Name: Synthétique de la production soie daraignée sur léchelle du laboratoire (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-18T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 36 s
Description: Découvrez la production de soie d'araignée synthétique à l'échelle laboratoire en mimant le processus naturel de filage. Cette méthode efficace utilise des protéines recombinantes purifiées pour créer des biomatériaux innovants.

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<li>La Mattina, C., Reza, R., Hu, X., Falick, A. M., Vasanthavada, K., McNary, S., Yee, R., Vierra, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spider+minor+ampullate+silk+proteins+are+constituents+of+prey+wrapping+silk+in+the+cob+weaver+Latrodectus+hesperus%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Spider minor ampullate silk proteins are constituents of prey wrapping silk in the cob weaver Latrodectus hesperus.</a> Biochemistry. 47, 4692-4700 (2008).</li>
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</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Les fibres synthétiques filées à partir de cette méthodologie sont mécaniquement sur le même ordre de grandeur par rapport aux fibres naturelles. En diminuant la quantité d&#39;erreur humaine en mécanisant le bobinage et les processus post-tirage de spin, la variation expérimentale entre les échantillons sont plus contrôlée et fortement réduit. Notre méthodologie offre la possibilité d&#39;enquêter sur les propriétés mécaniques des fibres d&#39;autres qui sont filés à partir de protéines rec...

Soie de l&#39;araignée a des propriétés mécaniques extraordinaires qui effectue des matériaux synthétiques, y compris plusieurs en acier haute résistance, le kevlar et le nylon. 1 araignées tissent au moins 6-7 différents types de fibres qui affichent diverses propriétés mécaniques, chacun étant conçu avec des quantités variables de résistance à la traction et l&#39;extensibilité pour effectuer des tâches spécifiques. biologiques 2 Les chercheurs sont rapidement la poursuite de l&#39;utilisation de la soie d&#39;araignée en tant que biomatériaux de la prochaine génération en raison de leurs excellentes propriétés mécaniques, leur biocompatibilité et leur nature non-toxiques et vert-matériau. 3,4 En raison de la cannibale et la nature venimeuse des arachnides, la récolte des soies d&#39;araignée à travers l&#39;agriculture n&#39;est pas une stratégie concrète pour répondre aux exigences nécessaires à la fabrication à l&#39;échelle industrielle. Par conséquent, les scientifiques se sont tournés vers la production de protéines recombinantes de soie dans des organismes transgéniques couplé avec in vitro la filature de fibres synthétiques à partir de lasoi protéines purifiées. 5-8 Expression de pleine longueur des protéines recombinantes de soie d&#39;araignée a été techniquement difficile compte tenu des propriétés intrinsèques de leurs séquences de gènes, qui comprennent leur nature hautement répétitive et les longueurs physiques (&gt; 15 kb), riche en GC contenu et partiale alanine et la glycine codon usage 9-11. À ce jour, la plupart des laboratoires ont mis l&#39;accent sur ​​l&#39;expression de formes tronquées des protéines majeures de soie ampullaires MASP1 ou MaSp2 utilisant des séquences partielles d&#39;ADNc ou des gènes synthétiques. 12-15 Spinning synthétique araignée soie est un processus difficile qui exige maîtrise et des connaissances dans plusieurs disciplines scientifiques, et les subtilités du processus de filage n&#39;ont pas été pleinement révélé au grand public par la représentation vidéo. En fait, seule une poignée de laboratoires à travers le monde ont l&#39;expertise nécessaire pour exprimer les ADNc de soie d&#39;araignée, de purifier les protéines de soie, le filage de fibres synthétiques et des fonctions de post-spin tirage, et puis finalement de tester leurs propriétés de biomatériaux. 8,16,17 Différentes approches pour le filage de fibres synthétiques ont englobé filage au mouillé et sec ainsi que des méthodes électrofilage 16,18,19 Toutes les procédures ont un but commun -. Élaboration d&#39;un protocole qui produit la soie d&#39;araignée synthétique ayant des propriétés mécaniques qui rivalisent avec les fils naturels à grande échelle des processus de fabrication commerciale. Nous décrivons ici la procédure pour générer des soies d&#39;araignée artificielle sur une échelle de laboratoire en utilisant une méthodologie de filage au mouillé. Par rapport aux autres procédés de filage, filage au mouillé a produit les résultats les plus cohérents pour l&#39;analyse des fibres. On exposer cette procédure commençant avec l&#39;expression des protéines de soie recombinant dans des bactéries, suivie par leur purification, puis décrire les étapes de préparation de protéines pour la filature, comprenant une méthodologie de post-étirage de spin appliquée à &quot;comme&quot; fibres filées et qui donne fils avec propriétés des matériaux qui se rapprochent de la qualité de la soie d&#39;araignée naturelle. Notre démarche méthodologiquey est conçu pour imiter au mieux le processus naturel de filage de fibres de soie et il s&#39;appuie largement sur ​​notre expertise de l&#39;architecture et la fonction des glandes produisant la soie de l&#39;ORB-et torchis tissage araignées. 20-22 De plus, nous concluons avec la nécessaire des mesures pour déterminer les propriétés des matériaux des fibres synthétiques en utilisant un tensiomètre pour tracer courbes contrainte-déformation, qui permettent aux enquêteurs de calculer la résistance à la rupture, déformation ultime, et la ténacité des fibres. Enfin, mais de grande valeur, les appareils de filature, bobinage, et le dessin peuvent être à la maison construit en utilisant des pièces disponibles dans le commerce, plutôt que l&#39;achat de matériel élaboré et coûteux personnalisé.

