Name: De procéder au lavage vaginal, coloration au cristal violet et lévaluation cytologique vaginal pour Souris cycle œstral Staging identification (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Apprenez à identifier les stades du cycle œstral chez la souris par cytologie vaginale non invasive. Cette méthode de coloration au cristal violet permet d'évaluer les fluctuations hormonales et facilite la recherche en biologie de la reproduction.

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Nous tenons à remercier Marc Leonard de Carleton Immersive Media Studio pour une assistance technique experte dans la production et le montage vidéo et le Dr Martin Bertrand de Carleton Immersive Media Laboratory régénération Studio / Neural à l&#39;aide du modèle visuel. Les auteurs tiennent à remercier le conseil d&#39;expert du Dr Marilyn Keaney et tout son personnel dévoué de l&#39;Université de protection des animaux d&#39;Ottawa et les Services vétérinaires. Ce travail a été financé par l&#39;Institut canadien de recherche en santé du Canada (IRSC, MOP 62826) pour SALB, l&#39;Institut du vieillissement des IRSC et l&#39;Initiative stratégique de formation en recherche en santé / Programme de formation des IRSC en Lipidomique neurodégénératives (96121 TGF) à SALB et SF, Fondation canadienne pour l&#39;innovation à SF, Ontario Innovation Trust à SF, et Autodesk recherche à SF. ACM reçoit une Banting et Best IRSC bourse de doctorat. NV reçoit une bourse de recherche post-professionnelle de l&#39;Institut du vieillissement des IRSC et de formation dans Lipidomique neurodégénératives.

