Name: La micro-injection dinsuline de lhippocampe et In vivo Test de la mémoire spatiale cours (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-01-11T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 32 s
Description: Apprenez la micro-injection intrahippocampique et la microdialyse in vivo pour mesurer le métabolisme cérébral pendant les tests comportementaux chez l'animal conscient. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes neurochimiques de la mémoire spatiale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ce travail a été soutenu par le NIH / NIDDK (DK077106 à ECM).

<ol><li>McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreases+in+rat+extracellular+hippocampal+glucose+concentration+associated+with+cognitive+demand+during+a+spatial+task%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (6), 2881(2000).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+hippocampal+extracellular+fluid+glucose+concentration+during+behavioral+testing+and+following+systemic+glucose+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A.+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in hippocampal extracellular fluid glucose concentration during behavioral testing and following systemic glucose administration.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 56 (2), 66(2001).</li>
<li>McNay, E. C., McCarty, R. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+brain+glucose+concentration+during+behavioral+testing%3A+dissociations+between+brain+areas+and+between+brain+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn.+Mem%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in brain glucose concentration during behavioral testing: dissociations between brain areas and between brain and blood.</a> Neurobiol. Learn. Mem. 75 (3), 325(2001).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glucose+concentrations+in+the+rat+hippocampus+measured+by+zero-net-flux%3A+effects+of+microdialysis+flow+rate%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Extracellular glucose concentrations in the rat hippocampus measured by zero-net-flux: effects of microdialysis flow rate.</a> 72 (2), 785(1999).</li>
<li>McNay, E. C., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+recurrent+hypoglycemia+on+spatial+cognition+and+cognitive+metabolism+in+normal+and+diabetic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Effect of recurrent hypoglycemia on spatial cognition and cognitive metabolism in normal and diabetic rats.</a> Diabetes. 53 (2), 418(2004).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>McNay, E. C., McCarty, R. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluctuations+in+brain+glucose+concentration+during+behavioral+testing%3A+dissociations+between+brain+areas+and+between+brain+and+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Fluctuations in brain glucose concentration during behavioral testing: dissociations between brain areas and between brain and blood.</a> Neurobiology of Learning & Memory. 75 (3), 325(2001).</li>
<li>McNay, E. C., Williamson, A., McCrimmon, R. J., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+and+neural+hippocampal+effects+of+long-term+moderate+recurrent+hypoglycemia%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Cognitive and neural hippocampal effects of long-term moderate recurrent hypoglycemia.</a> Diabetes. 55 (4), 1088(2006).</li>
<li>McNay, E. C., Sherwin, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+artificial+cerebro-spinal+fluid+%28aCSF%29+to+artificial+extracellular+fluid+%28aECF%29%3A+microdialysis+perfusate+composition+effects+on+in+vivo+brain+ECF+glucose+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">From artificial cerebro-spinal fluid (aCSF) to artificial extracellular fluid (aECF): microdialysis perfusate composition effects on in vivo brain ECF glucose measurements.</a> Journal of Neuroscience Methods. 132 (1), 35(2004).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiology of Learning and Memory. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>Benveniste, H., Drejer, J., Schousboe, A., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+cerebral+glucose+phosphorylation+and+blood+flow+after+insertion+of+a+microdialysis+fiber+through+the+dorsal+hippocampus+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Regional cerebral glucose phosphorylation and blood flow after insertion of a microdialysis fiber through the dorsal hippocampus in the rat.</a> Journal of Neurochemistry. 49 (3), 729(1987).</li>
<li>Benveniste, H., Diemer, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+reactions+to+implantation+of+a+microdialysis+tube+in+the+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Cellular reactions to implantation of a microdialysis tube in the rat hippocampus.</a> Acta Neuropathologica. 74 (3), 234(1987).</li>
<li>McNay, E. C., Fries, T. M., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreases+in+rat+extracellular+hippocampal+glucose+concentration+associated+with+cognitive+demand+during+a+spatial+task%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Decreases in rat extracellular hippocampal glucose concentration associated with cognitive demand during a spatial task.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (6), 2881(2000).</li>
<li>McNay, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+memory+processes+are+modulated+by+insulin+and+high-fat-induced+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Hippocampal memory processes are modulated by insulin and high-fat-induced insulin resistance.</a> Neurobiol. Learn Mem. 93 (4), 546(2010).</li>
<li>Lonnroth, P., Jansson, P. -A., Smith, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microdialysis+method+allowing+characterization+of+intercellular+water+space+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">A microdialysis method allowing characterization of intercellular water space in humans.</a> American Journal of Physiology. 1987, E228(1987).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+glucose+concentrations+in+the+rat+hippocampus+measured+by+zero-net-flux%3A+effects+of+microdialysis+flow+rate%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Extracellular glucose concentrations in the rat hippocampus measured by zero-net-flux: effects of microdialysis flow rate.</a> 72 (2), 785(1999).</li>
<li>Lalonde, R. obert <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiological+basis+of+spontaneous+alternation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+%26+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The neurobiological basis of spontaneous alternation.</a> Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 26 (1), 91(2002).</li>
<li>Richman, C., Dember, W., Kim, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+alternation+behavior+in+animals%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Psychology%22%5BJournal%5D)">Spontaneous alternation behavior in animals: A review.</a> Current Psychology. 5 (4), 358(1986).</li>
<li>McNay, E. C., Canal, C. E., Sherwin, R. S., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+memory+with+septal+injections+of+morphine+and+glucose%3A+effects+on+extracellular+glucose+levels+in+the+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Modulation of memory with septal injections of morphine and glucose: effects on extracellular glucose levels in the hippocampus.</a> Physiol. Behav. 87 (2), 298(2006).</li>
<li>McNay, E. C., Gold, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+modulation+across+neural+systems%3A+intra-amygdala+glucose+reverses+deficits+caused+by+intraseptal+morphine+on+a+spatial+task+but+not+on+an+aversive+task%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Memory modulation across neural systems: intra-amygdala glucose reverses deficits caused by intraseptal morphine on a spatial task but not on an aversive task.</a> Journal of Neuroscience. 18 (10), 3853(1998).</li>
<li>Rex, A., Bert, B., Fink, H., Voigt, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulus-dependent+changes+of+extracellular+glucose+in+the+rat+hippocampus+determined+by+in+vivo+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Stimulus-dependent changes of extracellular glucose in the rat hippocampus determined by in vivo microdialysis.</a> Physiol. Behav. 98 (4), 467(2009).</li>
</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