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactif / Equipement </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> pBAD / TOPO Kit Expression ThioFusion </td><td> Invitrogen </td><td> K370-01 </td><td></td></tr><tr><td> Réactif de lyse cellulaire FastBreak, 10x </td><td> Promega </td><td> V857C </td><td></td></tr><tr><td> Ni-NTA agarose </td><td> Qiagen </td><td> 30210 </td><td> Comprend les instructions pour tampons </td></tr><tr><td> ProteoSilver Argent Stain Kit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> PROTSIL1-1kt </td><td></td></tr><tr><td> FreeZone Lyophiliseur </td><td> Labconco </td><td> 7960041 </td><td> FreeZone 12plus </td></tr><tr><td> Hexafluoroisopropanol (HFIP) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 52512 </td><td></td></tr><tr><td> Seringue </td&gt; <td> Hamilton </td><td> 7657-01 </td><td> 250 uL </td></tr><tr><td> Aiguille </td><td> Hamilton </td><td> 7780-01 </td><td> Gauge 26 ans, Blunt extrémité amovible aiguille </td></tr><tr><td> Pousse-seringue </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 702208 </td><td> 11Plus </td></tr><tr><td> Pied à coulisse digital </td><td> Carrera </td><td> CP5906 </td><td> 0-150 mm large </td></tr><tr><td> En acier inoxydable pince </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> 501764 </td><td> Mini Dumont # M5S </td></tr><tr><td> Moteur </td><td> Mill Nature </td><td> 7090529 </td><td> 12VDC, 2 vitesses rpm </td></tr><tr><td> Actionneur linéaire </td><td> Warner Electric </td><td> 01-D024-0050-A06-LP-IP65 </td><td> 24VDC, plage de 6 pouces </td></tr><tr><td> Microscope à dissection </td><td> Leica Microsystems </td><td> Leica MZ16 </td><td></td></tr><tr><td> Numérique Microsccaméra OPE </td><td> Leica Microsystems </td><td> DFC320 </td><td> Logiciel: Leica Application Suite v2.8.1 </td></tr><tr><td> Ciseaux Vannas </td><td> Instruments de précision du monde </td><td> 500260 </td><td></td></tr><tr><td> Microtensometer </td><td> Aurora scientifique </td><td> 310C </td><td> 5N Dual-Mode Système </td></tr></tbody></table>

synthétique de la production soie d&#39;araignée sur l&#39;échelle du laboratoire

