Name: La congélation des cellules ES humaines (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-10-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Apprenez à congeler les lignées cellulaires souches embryonnaires humaines HuES avec des cryoprotectants et une congélation contrôlée. Ce protocole préserve la viabilité et le potentiel de différenciation pour la recherche.

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<ol><li> Une culture saine expansion exponentielle est lavé avec du PBS pour éliminer les médias résiduels qui pourraient autrement arrêter la réaction trypsine. </li><li> Réchauffé 0,05% de trypsine-EDTA est ensuite ajouté pour couvrir les cellules, et la plaque à incuber pendant 5 minutes à température ambiante. Pendant ce temps, les cellules peuvent être observées arrondissement, et des colonies soulevant la surface de la plaque. </li><li> Douceur de pipetage répété va éliminer les cellules et les colonies de la surface de la plaque. </li><li> Cellules trypsinisées sont placés dans un tube conique contenant la norme pré-chauffé médias cellules hES pour étancher la trypsine restants, puis filé. </li><li> Les cellules sont remises en suspension des milieux de croissance à une concentration d&#39;environ un million de cellules dans un ml de médias. </li><li> Après les cellules sont remises en suspension de manière adéquate, les médias de la glace de congélation froide est ajoutée à volume égal. </li><li> Les suspensions cellulaires sont bien mélangés, aliquotés dans des flacons de gel, et a permis de lentement de froid-80C pendant 24 heures. </li><li> Cellules congelées peuvent ensuite passés à la phase vapeur d&#39;azote liquide pour le stockage à long terme, ou de rester à -80 pendant environ six mois. </li></ol><p> Remarque: une telle partie aliquote congelé à une concentration de 106 cellules / ml est suffisante pour ressusciter une culture sur une plaque de 10cm. </p>

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

<p> La technique que nous décrivons pour la congélation HUES lignées cellulaires fonctionne bien pour stocker efficacement et en ressuscitant des lignes HUES cellule et aussi toute cellule de mammifère d&#39;intérêt. Gel d&#39;une petite proportion de cellules à chaque passage est une considération importante quand on travaille avec des lignées de cellules hES, des anomalies du caryotype peuvent survenir et les cellules anormales peuvent rapidement prendre le relais de la ligne. Ainsi, après avoir congelé divise à chaque passage, en plus de gra...

<table><tbody><tr><td>Milieu HuES</td><td>milieu</td><td></td><td></td><td>Pour un volume total de 651,5 mL, ajouter : 500 mL de KO-DMEM + 6,5 mL de PenStrep + 6,5 mL de L-Glut + 6,5 mL de NEAA + 6,5 mL de bêta-mercapto&amp;#8211;éthanol 0,6 &amp;micro;L (solution mère à 14,3 M) + 65 mL de substitut de sérum + 65 mL de Plasmanate + 0,65 mL de bFGF2 (~10 ng/mL en concentration finale)</td></tr><tr><td>Milieu de congélation</td><td>milieu</td><td></td><td></td><td>80 % de FCS (sérum de veau fœtal) + 20 % de DMSO (diméthylsulfoxyde). À conserver à 4 &amp;deg;C.</td></tr></tbody></table>

la congélation des cellules es humaines

Freezing Human ES Cells

<p class="jove_content">Ici, nous montrons comment notre laboratoire gèle HUES humaine lignes de cellules souches embryonnaires. Une culture saine expansion exponentielle est lavé avec du PBS pour éliminer les médias résiduels qui pourraient autrement arrêter la réaction trypsine. Réchauffé 0,05% de trypsine-EDTA est ensuite ajouté pour couvrir les cellules, et la plaque à incuber pendant 5 minutes à température ambiante. Pendant ce temps, les cellules peuvent être observées arrondissement, et des colonies soulevant la surface de la plaque. Douceur de pipetage répété va éliminer les cellules et les colonies de la surface de la plaque. Cellules trypsinisées sont placés dans un tube conique contenant la norme pré-chauffé médias cellules hES pour étancher la trypsine restants, puis filé. Les cellules sont remises en suspension des milieux de croissance à une concentration d&#39;environ un million de cellules dans un ml de médias, une concentration telle que une aliquote congelé est suffisante pour ressusciter une culture sur une plaque de 10cm. Après les cellules sont remises en suspension de manière adéquate, les médias de glace glacial est ajouté à volume égal. Les suspensions cellulaires sont bien mélangés, aliquotés dans des flacons de gel, et a permis de lentement de froid-80C pendant 24 heures. Cellules congelées peuvent ensuite passés à la phase vapeur d&#39;azote liquide pour le stockage à long terme, ou de rester à -80 pendant environ six mois.</p>

<p class="jove_content">Ici, nous montrons comment notre laboratoire gèle HUES humaine lignes de cellules souches embryonnaires.</p>

La congélation des cellules ES humaines

Nous démontrons ici comment notre laboratoire congèle des lignées de cellules souches embryonnaires humaines HuES. Une culture saine, en phase de croissance exponentielle, est lavée avec du PBS pour éliminer...

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Ici, nous montrons comment notre laboratoire commence une HUES souches embryonnaires humaines de culture de cellules en ligne à partir d'un stock congelé.

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La différenciation de l'ESC coïncide avec un type de cellule des changements spécifiques dans la structure et la composition de la chromatine. La détection de ces changements fournit de précieuses indications sur les mécanismes qui définissent stemcellness et la différenciation cellulaire. Immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) représente une méthode utile pour disséquer les mécanismes moléculaires qui sous-tendent la différenciation des cellules souches.

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Expansion des cellules épithéliales humaines oesophagiennes pédiatriques en utilisant la reprogrammation conditionnelle fournit aux enquêteurs avec une population spécifique au patient des cellules qui peuvent être utilisées pour l'ingénierie des constructions oesophagiennes pour l'implantation autologue pour traiter des défauts ou des blessures et servir de réservoir pour des essais de criblage thérapeutique.

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Apprenez à congeler les lignées cellulaires souches embryonnaires humaines HuES avec des cryoprotectants et une congélation contrôlée. Ce protocole préserve la viabilité et le potentiel de différenciation pour la recherche.

La congélation des cellules ES humaines

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