souris C57BL / 6 petites et pays en développement et les macrophages ont été analysées par FACS sur la BD LSR II. Tension et de compensation ont été définies à l&#39;aide non colorées et seul fluorochrome tachés de splénocytes. Les cellules mortes (Fig. 1A) et doublets (Fig. 1B et C) ont d&#39;abord été exclus del&#39;analyse. Les cellules d&#39;intérêt ont ensuite été analysées en fonction de transmettre et le côté de dispersion (Fig. 1D), suivie par de déclenchement sur ​​CD45 + et IA b + cellules (Fig. 1E). Par la suite, CD11b et CD11c expression a été évaluée chez le CD45 + b + IA cellules pour délimiter trois régions (R1, R2 et R3; Fig. 1F). CD103 et F4/80 expression dans les trois régions a été évaluée à la distinction entre les pays en développement et les macrophages, respectivement. Le CD11c + CD11b / terne - les cellules de R1 ont exprimé des niveaux élevés de l&#39;intégrine αE, CD103, et de faibles niveaux de F4/80 (Fig. 1G). CD11b + CD11c + cellules de R2 ont été composé de deux contrôleurs de domaine et les macrophages en fonction de leur expression et dichotomique de CD103 F4/80 (Fig. 1H), tandis que CD11b + CD11c ternes / - cellules de macrophages constituent R3 basées sur le profil phénotypique de F4 / 80 + et CD103 - ( <strong&gt; Fig. 1I) 16. Les macrophages au sein de la grille R2 et macrophages dans la porte avant R3 ont similaire et propriétés de diffusion secondaires et se distinguent par l&#39;expression CD11c. La dichotomie fonctionnelle de ces sous-ensembles reste incomplètement comprise. La relation entre la durée de la digestion du tissu sur le rendement total de cellules et l&#39;expression de CD11b et CD11c est illustré à la figure 2. Tissu intestinal qui a été digéré pendant 3 min (sous-digestion) a donné le faible nombre total de cellules (Fig. 2D) et les PED et les macrophages donc peu disponibles pour la caractérisation (figure 2A). Digestion du tissu pour 11 min a produit un rendement robuste de cellules vivantes (Fig. 2E) avec les populations de pays en développement et les macrophages qui expriment des niveaux élevés de CD11b et CD11c et phénotypiquement distincte (Fig. 2C). En revanche, la digestion pendant 50 min (plus-digestion) a entraîné un rendement cellule similaire en cas de compared à la digestion optimisée (Fig. 2E et F), cependant, la délimitation des différentes populations de cellules en utilisant CD11b et CD11c est devenu plus obscur que l&#39;expression de CD11c diminuée (Fig. 2C) et le nombre de cellules mortes a augmenté (données non présentées).

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</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

<img src="/files/ftp_upload/4040/4040fig3.jpg" alt="Figure 3"/> Figure 3. Facteurs importants pour l&#39;optimisation du rendement des cellules et l&#39;expression des antigènes de surface. Rendement cellulaire et l&#39;expression des antigènes de surface sont directement touchés par la durée de la digestion des tissus, les caractéristiques spécifiques de la collagénase, le degré de tissus, de hachage et la présence ou l&#39;absence d&#39;inflammation, ce qui peut affecter l&#39;intégrité des tissu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> PBS 1X, Ca 2 + - et Mg 2 + sans </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Hank solution saline équilibrée (HBSS) avec le rouge de phénol </td><td> Fisher Scientific </td><td> SH3001603 </td><td></td></tr><tr><td> Le bicarbonate de sodium </td><td> Sigma </td><td> S6014 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES 1M en NaCl à 0,85% </td><td> Lonza </td><td> 17-737E </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal (FBS) </td><td> Atlanta biologiques </td><td> S11150H </td><td> Inactivé à la chaleur </td></tr><tr><td> EDTA 0,5 M (pH 8,0) </td><td> Cellgro </td><td> 46-034-CI </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase type VIII </td><td> Sigma </td><td> C2139 </td><td></td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Roche </td><td> 14785000 </td><td> Solution mère: 100mg/ml </td></tr><tr><td> Live / Dead Kit fixable Aqua Dead Cell Stain pour 405 nm d&#39;excitation </td><td> Invitrogen </td><td> L34957 </td><td> Utilisez moins 1:1000 </td></tr><tr><td> CD45-PerCP mAb (30F11) </td><td> BD </td><td> 557235 </td><td> Utilisez au 1:100 </td></tr><tr><td> CD103-PE mAb (M290) </td><td> BD </td><td> 557495 </td><td> Utilisez au 1:100 </td></tr><tr><td> FcyRIII / II mAb (2.4G2) </td><td> BD </td><td> 553141 </td><td> Utilisez au 1:200 </td></tr><tr><td> CD11c-APC mAb (N418) </td><td> eBioscience </td><td> 17-0114-82 </td><td> Utilisez au 1:100 </td></tr><tr><td> CMH-II (I-Ab)-Alexa Fluor 700 mAb </td><td> eBioscience </td><td> 56-5321-82 </td><td> Utilisez au 1:100 </td></tr><tr><td> CD11b-eFluor 450mAb (M1/70) </td><td> eBioscience </td><td> 48-0112-82 </td><td> Utilisez au 1:200 </td></tr><tr><td> F4/80-PE-Cy7 mAb (BM8) </td><td> eBioscience </td><td> 25-4801-82 </td><td></td></tr><tr><td> CD11b microbilles </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-049-601 </td><td></td></tr><tr><td> CD11c microbilles </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-052-001 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes de 50 ml coniques </td><td> BD Falcon </td><td> 352098 </td><td></td></tr><tr><td> Simple filtre en treillis </td><td> Chefmate </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Petit bateau pèsent </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-732-116 </td><td></td></tr><tr><td> 100 tamis cellulaire pm </td><td> BD Falcon </td><td> 352360 </td><td></td></tr><tr><td> 40 tamis cellulaire pm </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ml à fond rond en polystyrène tubes </td><td> BD Falcon </td><td> 352235 </td><td> Utilisez au 1:100 </td></tr><tr><td> MaxQ 4450 paillasse agitateur orbital </td><td> Thermo Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td> LS MACS colonne </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> LSR II </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> FACSAria II </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

