Name: Contrôlé blessures de lacération du col chez la souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 28 s
Description: Apprenez à créer des lésions lacerées contrôlées de la moelle épinière cervicale chez la souris. Cette méthode utilise un stabilisateur spinal et une lame oscillante pour une précision élevée. Elle améliore la reproductibilité des modèles de blessure médullaire.

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Le développement de ce dispositif a été soutenue par le LISA Co., Louisville, Kentucky. Nous reconnaissons aussi le soutien continu de Norton Healthcare, Louisville, KY à CBS, et NIH NS050243, NS052290 et NS059622 à XMX.

1. Préparation des animaux et l&#39;application de la stabilisation de la colonne vertébrale Le rachis cervical de la souris est concave ventralement comme on le voit dans la vue latérale. Les apophyses épineuses de C3 à T1 sont petites et friable et, par conséquent, ne sont pas appropriés pour la stabilisation vertébrale communément décrite 3,4. Nous recommandons que la stabilisation de la colonne vertébrale être réalisée par fixation de la facette latérale. Le dispositif de fixation est constitué d&#39;un profilé métallique en forme de U pour soutenir la souris et deux bras réglables en acier inoxydable que pour serrer chaque facette latéralement. Cela offre une excellente immobilisation de la vertèbre cible. Après fixation de colonne vertébrale, la colonne vertébrale est légèrement surélevé pour aplatir la courbure de la colonne vertébrale cervicale pour fournir une meilleure exposition de la moelle épinière. <ol><li> Stériliser les instruments chirurgicaux suivants: 2-3 paires de pinces, 2 paires de microciseaux, un porte-aiguille 30 G, suture et une aiguille, pince la peau, et l&#39;applicateur de clips. Désinfecter la stabilisation de la colonne vertébrale. Anesthetize la souris en utilisant un cocktail intrapéritonéale de kétamine / xylazine (100 mg / 10 mg / kg). Raser les poils du cou de la souris. </li><li> Après nettoyage de la peau avec une solution de polyvidone iodée et d&#39;alcool à 70%, de déplacer la souris sur la table d&#39;opération réchauffé avec un coussin chauffant. Couvrir les yeux de l&#39;animal avec une pommade ophtalmique pour éviter dessèchement de la cornée. </li><li> Après l&#39;induction de l&#39;anesthésie (atteint lorsque la souris ne répond pas à un pincement de la queue), faire une incision de la peau de la ligne médiane cervicale postérieure de l&#39;occiput à la graisse sous-cutanée-pad du rachis cervical inférieur. Au microscope, effectuer une incision médiane entre les trapèzes en C2 et diviser les muscles de capitis de semispinalis. Identification du coussinet adipeux sous-musculaire facilite la dissection dans la couche correct. </li><li> Prolonger la dissection du muscle ligne médiane caudale à l&#39;apophyse épineuse T2 qui sert de point de repère fiable. Couper les muscles attachés à la vertèbre T2 et enlever la partie cartilagineuse du T2apophyse épineuse. </li><li> Disséquer les muscles spinaux de la C2 par les lames T2 en utilisant une paire de micro-ciseaux. dissection musculaire commence adjacent aux apophyses épineuses et s&#39;étend de manière bilatérale aux facettes articulaires. Séparez les muscles adjacents à des apophyses épineuses et des lamelles (dans la couche périostée) afin de minimiser les saignements. Après les facettes latérales sont exposés, placez la souris sur le canal en forme de U de la scène LISA. </li><li> Fixez les bras en acier inoxydable sous les aspects exposés bilatérale. Une fois que les armes sont en place, serrez les vis de serrage des