Toutes les solutions utilisées dans microdialyse doit être filtré immédiatement avant l&#39;utilisation, en utilisant un filtre 0,2 um. Après l&#39;insertion de la sonde dans la canule de guidage, d&#39;observer afin de confirmer que l&#39;écoulement est libre et collecte des échantillons est en cours. Si le débit s&#39;arrête après l&#39;insertion, la cause la plus probable des dommages à la membrane de la sonde causée par l&#39;insuffisance des soins lors de l&#39;insertion, et une sonde de frais doit être remplacé. <...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> La majorité des réactifs de laboratoire sont de qualité standard et peut être obtenu auprès d&#39;un fournisseur de choix. De même, des équipements tels que pompes à seringues et des tubes peut être utilisé à partir de n&#39;importe quel de plusieurs fabricants. Les éléments spécifiques utilisés ici pour les détails qui sont importants sont: </td></tr><tr><td> Sondes de microdialyse CMA 12 </td><td> CMA / microdialyse </td><td> AMC-12-XXX </td><td> Ils sont disponibles dans des longueurs différentes membranes et seuils, indiquées par des codes spécifiques dans le «XXX». </td></tr><tr><td> L&#39;insuline humaine (Humulin) </td><td> Eli Lilly </td><td> N / a </td><td></td></tr><tr><td> Pivotant liquide </td><td> Instech </td><td> 375/D/22QM </td><td> Ce pivot est spécifique très faible couple et le volume interne, ainsi que d&#39;un nonreactive doublure quartz. </td></tr></tbody></table>

la micro-injection d&#39;insuline de l&#39;hippocampe et<em&gt; in vivo</emmicrodialyse&gt; test de la mémoire spatiale cours

Hippocampal Insulin Microinjection and In vivo Microdialysis During Spatial Memory Testing