1. Réactifs Préparation <ol><li> Pour un lavage vaginal stérile, autoclave eau bidistillée (ddH 2 O) et conserver dans un contenant hermétique à la température ambiante jusqu&#39;au moment de servir. </li><li> Pour l&#39;évaluation cytologique, ajouter 0,1 g de poudre de cristal violet à 100 ml de ddH 2 O. Mélangez bien. Cristal violet tache (0,1%) peut être conservé dans un récipient hermétique à température ambiante jusqu&#39;à ce que nécessaire. </li></ol> 2. Collecte des cellules vaginales (lavage vaginal) <ol><li> Monter une ampoule de latex sur la fin d&#39;une pointe stérile 200 ul et d&#39;établir environ 100 ul d&#39;eau stérile ddH 2 O en utilisant les graduations sur le bout de ligne directrice volume. </li><li> Soulevez la souris hors de sa cage et la placer sur la trémie cage (couvercle) avec son arrière-train / arrière vers vous. </li><li> Saisir fermement la queue et élever l&#39;extrémité arrière. La souris sera désormais seulement ses pattes avant saisie de la trémie. A ce stade, la souris peut uriner. Si c&#39;est le cas, Attendez jusqu&#39;à l&#39;arrêt de la miction. Faut-il urine gauche à l&#39;entrée du canal vaginal, vous pouvez rincer l&#39;ouverture avec un excès de O 2 en utilisant ddH une pointe distincte (c&#39;est à dire pas le bout de votre prélèvement de l&#39;échantillon). </li><li> Placer l&#39;extrémité de la ddH 2 O-remplie pointe à l&#39;ouverture du canal vaginal en prenant soin de ne pas pénétrer dans l&#39;orifice vaginal comme (et du col) peut induire une stimulation pseudogestation chez le rat 1,2. Des rapports récents suggèrent souris sont moins sensibles à cet effet néanmoins des précautions doivent être prises pour minimiser le degré d&#39;envahissement dans les analyses répétées 3. </li><li> Enfoncer doucement l&#39;ampoule pour expulser quart-moitié du volume d&#39;eau (~ 25-50 pi) à l&#39;ouverture de canal vaginal. Le liquide spontanément aspirer dans le canal sans pointe d&#39;insertion. Relâcher lentement la pression exercée sur l&#39;ampoule. Le liquide se replier dans la pointe. Évitez de libération de pression trop rapidement pour prévenir l&#39;aspiration de liquidedans l&#39;ampoule. Un conseil filtrée peut être utile à cet effet. </li><li> Répétez les étapes précédentes fois 4-5, en utilisant le même embout, ampoule, et fluide pour obtenir un nombre suffisant de cellules dans un seul échantillon. </li><li> Placez le fluide sur lame de verre, et de permettre le frottis sécher complètement à température ambiante. Une fois sec, ces frottis oestrus peut être teinté immédiatement ou stockées et colorées à une date ultérieure. </li></ol> 3. La coloration cytologique l&#39;aide de Crystal Violet * 4 <ol><li> Placer la lame à sec dans un bocal Coplin (ou un autre récipient coloration comparable) contenant le cristal violet coloration pendant 1 min. </li><li> Enlever à un deuxième pot Coplin contenant ddH 2 O. Laver la lame avec ddH 2 O pendant 1 min. Répéter. </li><li> Retirer l&#39;excédent ddH 2 O à partir des bords de la lame avec un tissu d&#39;essuie-glace légers, en évitant le contact avec le frottis coloré. </li><li> Pipeter environ 15 ul de glycérol sur le dessus du frottis et le couvercleglisser. Alternativement, d&#39;autres réactifs histologiques de montage peut être utilisé pour obtenir un plus permanent, non diffusant tache. </li></ol> * La méthode de coloration décrite ici est la procédure la plus simple qui peut être effectuée dans n&#39;importe quel laboratoire. D&#39;autres méthodes peuvent fournir des détails supplémentaires. Par exemple, en utilisant une coloration de Papanicolaou, la maturité des cellules épithéliales nucléées peuvent être distingués avec des cellules colorées turquoise moins matures et plus cellules matures rose ou orange-colorés. Ces différences peuvent être utilisés pour organiser proestrus tôt ou tard 4. 4. Cytologie vaginale <ol><li> Examiner le frottis au microscope optique pour déterminer les types cellulaires présents. L&#39;examen microscopique doit être effectué immédiatement après la coloration comme le cristal violet va diffuser à partir des cellules au cours du temps lors de l&#39;utilisation du glycérol pour recouvrement. Microphotographies doivent être prises au moment de l&#39;analyse pour documenter la cytologie. </li><li> Commençons par examiner le entire frottis à un faible grossissement. Sélectionnez une zone représentative et passer à un plus fort grossissement. Vous verrez cornified cellules épithéliales squameuses, leucocytes et / ou nucléées cellules épithéliales (résultats représentatifs, figure 1A-C). Le rapport