bras d&#39;acier pour immobiliser la colonne vertébrale. Cela maintient fixation ferme de la vertèbre cible et offre une excellente exposition. Les bras peuvent être ajustés pour fournir une orientation horizontale précise de la colonne vertébrale. </li><li> Inciser le ligament jaune entre C5 et C6 pour exposer sous-jacente dura. Entre l&#39;espace interlaminaire, utilisez une aiguille de calibre 30 pour créer une petite durotomie à travers lequel microciseaux sont placés àétendre le durotomie. La moelle épinière est maintenant prêt à subir la lésion de lacération contrôlée. </li></ol> 2. Cervicale lacération de la moelle épinière en utilisant le dispositif LISA <ol><li> La largeur de l&#39;élargissement de la moelle épinière cervicale varie à différents niveaux. Faire une lésion hemisection dorsale en C5-6 à l&#39;aide d&#39;une lame plate de 2,3 mm et régler l&#39;amplitude de vibration pour couvrir toute la largeur de la moelle épinière. Les lames sont obtenues à partir Beaux Sciences Tools Inc. (Foster City, CA) et modifiées pour lacération de la moelle épinière. Maintenir l&#39;amplitude de l&#39;oscillation de la lame à ≥ 0,5 mm, en tant que niveaux d&#39;amplitude plus faibles diminuent la facilité de la déchirure du cordon. </li><li> Positionnez le stabilisateur de la colonne vertébrale et de la souris sur la scène LISA. La lame est fixée à la LISA à sa position commandée par les micro-moteurs capables de trois gammes de mouvement. Composantes de la LISA et leurs fonctions sont décrites dans la figure 1. </li><li> Mettez le commutateur lame vibrante sur. Sous magnification, déplacer la souris pour que la moelle épinière exposée est positionnée directement en dessous de la lame vibrante. </li><li> Surélever la scène soutenant la souris vers la lame oscillante. La position «0» est enregistré lorsque la lame touche à peine la veine dorsale de la moelle épinière. Mesurer la profondeur de la lacération de la moelle épinière par rapport à la position &quot;0&quot;. </li><li> Élever la position de la scène par le contrôle micro-conducteur: un tour de 360 ​​° du bouton micro-conducteur élève le stade de 0,25 mm. Ainsi, une lésion dorsale mm de hemisection 0,75 est créé en tournant le bouton de micro-driver 3 fois. La précision de la lésion est de ± 0,01 mm. Comme la lame commence à lacérer la moelle épinière, lubrifier le champ opératoire avec irrigation saline. La profondeur de coupe de la moelle épinière est commandé par le micro-conducteur vertical et est indépendante de l&#39;orientation visuelle. </li><li> Une fois la profondeur prédéterminée a été atteinte, tournez le commutateur de vibration off. Idéalement, la lame oscillante est positionné dans la lécart de Esion sans preuve de la déformation des tissus. Abaisser le stade de la lame de coupe et retirer le sang et la solution saline du champ opératoire en utilisant du coton Q-tips. Hémostase se produit spontanément chez &lt;1 min. </li><li> Relâchez la souris du stabilisateur de la colonne vertébrale. Rapprocher les muscles spinaux utilisant 6-0 suture de soie et fermer la plaie de la peau avec Michel clips en acier inoxydable. </li></ol> 3. Animal Care <ol><li> Sous-cutanée injecter un total de 1-2 ml de solution saline pour maintenir une hydratation adéquate et placer la souris dans la cage de récupération sur un coussin chauffant tout en reprenant conscience. </li><li> Fournir de l&#39;eau et ad lib doux de nourriture et d&#39;administrer des analgésiques pendant 48 heures après l&#39;intervention. Il n&#39;est pas nécessaire pour les soins de la vessie après hemisection dorsale de la moelle épinière. </li></ol>

