Name: Isolement des cellules T CD4 + des ganglions lymphatiques de souris en utilisant Miltenyi MACS Purification (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Apprenez l'isolation de cellules T CD4+ à partir de ganglions lymphatiques de souris par sélection négative avec le kit Miltenyi MACS. Cette méthode fiable offre une pureté ≥96% pour vos études immunologiques.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Nous tenons à remercier Rebecca Paquett pour la préparation d&#39;un tampon MACS.

S&#39;il vous plaît lire et suivre le protocole inclus dans le kit Miltenyi ou en ligne à <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> .

<ol><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li>
<li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).</li>
</ol>

Les auteurs n'ont rien à divulguer.

Isolement de cellules provenant de la source primaire est une étape nécessaire dans de nombreux protocoles plus complexes. Miltenyi propose des kits d&#39;isoler les cellules de plusieurs organismes, y compris les humains, les primates non humains, le rat et, comme nous le décrivons ici, chez la souris. Séparation magnétique des cellules à base de billes permet soit la sélection positive (ou la déplétion des cellules) ainsi que la sélection négative. Ici, nous démontrons une sélection négative des cellules CD4 avez intacte ou Na + cellules ...

<table><tbody><tr><td>Tampon MACS</td><td>Réactif</td><td>Aucun</td><td>Aucun</td><td>Préparer comme décrit par Miltenyi. </td></tr><tr><td>Kit d'isolement de cellules T CD4+ : isolement sans contact </td><td>Réactif</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-860</td><td>Pour utilisation avec le système Miltenyi. </td></tr><tr><td>Solution saline tamponnée au phosphate stérile (PBS)</td><td>Réactif</td><td></td><td></td><td>Pour utilisation dans la préparation du tampon MACS.</td></tr><tr><td>Plaque de culture Corning de 35 mm non traitée pour culture tissulaire</td><td>Autre</td><td>Corning</td><td>430588</td><td>Utilisé pour la préparation d'une suspension de cellules uniques.</td></tr><tr><td>Filtre cellulaire de 70 microns </td><td>Outil </td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>Utilisé pour la préparation d'une suspension de cellules uniques.</td></tr><tr><td>Seringue de 6 mL </td><td>Outil</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881516051</td><td>Utilisé pour la préparation d'une suspension de cellules individuelles.</td></tr><tr><td>10x Dulbecco&amp;rsquo;s Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td><td>Réactif</td><td>Invitrogen</td><td>14200-075</td><td>Pour utilisation dans la lyse des globules rouges.</td></tr><tr><td>Eau stérile </td><td>Réactif </td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td>Pour utilisation dans la lyse des globules rouges.</td></tr></tbody></table>

isolement des cellules t cd4 + des ganglions lymphatiques de souris en utilisant miltenyi macs purification

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolement de cellules provenant de la source primaire est une étape nécessaire dans de nombreux protocoles plus complexes. Miltenyi propose des kits d&#39;isoler les cellules de plusieurs organismes, y compris les humains, les primates non humains, le rat et, comme nous le décrivons ici, chez la souris. Séparation magnétique des cellules à base de billes permet soit la sélection positive (ou la déplétion des cellules) ainsi que la sélection négative. Ici, nous démontrons une sélection négative des cellules CD4 avez intacte ou Na + cellules T auxiliaires. En utilisant ce protocole standard, nous purifie généralement les cellules qui sont ≥ 96% de CD4 pur + / CD3 +. Ce protocole est utilisé en conjonction avec le protocole de dissection et de 2-Photon Imaging des ganglions lymphatiques périphériques dans des souris publiée dans le numéro 7 de Jupiter, pour la purification des cellules T et d&#39;autres types cellulaires au adoptive transfert à des fins d&#39;imagerie. Bien que nous n&#39;ayons pas démontrer analyse FACS dans cette vidéo de protocole, il est fortement recommandé de vérifier la pureté globale des cellules isolées en utilisant les anticorps appropriés par FACS. En outre, nous démontrons la méthode non-stériles de l&#39;isolement de lymphocytes T. Si les cellules stériles sont nécessaires pour votre particulière de l&#39;utilisateur final demande, être sûr de faire toutes les procédures ont démontré dans la hotte de culture de tissus dans des conditions standard stériles. Merci pour regarder et bonne chance avec vos propres expériences!

Isolement des lymphocytes utilisant le MAC Miltenyi kit est un moyen fiable pour purifier les cellules de l&#39;ensemble des homogénats de tissu lymphoïde. Les cellules purifiées en utilisant le système Miltenyi sont typiquement ≥ 96% pur. Ici, on justifie les mesures prises pour isoler les cellules CD4 + T, l&#39;une des nombreuses trousses offertes par Miltenyi.

Isolement des cellules T CD4 + des ganglions lymphatiques de souris en utilisant Miltenyi MACS Purification

L'isolation de cellules à partir de la source primaire est une étape nécessaire dans de nombreux protocoles plus complexes. Miltenyi propose des kits pour isoler des cellules provenant de plusieurs...