présente des cellules vous permettra de déterminer le stade oestrus de votre souris au moment du prélèvement des échantillons (résultats représentatifs, figure 1D-G) et son statut hormonal immédiat (discussion, figure 2). </li></ol> 5. Les résultats représentatifs Cytologie: Trois types de cellules primaires peuvent être détectés dans des échantillons de frottis vaginaux: (1) nucléés cellules épithéliales (Figure 1A), (2) cornified cellules épithéliales squameuses (figure 1B), et (3) des leucocytes (figure 1C). Nucléées cellules épithéliales ont un cytoplasme légèrement teinté, plus sombre teinté membrane plasmique, et un noyau ovale ( <strong&gt; Figure 1A). Cornified cellules épithéliales squameuses sont uniformément colorées, plus de forme polygonale que leurs prédécesseurs nucléées épithéliales, et n&#39;ont pas de noyau (figure 1B). Leucocytes polynucléaires peuvent être distinguées des cellules épithéliales par leur forme irrégulière, sombre et teinté noyaux polymorphes, et de petite taille (figure 1C, flèches noires). En cas de contamination d&#39;urine être présents dans le frottis, cristaux d&#39;acide urique sont facilement détectés par leurs structures cristallines différentes à tous les types de cellules attendus (figure 3). Si cela se produit, et la détection obscure de type cellulaire prédominant, le frottis doit être jeté et ne pas utiliser pour des fins de mise en scène. Mise en scène: Le rapport relatif des types cellulaires observées dans les frottis peut être utilisée pour identifier le stade du cycle oestral de votre souris sur le jour du prélèvement de l&#39;échantillon (figure 1D-G). Pendant proestrus, les cellules sont presque exclusivementdes grappes de ronde, bien formée nucléées cellules épithéliales (figure 1D, cellule représentant a indiqué par la flèche blanche). Au cours de l&#39;oestrus, les cellules sont principalement cornified cellules épithéliales squameuses, présents dans les amas denses (figure 1E, cellule représentant a indiqué par flèche). Pendant metestrus, petits leucocytes colorés en foncé prédominent (figure 1F, cellule représentant a indiqué par la flèche noire). Cornified cellules épithéliales squameuses peuvent être observés, souvent en fragments, (figure 1F, cellule représentant a indiqué par flèche noire). Pendant diestrus, rares cornées cellules épithéliales squameuses peuvent encore être présentes (figure 1G, cellule représentant a indiqué par flèche noire), mais les leucocytes continuent de prédominer (figure 1G, cellule représentant a indiqué par la flèche noire). Metestrus peut être distingué de dioestrus par l&#39;apparition de cellules épithéliales nucléées dans dioestrus ( <stron<html> g&gt; Figure 1G, cellule représentant a indiqué par la flèche blanche). <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. L&#39;évaluation cytologique des frottis vaginaux peuvent être utilisés pour identifier stade oestrus Trois principaux types cellulaires sont détectées dans des échantillons de frottis vaginaux:. (A) nucléées, les cellules épithéliales (B) cornées squameuses cellules épithéliales, et (C) des leucocytes. Le rapport de ces types de cellules présents dans le frottis peut être utilisée pour identifier les souris (D) proestrus, (E) l&#39;oestrus, (F) metestrus, ou (G) tel que décrit dans dioestrus résultats représentatifs. Têtes de flèches noires en E, F et G à représentatives point de cornées cellules épithéliales squameuses. Les flèches noires en C, F et du point G à leykocytes représentatives. Les flèches blanches dans D et G représentant culminant nucléation des cellules épithéliales. . Jpg &quot;alt =&quot; Figure 2 &quot;/&gt; Figure 2. Cytologie sur frottis vaginal reflète les événements endocriniens sous-jacents. Détails sont également fournis dans le rapport. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4389/4389fig2large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour agrandir la figure</a> . <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig3.jpg" alt="Figure 3" /> Figure 3. Cristaux d&#39;acide urique peuvent être présentes ci-dessous coloration au cristal violet d&#39;urine contaminés par des échantillons. (A) Les cristaux sont transparents et peuvent être de tailles différentes (flèches et de la région en boîte agrandies en (B)). Pas de cellules sont présentes dans ce domaine. Devrait urique contamination cristal d&#39;acide dans les champs utilisés pour la coloration cytologique être présent, il peut être difficile d&#39;identifier avec précision les types cellulaires présents et le frottis doit être jeté. Barres d&#39;échelle = 50 um.