Synthetic Spider Silk Production on a Laboratory Scale

Comme la société progresse et les ressources se raréfient, il est de plus en plus important de cultiver de nouvelles technologies qui biomatériaux ingénieur de la prochaine génération avec des propriétés de haute performance. Le développement de ces nouveaux matériaux structurels doit être rapide, rentable et sur les méthodologies de traitement et des produits qui sont respectueux de l&#39;environnement et durable. Araignées tissent une multitude de différents types de fibres avec diverses propriétés mécaniques, offrant une riche source de matériaux d&#39;ingénierie prochaines génération pour le biomimétisme qui rivalisent avec les meilleurs matériaux naturels et anthropiques. Depuis la collecte de grandes quantités de soie d&#39;araignée naturelle n&#39;est pas possible, la production de soie synthétique a la capacité de fournir aux scientifiques d&#39;avoir accès à un approvisionnement illimité de threads. Par conséquent, si le procédé de filage peut être simplifié et perfectionné, les fibres d&#39;araignée artificielle ont le potentiel de l&#39;utilisation pour un large éventail d&#39;applications allant des gilets pare-balles, suture chirurgicales, cordes et cordages, les pneus, les cordes pour instruments de musique, et les matériaux composites pour l&#39;aviation et de la technologie aérospatiale. Afin de faire progresser le processus de soie synthétique de production et de céder des fibres qui affichent une faible variance dans leurs propriétés des matériaux à partir de spin à tourner, nous avons développé un protocole de filage au mouillé qui intègre l&#39;expression de protéines recombinantes de soie d&#39;araignée dans les bactéries, la purification et la concentration des protéines , suivie par extrusion de fibres et une post-rotation mécanique de traitement. Il s&#39;agit de la première représentation visuelle qui révèle un processus étape par étape pour faire tourner et d&#39;analyser les fibres de soie artificielle sur une échelle de laboratoire. Il fournit également des détails afin de minimiser l&#39;introduction de la variabilité entre les fibres filées à partir de la dope même filature. Collectivement, ces méthodes va propulser le processus de production de la soie artificielle, ce qui conduit à des fibres de meilleure qualité qui dépassent les soies d&#39;araignée naturelle.

Malgré les excellentes propriétés mécaniques et biochimiques de soies de l&#39;araignée, ce matériau ne peut être récolté en grandes quantités par des moyens conventionnels. Nous décrivons ici une stratégie efficace pour faire tourner fibres artificielles de soie d&#39;araignée, ce qui est un processus important pour les enquêteurs qui étudient la production de soie d&#39;araignée et de leur utilisation en tant que prochaine génération de biomatériaux.

Synthétique de la production soie d&#39;araignée sur l&#39;échelle du laboratoire

À mesure que la société progresse et que les ressources se raréfient, il devient ngày plus important de cultiver de nouvelles technologies permettant de concevoir la prochaine génération de...