Le métabolisme du glucose est un marqueur utile pour l&#39;activité neuronale locale, formant la base de méthodes telles que l&#39;imagerie par résonance 2-désoxyglucose et magnétique fonctionnelle. Cependant, l&#39;utilisation de ces méthodes dans des modèles animaux nécessite une anesthésie et donc à la fois modifie l&#39;état du cerveau et empêche mesures comportementales. Une autre méthode est l&#39;utilisation de la microdialyse in vivo de prendre la mesure en continu des concentrations cérébrales fluides extracellulaires de métabolites du glucose, de lactate et connexes dans éveillé, animaux en liberté. Cette technique est particulièrement utile lorsqu&#39;il est combiné avec des tâches visant à s&#39;appuyer sur des régions spécifiques du cerveau et / ou de manipulation pharmacologique aiguë, par exemple, les mesures de l&#39;hippocampe au cours d&#39;une tâche de mémoire de travail spatiale (alternance spontanée) montrent une baisse de la glycémie extracellulaire et l&#39;augmentation de lactate qui sont suggestive de 1,2 glycolyse accrue, et l&#39;administration d&#39;insuline à la fois intrahippocampique améliore la mémoire et augmente glycol hippocampelyse 3. Des substances telles que l&#39;insuline peut être livré à l&#39;hippocampe par la sonde de microdialyse même utilisé pour mesurer les métabolites. L&#39;utilisation de l&#39;alternance spontanée comme une mesure de la fonction hippocampique est conçu pour éviter tout confondre de motivation stressantes (p. ex footshock), de retenue ou de récompense (par exemple la nourriture), qui peuvent tous altérer l&#39;exécution des tâches à la fois et le métabolisme, cette tâche fournit également un mesurer l&#39;activité motrice qui permet de contrôler pour les effets non spécifiques de traitement. Ensemble, ces méthodes permettent la mesure directe des variables neurochimiques et régulant le comportement métabolique.

Les rats doivent se remettre rapidement de la chirurgie et être à l&#39;affût, mobiles et actifs dans les 30 min après l&#39;arrêt de l&#39;anesthésie. L&#39;impact du bouchon canule devrait être minime si l&#39;opération est effectuée proprement et minimale de ciment dentaire est utilisé. Si aucun signe d&#39;infection est remarqué au cours de la surveillance post-opératoire, ou le rat est de toute façon à montrer des signes de détresse ou d&#39;inconfort, résilier immédiatement l&#39;expérience, ce qui devrait être ex...

Modulation de charge hippocampally-mémoire de travail spatiale par micro-injection directe intrahippocampique, accompagnée et suivie d&#39;<em&gt; In vivo</emMicrodialyse&gt; pour les métabolites dans des animaux conscients et se comportent.

La micro-injection d&#39;insuline de l&#39;hippocampe et<em&gt; In vivo</emMicrodialyse&gt; Test de la mémoire spatiale cours

Le métabolisme du glucose est un marqueur utile de l'activité neurale locale, constituant la base de méthodes telles que le 2-désoxyglucose et l'imagerie par résonance magnétique fonctionnelle...

L'objectif général de cette procédure est de mesurer le métabolisme hippocampique pendant des tests comportementaux. Cela est réalisé en préparant chirurgicalement un animal habitué à la manipulation, équipé d'une canule guide pour microdialyse. Le jour du test, une sonde de microdialyse est insérée dans la canule et le débit du système PERFUSE eight est vérifié.Ensuite, on laisse la sonde s'équilibrer pendant que l'animal est placé dans une chambre de contrôle. En fin de compte, des méthodes analytiques appropriées, par exemple une réaction de glucose oxydase, NADP, N-A-D-P-H et une analyse fluorimétrique, si la mesure du glucose est utilisée pour indiquer le niveau de métabolisme et/ou de libération neurochimique tout au long de la période d'essai. L'un des aspects les plus délicats de cette technique est le soin nécessaire lors de la manipulation du tube de microdialyse, les animaux ayant souvent tendance à le mâchonner ou à emmêler les lignes si l'on n'y prend pas garde.Ainsi, la première fois que j'ai utilisé la microdialyse hippocampique pendant des tests comportementaux remonte à mes travaux de thèse, et nous souhaitions vérifier si les modèles existants concernant l'apport

hippocampal-insulin-microinjection-vivo-microdialysis-during-spatial

Research

Recherche

JoVE Journal

Neuroscience

Neurosciences

Source : Provenzano, G., et al. Visualisation immunohistochimique de l’activité neuronale de l’hippocampe après apprentissage spatial dans un modèle murin de troubles neurodéveloppementaux. J. Vis. Exp. (2015)Cette vidéo fait une démonstration d’imagerie immunohistochimique pour visualiser l’activation neuronale de l’hippocampe. Des coupes cérébrales colorées révèlent des régions plus sombres au microscope à fond clair, indiquant des neurones activés.

Imagerie de l’activation neuronale de l’hippocampe dans des sections de cerveau de souris

Les microARN ont des rôles importants dans la structure et la fonction du cerveau. Nous décrivons ici une méthode pour appliquer miRNA hippocampe surexpression par injection stéréotaxique d'un lentivirus miRNA exprimant ingénierie. Cette approche peut servir comme un moyen relativement rapide pour évaluer...