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Les auteurs ne déclarent aucun conflit d&#39;intérêts. Toutes les expériences sur les animaux ont été effectuées en stricte conformité avec les directives et règlements établis par l&#39;Université d&#39;Ottawa Comité des soins des animaux et le Conseil canadien de protection des animaux.

Ces changements dans la typologie cellules sont indicatifs d&#39;événements endocriniens sous-jacents. La phase de proestrus du cycle oestral correspond à la phase folliculaire humain du cycle menstruel et 5 est défini par une augmentation pré-ovulatoire en circulation β-17-estradiol 6, ainsi que d&#39;une petite poussée en prolactine 7 (Figure 2, Proestrus, panneau de gauche). L&#39;augmentation de la 17-β-estradiol stimule indirectement gonadolibérine hormone de neurones dans l&#39;hypothalamus et le septum qui, à leur tour, activent les cellules sensibles dans l&#39;hypophyse antérieure pour libérer l&#39;hormone lutéinisante et hormone folliculo-stimulante dans la circulation 8,9 (figure 2 , Proestrus, panneau de gauche). Dans les frottis vaginaux prélevés sur des animaux dans proestrus, les cellules sont presque exclusivement des ovales nucléées cellules épithéliales (figure 1D, figure 2, Proestrus, panneau de droite). Le pic de folliculo-stimulante hormune ovulation et les niveaux des signaux d&#39;entrée en oestrus 10,11. Au cours de l&#39;oestrus, 17-β-estradiol et de prolactine baisse des niveaux de pointe 6,7 (Figure 2, oestrus, panneau de gauche). Frottis vaginaux sont caractérisées par une détection quasi exclusif de cornées irrégulières cellules épithéliales squameuses souvent en touffes (figure 1E, figure 2, oestrus, panneau de droite). Entrée en metestrus coïncide avec une hausse continue des taux d&#39;hormones progestérone 6 et correspond au début de la phase lutéale humaine 12 (figure 2, metestrus, panneau de gauche). Comme les niveaux de progestérone commence à augmenter et il ya une petite abattée en 17-β-estradiol en réponse à l&#39;activation du corps jaune 6,13,14 (Figure 2, metestrus, panneau de gauche). Les types cellulaires présents dans les frottis vaginaux au cours de cette étape sont fragmentés, cornées cellules épithéliales et les leucocytes sombres petites tachés (Figure 1F, figure 2, metestrus, panneau de droite). Enfin, l&#39;entrée en diestrus chez la souris se produit et les taux circulants de progestérone pic 6, correspondant à la phase lutéale tardive de l&#39;homme 12. Régression du corps jaune entraîne une baisse brutale de la progestérone 15,16 (figure 2, Diestrus, panneau de gauche). Leucocytes prédominent dans les frottis au cours diestrus. La fréquence des cornées cellules épithéliales est réduite et nucléées cellules épithéliales commencent à être détectée juste avant la transition à proestrus (figure 1G, figure 2, Diestrus, panneau de droite). En résumé, ce protocole simple, la routine peut être utilisée pour estimer les fluctuations hormonales quotidiennes et d&#39;établir stade oestrus chez les souris expérimentales, sans modifier le statut reproducteur si les précautions suivantes sont prises. L&#39;échantillonnage doit être effectué au plus une fois par jour en utilisant le protocole non invasif described ici par rapport à la pénétration répétée du canal vaginal, aspiration, et une agitation. Ceci peut provoquer une irritation vaginale, résultant en une réponse inflammatoire résultant 17 dans les leucocytes et les autres types de cellules d&#39;être présents dans les frottis qui peuvent confondre évaluation cytologique. En outre, même dans les colonies logées les femmes, il est normal de voir diestrus longues et des stades différents d&#39;oestrus chez la souris que l&#39;induction et de 18 anestrous et cette identification est utile dans l&#39;interprétation de l&#39;impact hormonal de la reproduction, le sexe et l&#39;étude des maladies. La variabilité dans la longueur du cycle est également mis en place avec l&#39;âge et par les différences de logements dans les colonies (individu ou un groupe-logement) des femelles 7,19-21. Femelles hébergées chez la femelle-seulement les colonies peuvent cesser de vélo et entrer dans un état ​​de longue diestrus 18,22,23 bien que le vélo peut être rétablie par l&#39;exposition à des cages prétraitées avec de l&#39;urine mâle à obtenir le cyclisme 24,25. Ainsi, pour établir individualongueurs de cycle l pour une souris donnée, il est recommandé que les évaluations non invasives décrites ici sont effectuées chaque jour, avec soin, jusqu&#39;à ce que deux cycles complets sont respectées.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Entreprise </td><td> Catalogue # </td></tr><tr><td> Stériles 200 embouts de pipette ul </td><td> Diamed </td><td> E340901 </td></tr><tr><td> Poire latex (1 ml) </td><td> Pêcheur </td><td> 03-488-21 </td></tr><tr><td> Lames de microscope </td><td> Pêcheur </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Cristal Violet tache (25 g) </td><td> Pêcheur </td><td> C581-25 </td></tr><tr><td> Essuie-glaces tissus légers </td><td> VWR </td><td> 82003-820 </td></tr><tr><td> Glycérol </td><td> Pêcheur </td><td> BP229-1 </td></tr><tr><td> Couverture en verre de microscope (22x30) </td><td> Pêcheur </td><td> 12-544A </td></tr></tbody></table>