L'objectif général de cette procédure est de produire une soie synthétique en imitant le processus naturel de filage de la soie d'araignée, afin de reproduire en laboratoire le processus de filage de la soie. De grandes quantités de protéine de soie recombinante sont produites chez des bactéries, puis purifiées par chromatographie et concentrées par lyophilisation. La protéine est solubilisée et la solution de filage est poussée à l’aide d’une seringue munie d’une aiguille de petit diamètre dans un bain d’alcool déshydratant.Enfin, les fibres synthétiques telles qu'elles sont filées sont soumises à un étirage postérieur afin d'améliorer l'orientation moléculaire des chaînes protéiques. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes telles que le filage électrostatique ou le filage à sec réside dans son coût plus faible, sa facilité de manipulation et son potentiel d'adaptation à une production à grande échelle. Les implications de cette technique s'étendent à la conception d'une nouvelle classe de biomatériaux.Ces matériaux peuvent être utilisés pour un large éventail d'applications différentes, telles que les sutures, les gilets pare-balles, ainsi que les cordes d'instruments de musique. Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur les propriétés matérielles des soies d'araignée, elle peut également être appliquée à l'étude d'autres types de biopolymères filés à partir de protéines recombinantes. En général, les personnes novices dans cette technique éprouveront des difficultés, car elle exige une expertise dans de nombreuses disciplines, notamment le génie biologique, la biophysique, la biologie cellulaire et moléculaire, ainsi que la biochimie.L'idée de cette méthode nous est d'abord venue lorsque nous avons eu besoin d'imiter le processus naturel de filage effectué par l'araignée afin de produire des fibres synthétiques. Pour générer le plasmide qui sera utilisé pour la production de soie d'araignée, l'ADNc de soie d'araignée souhaité est amplifié à l'aide de jeux d'amorces spécifiques et ligaturé dans un vecteur d'expression procaryote, tel que PBA topo thio fusion. Ce vecteur possède une étiquette thioredoxine en position N-terminale pour faciliter la solubilisation de la protéine de soie et une étiquette hexahistidine en position C-terminale pour la purification de la protéine.Une fois ligaturés, les produits de ligation sont transformés dans des cellules d’e. coli compétentes et une colonie contenant le plasmide est cultivée. L’expression de la protéine de soie d’araignée est ensuite induite par l’ajout d’AOSC, puis les cellules sont centrifugées et conservées à moins 80 degrés Celsius jusqu’à utilisation pour lyser les cellules bactériennes. Ajouter 20 millilitres de tampon de lyse 1 x au culot cellulaire afin de resuspendre complètement les cellules. Ensuite, pour favoriser une lyse cellulaire supplémentaire, ajouter de la lysozyme à une concentration de un milligramme par millilitre afin de digérer l’ADN chromosomique, ce qui réduit la viscosité de la solution à 100 microgrammes d’ADN.Ensuite, placez l'échantillon sur un agitateur orbital et agitez doucement pendant 20 minutes à température ambiante. Soniquez la solution pendant une minute au réglage 19 afin de clarifier la solution, puis centrifugez à 16 000 Gs pendant 10 minutes à quatre degrés Celsius. Après la centrifugation, vérifiez que le surnageant est non visqueux et clair ; si la solution est visqueuse et trouble, ajoutez davantage d'ADN, puis soniquez à nouveau et centrifugez pour récupérer le surnageant.Une fois le surnageant clair, le transvaser dans une colonne propre de chromatographie d'affinité au nickel NTA de 25&nbsp;mL BioRad. Pour purifier la protéine de fusion, ajouter un millilitre de suspension de nickel NTA contenant 0,5&nbsp;mL de billes à la colonne, bien fixer le bouchon et le robinet, puis placer la colonne sur un agitateur rotatif pendant une heure afin de permettre l'équilibrage et la fixation de la marque six X his sur les billes de nickel NTA. Placer la colonne verticalement sur un support et laisser les billes de nickel NTA se déposer pendant environ deux minutes.Lorsque les billes sont complètement déposées, une couche bleu pâle est visible au fond. Retirez le bouchon et laissez s'écouler la solution à travers le robinet. Recueillez la solution dans un tube conique de 15 millilitres.Pour une analyse ultérieure, ajoutez 20 millilitres de tampon de lavage 1 x et laissez les betteraves se déposer. Ouvrez le robinet et recueillez l'écoulement en quatre aliquotes de cinq millilitres. Pour une analyse ultérieure, conservez les aliquotes à quatre degrés Celsius ou à moins 80 degrés Celsius, respectivement pour une conservation à court ou à long terme.Remarquez que des volumes de lavage supplémentaires peuvent être utilisés pour réduire les protéines contaminantes, toutefois cela peut diminuer le rendement global en protéines. Ensuite, ajoutez 20 millilitres de tampon de élution à 1 x et laissez le résine se tasser, ouvrez le robinet et laissez la solution s'écouler. Récupérez cette solution, qui contient 20 millilitres, en quatre aliquots de cinq millilitres pour une analyse ultérieure.Conserver à quatre degrés Celsius ou à moins 80 degrés Celsius respectivement pour un stockage à court ou à long terme. Remarquez qu'il est possible de recueillir des volumes supplémentaires d'élution à partir de la résine au nickel NTA si nécessaire. Ensuite, séparer les protéines en fonction de leurs masses moléculaires.