l&#39;isolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de l&#39;intestin de souris

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Dans l&#39;intestin résident les populations uniques de innées et adaptatives des cellules immunitaires qui sont impliqués dans la promotion de la tolérance envers la flore commensale et d&#39;antigènes alimentaires tout en concomitance sur le point restant à monter vers les réponses inflammatoires 1,2 pathogènes invasifs. Cellules présentatrices d&#39;antigènes, en particulier les macrophages, les PED et jouent un rôle crucial dans le maintien de l&#39;homéostasie intestinale immunitaire par leur capacité de détecter et de répondre de façon appropriée le microbiote 3-14. L&#39;isolement efficace des pays en développement intestinales et les macrophages est une étape cruciale pour caractériser le phénotype et la fonction de ces cellules. Alors que de nombreuses méthodes efficaces d&#39;isoler les cellules immunitaires intestinales, y compris les pays en développement et les macrophages, ont été décrits 6,10,15-24, beaucoup comptent sur ​​les temps des digestions longues qui peuvent influencer négativement l&#39;expression des antigènes de surface cellulaire, la viabilité cellulaire, et / ou le rendement des cellules. Ici, nous détaillons une méthode pour l&#39;isolement rapide d&#39;un grand nombre de viable, les PED intestinales et les macrophages. La caractérisation phénotypique des CD intestinales et les macrophages est effectuée par coloration directe isolés cellules intestinales avec spécifiques marquées par fluorescence des anticorps monoclonaux pour l&#39;analyse des flux multi-couleurs cytométrie. En outre, DC de haute pureté et les populations de macrophages sont isolés pour des études fonctionnelles utilisant CD11c et CD11b perles de cellules activées de tri magnétique suivi par le tri cellulaire.

Ici, nous détaillons une méthode pour l&#39;isolement rapide des cellules dendritiques de souris intestinales (DCS) et les macrophages. Caractérisation phénotypique des CD intestinales et les macrophages est effectuée en utilisant plusieurs couleurs d&#39;écoulement analyse cytométrique tandis magnétique enrichissement bourrelet suivie par tri cellulaire est utilisé pour donner des populations de grande pureté pour des études fonctionnelles.

L&#39;isolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de l&#39;intestin de souris

L'intestin abrite des populations uniques de cellules immunitaires innées et adaptatives qui participent à la promotion de la tolérance envers la flore commensale et...

L'objectif général de cette procédure est d'isoler rapidement les cellules dendritiques ou DCs et les macrophages intestinaux de souris pour leur caractérisation phénotypique et fonctionnelle. Cela est réalisé en premier lieu par la récupération du tissu intestinal. La deuxième étape consiste à dissocier l'épithélium intestinal de la lame propre.Ensuite, la lame propria intestinale est digérée lors des étapes finales de la procédure. Les cellules de la lame propria sont marquées par immunofluorescence à l’aide d’anticorps conjugués et triées pour des populations cellulaires spécifiques. En fin de compte, les populations de cellules dendritiques intestinales et de macrophages peuvent être caractérisées et purifiées plus précisément afin d’effectuer des études fonctionnelles évaluant la production de cytokines, la présentation d’antigènes et la régulation des cellules immunitaires.Ainsi, le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes réside dans la rapidité de la digestion du tissu, qui garantit une expression optimale des antigènes de surface cellulaire, la viabilité cellulaire et ou les cellules. Après avoir euthanasié la souris et confirmé le décès pa

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Immunology and Infection

Immunologie et infection

Isolement des lymphocytes utilisant le MAC Miltenyi kit est un moyen fiable pour purifier les cellules de l'ensemble des homogénats de tissu lymphoïde. Les cellules purifiées en utilisant le système Miltenyi sont typiquement ≥ 96% pur. Ici, on justifie les mesures prises pour isoler les cellules CD4 + T, l'une des nombreuses trousses offertes par Miltenyi.