de procéder au lavage vaginal, coloration au cristal violet et l&#39;évaluation cytologique vaginal pour souris cycle œstral staging identification

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Un moyen rapide d&#39;évaluer le statut reproducteur chez les rongeurs n&#39;est pas seulement utile dans l&#39;étude des troubles de la reproduction, mais est également nécessaire pour la production de nouveaux modèles de souris de la maladie et des enquêtes sur la régulation hormonale de la dégénérescence des tissus (ou régénération) après l&#39;épreuve pathologique. Le murin de reproduction (ou oestrus) cycle est divisé en 4 étapes: pro-œstrus, oestrus, metestrus et diœstrus. Fluctuations définies dans les taux circulants des stéroïdes ovariens 17-β-estradiol et de progestérone, les gonadotrophines lutéinisante et folliculo hormones stimulantes, et la transition hormone prolactine lutéotrope signal à travers ces étapes de la reproduction. Les changements dans la typologie de cellules dans le canal vaginal murin tenir compte de ces événements endocriniens sous-jacents. Évaluation journalière de la proportion relative des cellules épithéliales nucléées, cornées cellules épithéliales squameuses, et les leucocytes présents dans les frottis vaginaux peuvent être utilisées pour identifier oestral murinstades. Le degré d&#39;invasivité, cependant, employées dans la collecte de ces échantillons peuvent modifier le statut de la reproduction et provoquer une réponse inflammatoire qui peut confondre l&#39;évaluation cytologique du frottis. Ici, nous décrivons un simple, non invasive protocole qui peut être utilisé pour déterminer le stade du cycle oestral d&#39;une souris femelle sans altérer son cycle de reproduction. Nous détaillons comment faire la différence entre les quatre étapes du cycle œstral par la collecte et l&#39;analyse de la typologie cellulaire prédominant dans les frottis vaginaux et nous montrons comment ces changements peuvent être interprétés en ce qui concerne le statut endocrinien.

Ici, nous décrivons comment identifier le stade de la reproduction murin (proestrus, oestrus, metestrus ou diestrus) par simple, non invasive collecte et l&#39;évaluation cytologique des échantillons frottis vaginaux. En outre, nous décrivons comment la cytologie vaginale reflète les taux circulants hormonaux qui sous-tendent la transition dans le cycle de reproduction murin.

De procéder au lavage vaginal, coloration au cristal violet et l&#39;évaluation cytologique vaginal pour Souris cycle œstral Staging identification

Un moyen rapide d'évaluer l'état reproducteur chez les rongeurs est utile non seulement pour l'étude des dysfonctionnements reproducteurs, mais est également requis pour le...