Il s'agit d'un aimant Max MIDI. Il indique : attention, champs magnétiques extrêmement puissants. Bonjour, je suis Melanie Matthew du laboratoire de Mike Collins au département de physiologie et de biophysique de l'Université de Californie à Irvine.Aujourd'hui, nous allons vous montrer une préparation par sélection négative de cellules T CD4 positives à l'aide des kits de Milton Biotechnology. Ici, nous avons le Minimax et les aimants Minimax. Le Minimax est utilisé pour des séparations de plus grande ampleur : vous pouvez traiter jusqu'à 10⁹ cellules à l'aide d'une colonne insérée dans le Minimax. Le MiniMACS, en revanche, est destiné à des volumes cellulaires beaucoup plus faibles.Ainsi, selon que vous effectuez une séparation positive ou négative, vous marquerez vos cellules avec l'anticorps approprié. Ces anticorps portent une microbille magnétique qui s'attachera à l'aimant. Dans le cas d'une sélection négative, les cellules qui vous intéressent passeront à travers la colonne et vous pourrez recueillir l'écoulement, qui contiendra vos cellules d'intérêt.Je dois mentionner que les techniques que je vous montre ce soir ne sont pas stériles. Par conséquent, si vous souhaitez util

isolation-cd4-t-cells-from-mouse-lymph-nodes-using-miltenyi-macs

Research

Recherche

JoVE Journal

Biology

Biologie

Une préparation hautement purifiée de cellules de souris pulmonaires dendritiques est décrite. Un accent particulier est donné à l'isolement de sous-ensemble de cellules dendritiques conventionnelles.

L&#39;isolement des cellules de souris poumon dendritiques

Cette vidéo décrit l’enrichissement en lymphocytes T de la rate d’une souris par sélection négative à l’aide d’un séparateur magnétique. La technique consiste à cibler les autres cellules de l’échantillon pour la déplétion à l’aide d’anticorps ou de ligands dirigés contre des antigènes de surface cellulaire spécifiques.

Enrichissement des lymphocytes T : une technique pour isoler les lymphocytes T d’une population cellulaire mixte par séparation magnétique

Cette vidéo présente un protocole pour l’isolement par marquage magnétique d’une population à faible concentration de cellules T CD4+Vδ1+γδ à partir de cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMC). En utilisant une combinaison d’anticorps anti-Vδ1 conjugués à la FITC, de microbilles magnétiques anti-FITC et de billes superparamagnétiques enrobées d’anticorps anti-CD4, les lymphocytes T CD4+Vδ1+ peuvent être purifiés avec succès de la population PBMC.

Isolement sélectif de lymphocytes T CD4+ Vδ1+ γδ à partir de cellules mononucléées de sang périphérique humain

Avec des fonctions effectrices distinctes des autres sous-ensembles de cellules T, les cellules Th17 ont été impliqués dans l'auto-immunité centre inflammatoire. Cette vitro Th17 protocole de différenciation fournit un moyen de déterminer si les lymphocytes T CD4 + naïfs peuvent se différencier en cellules Th17, et d'examiner leur rôle dans l'auto-immunité et réponse de l'hôte.

L&#39;isolement et la différenciation Th17 de Naïve CD4 des lymphocytes T

Ce protocole décrit en détail une méthode pour isoler des cellules présentant l'antigène à partir de thymus humain par l'intermédiaire de différentes étapes de digestion enzymatique du tissu suivie d'une centrifugation de densité de la suspension de cellules individuelles et enfin le tri magnétique et / ou FACS des populations de cellules d'intérêt.

Isolement des cellules dendritiques myéloïdes et les cellules épithéliales du thymus humain

Les lymphocytes T CD4+ naïfs se polarisent en divers sous-ensembles en fonction de l’environnement au moment de l’activation.  La différenciation des lymphocytes T CD4+ naïfs en divers sous-ensembles effecteurs peut être réalisée in vitro par l’ajout de stimuli des récepteurs des lymphocytes T et de signaux spécifiques de cytokines.

Souris Naïf CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolement des cellules T et<em&gt; In vitro</em&gt; Différenciation en sous-ensembles de cellules T

Des sous-ensembles distincts de cellules dendritiques existent en tant que populations rares dans les organes lymphoïdes, et sont donc difficiles à isoler en nombre suffisant et en pureté suffisante pour des expériences immunologiques. Nous décrivons ici une méthode à haute efficacité et à haut rendement pour l’isolement de tous les principaux sous-ensembles actuellement connus de cellules dendritiques spléniques de souris.

Une méthode de rendement efficace et haute pour l&#39;isolement des souris dendritiques sous-ensembles cellulaires

Nous décrivons ici un protocole détaillé pour l’isolement des lymphocytes des sites inductives y compris les plaques de Peyer tissu lymphoïde associé au tube digestif et les ganglions lymphatiques mésentériques drainants et les sites d’effecteur notamment la lamina propria et de la épithélium intestinal du petit système immunitaire intestinal.

Isoler des Lymphocytes du système immunitaire Intestinal souris petit

Nous présentons ici un protocole visant à isoler les cellules dendritiques des rates murins de tri cellulaire magnétique et transfert adoptif en souris naïves de. Le modèle de cellules dendritiques activées de haut-sel a été choisi pour expliquer la procédure étape par étape de transfert adoptif et cytométrie en flux.

Isolement et transfert adoptif de sel élevé traités des cellules dendritiques présentatrices d’antigène

Deux photons d'imagerie a permis de découvrir la motilité des lymphocytes et les interactions cellulaires dans le ganglion dans des conditions basales et pendant une réponse immunitaire 1. Ici, nous démontrons le transfert adoptif de lymphocytes T, l'isolement des ganglions lymphatiques, et la motilité imagerie des cellules T CD4 + dans les ganglions lymphatiques retirés.

Dissection et 2-Photon Imaging des ganglions lymphatiques périphériques chez les souris

Apprenez l'isolation de cellules T CD4+ à partir de ganglions lymphatiques de souris par sélection négative avec le kit Miltenyi MACS. Cette méthode fiable offre une pureté ≥96% pour vos études immunologiques.

Isolement des cellules T CD4 + des ganglions lymphatiques de souris en utilisant Miltenyi MACS Purification

Explorer plus de vidéos