À l'aide de l'analyse par électrophorèse SDS-PAGE, visualisez les protéines par coloration argentique ou bleu brillant de Coomassie R-250 ; seules les fractions pures doivent être utilisées pour les étapes suivantes. Confirmez l'identité de la protéine purifiée par analyse en immunotransfert (Western blot). Pour éliminer les sels et concentrer la protéine, effectuez une dialyse puis lyophilisez l'échantillon conformément aux instructions du document joint, et conservez les échantillons lyophilisés à −80 °C. L'objectif des étapes suivantes est de préparer la dope et la seringue pour le procédé de filage, en travaillant sous hotte de sécurité.Ajouter soigneusement la quantité appropriée de HEXA fluoro, d'ISOPROPANOL ou de HFIP à chaque tube contenant la poudre protéique sèche afin d'obtenir une concentration de 200 milligrammes par millilitre à 500 milligrammes par millilitre, ou de 20 % à 50 % poids par volume. Refermer le tube dès que possible après l'ajout d'HFIP, filmer les tubes et les placer sur un agitateur rotatif pour solubiliser la protéine par vortex afin de faciliter la solubilisation. Cette étape peut prendre jusqu'à deux jours.Une fois solubilisé, centrifuger l'échantillon à 16 000 G pendant deux à trois minutes. Une fois la protéine en solution, on l'appelle dope de filage. La solution sera extrêmement visqueuse.Veillez à l'absence d'agrégats, car ceux-ci pourraient obstruer la seringue. À l'étape suivante, chargez soigneusement au moins 25 microlitres de la solution filante dans une seringue Hamilton Gast tight, équipée d'une aiguille d'un diamètre de 127 microns, en tenant la seringue avec l'aiguille orientée vers le haut pour appuyer sur le piston. Pour éliminer toute bulle d'air, il est très important de retirer les bulles d'air, car elles créeraient des irrégularités dans la fibre.Ensuite, fixer la seringue à un appareil Harvard, pompe à seringue 11 plus. Placer un bécher de 400 millilitres rempli d'isopropanol à 95 % sur un support mobile de manière que l'extrémité de la seringue affleure à peine la surface de l'alcool. Régler la pompe à seringue à 15 microlitres par minute et appuyer sur démarrer.L'extrusion de la fibre doit prendre environ une à deux minutes, selon le volume initial de la solution de filage. Une fois que toute la solution a été transformée en fibre, laisser la fibre reposer dans l'isopropanol pendant 20 minutes afin qu'elle s'équilibre complètement.Ensuite, l'échantillon est recueilli à l'aide d'un dispositif d'enroulement. Le dispositif d'enroulement utilisé ici a été fabriqué en collant des peignes métalliques sur un pied à coulisse numérique. Comme illustré sur cette image, appliquez du ruban adhésif double face sur les deux côtés du peigne du dispositif d'enroulement.Ensuite, fixez le dispositif d'enroulement à un moteur. Réglez le moteur pour enrouler les fils à deux tours par minute. Puis, à l'aide de pinces, saisissez délicatement une extrémité de la fibre et tirez lentement celle-ci hors de l'isopropanol.Fixez-le au bord d'un des bras du peigne sur le bobinage. À l'aide du ruban adhésif double face, effectuez les quelques étapes suivantes sans interruption afin d'éviter que les fibres ne s'assèchent. Mettez le moteur en marche et utilisez une tige en verre pour guider délicatement la fibre vers le dispositif de bobinage.Ne pas laisser la fibre se replier ni s'empiler. Le ruban adhésif double face doit empêcher la fibre entière de glisser et permettre un étirement sélectif des segments internes des fibres entre les mâchoires du pied à coulisse.Une fois que la fibre entière est enroulée, détachez la bobine du moteur et appliquez de la colle sur le bord de chaque fibre de soie sur le ruban adhésif double face. Cela fixe la soie d'araignée sur l'appareil. Fixez la bobine à l'actionneur linéaire pour effectuer l'étirage post-spinnage.Déterminez la longueur initiale des fibres à l'aide du C. Il s'agit de la longueur interne de la fibre. Elle n'inclut pas la longueur collée et enroulée autour du mandrin. Abaissez le mandrin dans un bain d'isopropanol à 75 %.Laisser les fibres s'équilibrer pendant 10 minutes. Régler la vitesse de l'actionneur linéaire à 1,5 millimètre par seconde. En fonction de la longueur initiale, calculer la longueur finale correspondant au taux d'étirage postérieur souhaité.La longueur d'étirement peut être contrôlée en fonction de la vitesse ou de la longueur, selon le dispositif expérimental. Par exemple, avec une longueur initiale de 15 millimètres et un rapport d'étirage souhaité de trois x après l'étape de filage, la longueur finale doit être de 45 millimètres. Ce résultat peut également être obtenu en activant l'actionneur linéaire pendant 20 secondes à une vitesse de 1,5 millimètre par seconde.Deuxièmement, une fois le prélèvement après le bac terminé, sortez lentement le bobinage de l'isopropanol. Laissez s'évaporer les gouttelettes d'isopropanol pendant une minute afin de collecter les échantillons. Commencez par couper une extrémité de la fibre tout en tenant l'autre