Injection stéréotaxique de micro-ARN exprimant lentivirus à la souris hippocampe CA1 Région et l&#39;évaluation du résultat comportemental

L’objectif de ce protocole est d’étudier la cognition spatiale chez les rongeurs. Le labyrinthe aquatique double-H est un test novateur, qui est particulièrement utile pour élucider les différentes composantes de l’apprentissage, de la consolidation et de la mémoire, ainsi que l’interaction des systèmes de mémoire.

Le Double-H Maze: un test comportemental robuste pour l&#39;apprentissage et la mémoire chez les rongeurs

Nous décrivons un protocole d'immunohistochimie pour étudier le profil d'activation des neurones de l'hippocampe après exposition à une tâche spatiale d'apprentissage dans un modèle de souris caractérisé par des déficits cognitifs d'origine neurologique du développement. Ce protocole peut être appliqué sur les deux modèles génétiques souris ou pharmacologiques, caractérisée par des déficits cognitifs.

Visualisation immunohistochimique de l&#39;hippocampe Neuron Activité Après l&#39;apprentissage spatial dans un modèle de souris de troubles neurodéveloppementaux

Alors que l’imagerie multiphotonique n’est efficace qu’à des profondeurs limitées de la surface du tissu, il est possible d’obtenir une imagerie d’une résolution de 3 μm à n’importe quelle profondeur via pCLE. Nous présentons ici un protocole permettant de réaliser une imagerie pCLE pour mesurer la dynamique microvasculaire dans l’hippocampe de souris ictales et de souris de type sauvage.

Endomicroscopie confocale préclinique à balayage laser couplée à des fibres in vivo (pCLE) des capillaires de l’hippocampe chez des souris éveillées

Cette méthode décrit une préparation chronique qui permet un accès optique à l'hippocampe de souris vivantes. Cette préparation peut être utilisée pour effectuer l'imagerie optique longitudinale de la plasticité structurale neuronale et de la plasticité cellulaire suscitée par l'activité sur une période de plusieurs semaines.

Imagerie longitudinale à deux photons de l'hippocampe dorsal CA1 chez les souris vivantes

Cet article présente des procédures expérimentales pour évaluer des affaiblissements de mémoire dans les souris épileptiques pilocarpine-induites. Ce protocole peut être utilisé pour étudier les mécanismes pathophysiologic du déclin cognitif associé à l’épilepsie, qui est l’une des comorbidités les plus courantes dans l’épilepsie.

Évaluation de la fonction de mémoire chez les souris épileptiques induites par pilocarpine

Le protocole présenté ici fournit des informations sur l’électroencéphalographie (EEG) simultanée et l’évaluation comportementale en temps réel. Nous avons discuté de toutes les étapes impliquées dans ce protocole comme une solution attrayante pour les chercheurs dans de nombreux domaines des neurosciences, en particulier dans les domaines de l’apprentissage et de la mémoire.

Surveillance simultanée de l’électrophysiologie sans fil et du test comportemental de la mémoire comme outil pour étudier la neurogenèse de l’hippocampe

Cet article vise à décrire un protocole systématique pour obtenir des tranches horizontales de cerveau hippocampal chez la souris. L’objectif de cette méthodologie est de préserver l’intégrité des voies de fibre hippocampal, telles que le chemin perforant et le tractus de fibre moussée pour évaluer les processus neurologiques liés au gyrus dentate.

Tranches hippocampiques horizontales du cerveau de souris

Cet article démontre la préparation d’une fenêtre de formation image faite sur mesure complétée avec la canule d’infusion et son implantation sur la région CA1 du hippocampe chez les souris.

Procédure de craniotomie pour visualiser les activités neuronales dans l’hippocampe de souris se comportant

Cet article décrit une méthode d’observation chronique in vivo de la microglie au repos dans l’hippocampe de souris CA1 à l’aide d’une chirurgie contrôlée avec précision et d’une microscopie à deux photons.

In vivo Imagerie chronique à deux photons de la microglie dans l’hippocampe de souris

Apprenez la micro-injection intrahippocampique et la microdialyse in vivo pour mesurer le métabolisme cérébral pendant les tests comportementaux chez l'animal conscient. Cette méthode permet d'étudier les mécanismes neurochimiques de la mémoire spatiale.

La micro-injection d'insuline de l'hippocampe et

Explorer plus de vidéos