Toutes les procédures réalisées dans cette étude ont été effectuées conformément aux lignes directrices et aux règlements établis par le Comité de soins aux animaux de l'Université d'Ottawa et par le Conseil canadien de protection des animaux. Un moyen rapide d'évaluer l'état reproductif des rongeurs est utile non seulement dans l'étude des troubles de la reproduction, mais est également nécessaire pour la création de nouveaux modèles murins de maladie et pour les recherches sur la régulation hormonale de la dégénérescence ou de la régénération tissulaire suite à une agression pathologique. Nous décrivons ici comment déterminer la phase du cycle reproductif des souris femelles à un jour donné, au moyen d'une évaluation cytologique simple et non invasive du type cellulaire prédominant présent dans les frottis vaginaux.Le cycle reproducteur ou œstral miroir est divisé en quatre stades. Les phases PROE, œstre, métœstre et diœstre définissent les fluctuations des concentrations circulantes des stéroïdes ovariens, l’œstradiol 17 bêta et la progestérone, des gonadotrophines, les hormones lutéinisante et folliculo-stimulante, ainsi que de l’hormone lutéo-trophique prolactine, qui signalent la transition entre ces stades reproducteurs. La phase de proœstre du cycle œstral correspond à la phase folliculaire du cycle menstruel humain et se caractérise par une augmentation pré-ovulatoire des concentrations circulantes d’œstradiol 17 bêta, ainsi que par une légère poussée de prolactine.L'augmentation de l'estradiol 17 bêta est suivie par une hausse des taux circulants d'hormone lutéinisante et d'hormone folliculo-stimulante. Le pic du taux d'hormone folliculo-stimulante signale l'ovulation et l'entrée en œstrus. Pendant le stress œstral, les taux d'estradiol 17 bêta diminuent ainsi que ceux de la prolactine.L'entrée maximale en métœstre coïncide avec une légère augmentation des niveaux circulants de l'hormone folliculo-stimulante et correspond au début de la phase lutéale humaine. Les niveaux de progestérone commencent à augmenter et une deuxième légère augmentation des niveaux de 17 bêta-estradiol se produit. En réponse à l'activation du corps jaune, l'entrée en diœstre chez la souris se produit lorsque les niveaux circulants de progestérone atteignent leur maximum et correspond à la phase humaine.Phase lutéale tardive. La régression du corps jaune entraîne une diminution marquée des taux de progestérone et l'entrée en proté. Les modifications de la typologie cellulaire reflètent ces événements endocriniens sous-jacents par le rapport relatif des cellules épithéliales.Les cellules et les leucocytes quantifiés détectés dans les frottis vaginaux peuvent être utilisés pour identifier chacune des étapes du cycle œstral. Bonjour, je m'appelle Ashley McLean. Je suis chercheuse dans le laboratoire de régénération neurologique sous la direction de la Dre Stephanie Bennett à l'Université d'Ottawa.Et je suis Nicholas Valenzuela. Je travaille avec le Dr Steven Phi au Carlton Immersive Media Studio de l'Université Carlton à Ottawa. Dans cette vidéo, nous décrivons un protocole simple qui peut être utilisé pour la détermination du stade du cycle extra-EST.Ce protocole détaillera comment distinguer les quatre stades reproductifs de la souris — proestrus, métœstrus, œstrus et diœstrus — en évaluant la typologie cellulaire prédominante et les frottis vaginaux. Commençons donc. Pour ce protocole, vous devrez préparer deux objets, de l'eau distillée doublement stérilisée et une solution de violet de crésyl à 0,1 %.La solution de coloration peut être conservée dans un récipient hermétiquement fermé à température ambiante jusqu'à son utilisation. Commencez par placer une poire en latex à l'extrémité d'une pipette stérile de 200 microlitres et aspirez environ cent microlitres d'eau doublement distillée stérile. Utilisez les graduations de la pipette comme guide de volume.Placez votre souris sur le distributeur de nourriture de manière à ce que son arrière-train soit orienté vers vous. Saisissez fermement sa queue et soulevez doucement son arrière-train. La souris utilisera ses pattes avant pour s'accrocher au distributeur.