extrémité avec une pince.Couper cette extrémité et monter la fibre sur des cadres en carton ou en feuille métallique à des fins de test. Si des rapports d'étirage supplémentaires après le bac sont souhaités, abaisser à nouveau le bobinage dans le bain d'isopropanol à 75 %. Laisser les fibres s'équilibrer pendant 10 minutes, puis passer au bac suivant.Rapport d'étirage. Enregistrez l'humidité et la température, qui peuvent affecter les fibres. Propriétés mécaniques.Laisser les échantillons prélevés s'équilibrer dans l'environnement standard du laboratoire. Une humidité de 40 % et une température de 25 degrés Celsius sont idéales pendant au moins une heure avant les essais mécaniques. Une fois la fibre montée sur le cadre en carton, appliquer de la colle super glue sur les bords du carton ou de la feuille afin de fixer la fibre sur le cadre.Prenez note de la taille de l'ouverture du cadre. Il s'agit de la longueur initiale de la fibre testée. Un cadre avec une ouverture d'un pouce est illustré ici ; utilisez un microscope optique avec un grossissement de 100 x ou plus pour effectuer des mesures de diamètre le long de l'axe longitudinal de la fibre.Il convient d'enregistrer au moins trois mesures. Plus le grossissement utilisé est élevé et plus le nombre de mesures prises est grand, meilleure est la précision. Fixer le cadre en carton épais sur un cadre mécanique de traction.Ensuite, coupez le cadre des deux côtés afin que la tension ne passe que par la fibre. Déchirez l'étireuse et recueillez les données. Un taux de déformation standard de 2 % par seconde est recommandé.La procédure de collecte des données mécaniques peut varier selon la marque de l'étireuse utilisée pour les études. À l'aide des données recueillies sur le diamètre moyen, une courbe contrainte-déformation peut être tracée dans Microsoft Excel. La fibre rompue peut désormais être montée sur un microscope électronique à balayage, Stu, pour une analyse morphologique et des mesures du diamètre au point de rupture.Le segment de fibre éloigné du point de rupture peut être utilisé pour estimer et vérifier le diamètre initial mesuré au microscope optique. La protéine de soie d'araignée MASP1 a été exprimée et purifiée à partir de bactéries afin de déterminer la pureté de la protéine avant l'élaboration de la fibre ; les protéines ont alors été soumises à une fractionnement par taille. À l'aide d'une analyse par électrophorèse SDS-PAGE suivie d'une visualisation par coloration argentique, comme illustré ici, les six solutions révèlent que la majeure partie de l'échantillon est libérée au sein des quatre premières fractions.La protéine de soie d'araignée TUSP1 a également été produite selon le protocole présenté ici et filée en fibres afin de déterminer les propriétés mécaniques des soies synthétiques sous forme tubulaire. Les fibres ont été filées et des étirements postérieurs à des rapports croissants ont été effectués. Les couleurs de cette image montrent des fibres soumises à différents rapports d'étirement postérieur allant de 2,5 × à 6 ×. Les fibres présentent une faible variation au sein de chaque groupe de rapport.À mesure que les rapports de tirage du filateur augmentent, la résistance de la fibre augmente tandis que son allongement diminue. Toutefois, les fibres présentaient des niveaux équivalents de ténacité afin d'évaluer leur ultrastructure par microscopie électronique à balayage ; des images de fibres filées à partir de protéines recombinantes tsp une ont été obtenues, comme on peut le voir ici. La surface externe lisse est visible à un grossissement de 500 x, ainsi qu'à 5 000 x.Le noyau interne dense peut être observé à partir d'une rupture naturelle de la fibre. Cela suggère que les protéines recombinantes s'assemblent et se compactent correctement au cours du processus d'extrusion. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en 10 jours si elle est effectuée correctement.Lors de la réalisation de cette procédure, il est important d'éliminer tout le sel de la protéine recombinante purifiée avant l'étape de lyophilisation, et de s'assurer également que la concentration adéquate de la solution de mise en filage est utilisée afin d'éviter l'obstruction de l'aiguille durant le processus d'extrusion. Après son développement, d'autres fibroïnes, telles que mes, P one TUSB one et P ysb one, peuvent être filées en fibres individuelles ou sous forme de composites afin de produire une grande variété de biomatériaux. Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans les domaines du génie biologique et de la science des matériaux pour explorer l'utilisation des soies synthétiques d'araignée dans des applications ayant des implications dans les domaines militaire et médical, ainsi que dans les arts, le sport et l'industrie automobile.Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une meilleure compréhension de la façon de filer des fibres de soie synthétiques ou des matériaux composites en utilisant des protéines purifiées à partir de bactéries. N’oubliez pas que le travail avec AFib peut être extrêmement dangereux et que des précautions, telles que de travailler sous une hotte aspirante, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure.

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