Isolement des cellules T CD4 + des ganglions lymphatiques de souris en utilisant Miltenyi MACS Purification

Une préparation hautement purifiée de cellules de souris pulmonaires dendritiques est décrite. Un accent particulier est donné à l'isolement de sous-ensemble de cellules dendritiques conventionnelles.

L&#39;isolement des cellules de souris poumon dendritiques

Il ya un intérêt croissant pour la compréhension des fonctions immunologiques des sous-populations spécifiques de cellules dans les plaques de Peyer (PP), les sites principaux inducteurs de tissus lymphoïdes associés à l'intestin. Ici, nous décrivons les protocoles parallèles pour la préparation PP préparations cellulaires simples pour l'analyse par cytométrie en flux et cryosections PP immunomarquage.

Et isoler immunocoloration des lymphocytes et des cellules dendritiques à partir des plaques de Peyer murin de

Ce protocole décrit en détail une méthode pour isoler des cellules présentant l'antigène à partir de thymus humain par l'intermédiaire de différentes étapes de digestion enzymatique du tissu suivie d'une centrifugation de densité de la suspension de cellules individuelles et enfin le tri magnétique et / ou FACS des populations de cellules d'intérêt.

Isolement des cellules dendritiques myéloïdes et les cellules épithéliales du thymus humain

Des sous-ensembles distincts de cellules dendritiques existent en tant que populations rares dans les organes lymphoïdes, et sont donc difficiles à isoler en nombre suffisant et en pureté suffisante pour des expériences immunologiques. Nous décrivons ici une méthode à haute efficacité et à haut rendement pour l’isolement de tous les principaux sous-ensembles actuellement connus de cellules dendritiques spléniques de souris.

Une méthode de rendement efficace et haute pour l&#39;isolement des souris dendritiques sous-ensembles cellulaires

La caractérisation quantitative des lymphocytes intestinaux suscite un intérêt croissant en raison de la reconnaissance croissante du fait que ces cellules jouent un rôle essentiel dans diverses maladies intestinales et systémiques. Dans ce protocole, nous décrivons comment isoler des populations de cellules uniques de différents compartiments de l’intestin grêle pour une caractérisation ultérieure de la cytométrie en flux.

L&#39;isolement et la caractérisation par cytométrie en flux de l&#39;intestin grêle Lymphocytes murine

Nous décrivons ici une méthode pour isoler et purifier les cellules dendritiques de différents compartiments anatomiques dans le tractus reproducteur femelle humain pour l’évaluation de leurs caractéristiques phénotypiques et fonctionnelles. Cette méthode peut être adaptée pour isoler des autres cellules immunitaires ou autres tissus muqueux, les cellules dendritiques.

Isolement de cellules dendritiques de l’appareil reproducteur féminin humain pour des études phénotypiques et fonctionnelles

Macrophages dérivés de monocytes DC (RCSCND) peut détecter de petites quantités de molécules associées à risque et sont donc facilement apprêté. Nous fournissons un protocole détaillé pour l’isolement des RCSCND de sang et de tumeurs et de leur mise en route avec les complexes immuns tout en soulignant des précautions qui doivent être menées afin d’éviter leur activation prématurée.

Protocole d’isolement de cellules dendritiques macrophages dérivés de monocytes de souris et leur Activation ultérieure In Vitro avec tumeur Complexes immuns

Nous décrivons ici un protocole détaillé pour l’isolement des lymphocytes des sites inductives y compris les plaques de Peyer tissu lymphoïde associé au tube digestif et les ganglions lymphatiques mésentériques drainants et les sites d’effecteur notamment la lamina propria et de la épithélium intestinal du petit système immunitaire intestinal.

Isoler des Lymphocytes du système immunitaire Intestinal souris petit

Le but de ce protocole est d'isoler les cellules mononucléaires qui résident dans la lamina propria du côlon par digestion enzymatique du tissu à l'aide de collagène. Ce protocole permet l'isolement efficace des cellules mononucléaires résultant en une suspension de cellules simples qui à son tour peut être utilisé pour l'immunophénotypage robuste.

Isolement des cellules mononucléaires Lamina Propria du colon murine à l'aide de la collagène E

Cette étude utilise la cytométrie en flux et deux stratégies de contrôle différentes sur des plexus choroïdes cérébraux perfusés isolés; ce protocole identifie les principaux sous-ensembles de cellules immunitaires qui peuplent cette structure cérébrale.

Isolement et caractérisation des cellules immunitaires des plexus choroïdes de souris micro-disséqués

Découvrez l'isolement rapide des cellules dendritiques et macrophages intestinaux de souris. Cette méthode utilise la digestion enzymatique et la cytométrie en flux pour caractériser les réponses immunitaires intestinales avec précision.

L'isolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de l'intestin de souris

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