À ce stade, la souris peut uriner. Dans ce cas, rincez la région avec de l'eau doublement distillée à l'aide d'une pipette distincte. Placez l'extrémité de votre pipette remplie d'eau doublement distillée à l'ouverture du canal vaginal.Appuyez doucement sur l'ampoule et expulsez un quart à la moitié du volume d'eau dans le canal vaginal. Relâchez ensuite lentement la pression exercée sur l'ampoule, en réaspirant le liquide dans l'embout. Répétez cette étape précédente quatre à cinq fois en utilisant le même embout et le même liquide.Évitez de relâcher la pression trop rapidement afin de ne pas aspirer le liquide dans la poire. Une pointe filtrante peut s'avérer utile à cet effet. Replacez la souris dans sa cage et expulsez le liquide sur la lame de verre.Laisser la lame sécher complètement à température ambiante. Une fois sèche, ces frottis supplémentaires peuvent être colorés immédiatement ou à une date ultérieure. Placer la lame séchée à l'air dans la coloration au violet de crésyl pendant une minute.Lavez la lame avec de l’eau doublement distillée pendant une minute. Répétez l’opération, puis retirez l’excès d’eau doublement distillée de la lame à l’aide d’un essuie-tout léger. Évitez la région de l’empreinte colorée ; ajoutez environ 20 microlitres de glycérol au-dessus de l’empreinte et placez une lamelle de couvre-objet.Vous devez examiner les frottis colorés le plus rapidement possible en microscopie optique, car la coloration diffusera progressivement hors des cellules dans le milieu de montage au glycérol. Commencez par examiner l'ensemble du frottis à un grossissement plus faible. Sélectionnez une zone représentative, puis passez à un grossissement plus élevé.Au stade Pro Astra, les cellules sont presque exclusivement des cellules épithéliales nucléées. Au stade extra, les cellules observées sont principalement des cellules épithéliales squameuses cornifiées, formant généralement des agrégats densément groupés. Ces cellules ont une forme irrégulière et ne possèdent pas de noyau visible.Pendant la phase métœstrus, de rares cellules épithéliales squameuses cornifiées sont encore observées, mais désormais une prédominance de leucocytes plus petits et plus fortement colorés apparaît. Pendant la phase diœstrus, il existe peu, voire aucun, de cellules épithéliales squameuses cornifiées. Les leucocytes restants sont présents en grand nombre.Des cellules épithéliales nucléées sont observées, présentes à la fois sous forme de cellules isolées et en amas. Un problème que vous pourriez rencontrer est la contamination de votre frottis par de l'urine. Si cela se produit, vous devez jeter le frottis et ne pas l'utiliser pour le stade.Nous venons de vous montrer comment réaliser des lavages vaginaux. Prélevez des échantillons, coloriez ces échantillons et analysez la typologie cellulaire afin de déterminer la phase du cycle œstral des souris femelles au moment de l'analyse. Pour résumer, durant la phase préovulatoire (PROE), un pic des concentrations circulantes d'estradiol 17β se traduit par une prédominance de cellules épithéliales nucléées bien formées dans les frottis vaginaux.Un pic ultérieur des niveaux d'hormone folliculo-stimulante signale l'ovulation et l'entrée dans l'estrus. Les cellules épithéliales squameuses cornifiées prédominent dans les frottis. Pendant le métrus, les niveaux de progestérone augmentent. Les types cellulaires présents dans les frottis vaginaux à ce moment sont des cellules épithéliales cornifiées fragmentées et des leucocytes plus petits, plus foncement colorés.Pendant la dièse, avec un pic de progestérone, des cellules épithéliales nucléées commencent à apparaître. Les leucocytes sont encore présents. Pour s'assurer qu'une souris femelle présente un cycle régulier et déterminer la durée du cycle œstral, ces évaluations doivent être effectuées quotidiennement et analysées sur deux cycles complets ; il est normal d'observer des phases de dièse et d'œstrus prolongées chez différentes souris.Nous espérons que cela vous aidera dans vos études axées sur le genre et les hormones, et bonne chance avec vos expériences.

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Techniques clés à utiliser dans l'évaluation...

Protocoles pour l&#39;inoculation vaginale et prélèvement d&#39;échantillons dans le modèle expérimental chez la souris des Candida Vaginite

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De procéder au lavage vaginal, coloration au cristal violet et lévaluation cytologique vaginal pour Souris cycle œstral Staging identification (Vidéo) | JoVE Journal

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