<ol><li>Blackmore, M., Letourneau, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+within+maturing+neurons+limit+axonal+regeneration+in+the+developing+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Changes within maturing neurons limit axonal regeneration in the developing spinal cord.</a> J. Neurobiol. 66 (4), 348(2006).</li>
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<li>Zhang, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dural+closure%2C+cord+approximation%2C+and+clot+removal%3A+enhancement+of+tissue+sparing+in+a+novel+laceration+spinal+cord+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Dural closure, cord approximation, and clot removal: enhancement of tissue sparing in a novel laceration spinal cord injury model.</a> J. Neurosurg. 100, 343(2004).</li>
</ol>

<ol><li> Plusieurs auteurs (YPZ, XMX, CBS) ont un intérêt financier dans le Louisville Impactor System, Inc. </li><li> Les auteurs, Yi Zhang Ping, Lisa servir de boucliers, et Christopher B. Shields, sont des employés de Norton Healthcare, Louisville, KY. D&#39;autres auteurs sont employés par l&#39;Université de l&#39;Indiana, Indianapolis, IN. </li><li> Les auteurs n&#39;ont pas reçu de financement de toute entreprise qui produit les réactifs ou les instruments utilisés dans cet article. </li></ol>

Stabilisation vertébrale avant des lacérations à la moelle épinière a été obtenue par la fixation des apophyses épineuses. Tant la courbure cervicale de la colonne vertébrale lordose et la fixation des brides pour les courtes apophyses épineuses cervicales friables de C3 à T1 chez la souris empêcher la stabilisation de la colonne vertébrale efficace. En outre, l&#39;utilisation d&#39;une lame de rasoir ou microciseaux utilisé sous contrôle manuel provoque une déformation importante des tissus qui crée la variabilité de la profondeur de la lésion 6. Cela peut conduire à une mauvaise interprétation des données, en particulier lorsque la régénération axonale des voies spécifiques est étudiée. Par exemple, épargnés axones cortico dorsales peuvent être mal interprétés comme des axones régénérés si le tractus cortico-spinal dorsal n&#39;a pas été complètement sectionné au moment de lesioning. Ces défis peuvent être surmontés en utilisant un dispositif de stabilisation de la colonne vertébrale avec fixation à facettes à un seul niveau et lesioning précise de la moelle épinière. En outre, en utilisant ahaute lame oscillante de fréquence produit une déchirure nette sans écraser ou contusing la moelle épinière adjacent. Cette méthode a été utilisée pour produire de lésions à la moelle lacération de la moelle chez le rat 9,12,14, avec modifications ultérieures de produire thoraciques lacérations de la moelle épinière chez les souris 6. Dans la présente communication, nous décrivons la méthode de créer des lésions de lacération cervicale fiables chez la souris. Dans la mesure où le diamètre antéro-postérieure de la moelle épinière est &lt;2 mm chez la souris, des profondeurs précises de la lésion de lacération sont essentiels dans la création d&#39;un modèle expérimental fiable. Variabilité minimale dans la profondeur lésion va modifier considérablement les résultats d&#39;expériences évaluant la régénération des axones ainsi que des études volumétriques et comportementaux. La précision de la profondeur des lésions à l&#39;aide de cette méthode est de ± 0,01 mm parce que nous avions l&#39;habitude de précision micro-conducteurs haute pour contrôler la position de la lame de coupe. Cette méthode a permis de réduire l&#39;incohérenceHerent dans d&#39;autres modèles de la création d&#39;une lacération SCI. Cette méthode est particulièrement utile pour étudier la régénération axonale de la longue moelle épinière voies de situé dans la partie dorsale de la moelle épinière, comme le faisceau cortico-spinal, les voies rubrospinal, et l&#39;ascendant voies dorsale. Avec cette méthode, ces faisceaux de fibres peuvent être complètement sectionné et fiable. À cet égard, les erreurs d&#39;interprétation des données sont réduits au minimum, ce qui améliore la fiabilité des rapports d&#39;études expérimentales sur SCI. En résumé, nous avons décrit une nouvelle technique pour créer un reproductible modèle in vivo de lésions cervicales de lacération de la moelle épinière chez la souris. Cette technique est basée sur la stabilisation de la colonne vertébrale par la fixation des facettes cervicales et lacération de la moelle épinière à l&#39;aide d&#39;une lame oscillante. L&#39;utilisation de cette méthode dans la moelle modèle de lacération de la moelle thoracique dorsal chez la souris 6, nous avons démontré une corrélation étroite entre la profondeur de lacération, histologie, etrécupération de comportement. Cette technique a également été jugée fiable par plusieurs autres laboratoires 2,12.

La disponibilité des souris génétiquement modifiées est un outil puissant pour identifier les effets des gènes spécifiques qui jouent un rôle dans les mécanismes de la SCI. Lacération SCI est un modèle important utilisé pour examiner des agents ou des molécules thérapeutiques qui peuvent fournir un traitement efficace suite à cette blessure 8. Fixation des apophyses épineuses lors de la création de la blessure de lacération chez la souris est imprécis en raison de la difficulté à saisir les apophyses épineuses minces et fragiles impliqués dans le maintien de fixation rachidienne 5,11. La variabilité de la profondeur de la lacération de seulement 0,2 mm (10% du diamètre de la moelle épinière de souris) provoque l&#39;interprétation erronée de données. La nature et l&#39;étendue de la moelle épinière lacération lésion doivent être précisément définies 10. Pour relever ce défi, nous avons développé une nouvelle technique consistant en la stabilisation vertébrale et utilisé des lames fabriquées attachés à la blessure appareil de système Louisville (LISA) pour produire une lacération SCI 7,14. Cette lésion a été créée en utilisant une lame oscillante pointu qui évite la déformation des tissus au cours du processus de lacération. La profondeur de la déchirure était précis avec une précision de 0,01 mm à l&#39;aide de micro-moteurs qui contrôlent la profondeur de lacération. Lames sont fabriquées sur mesure aux formes et largeurs spécifiques pour créer la lacération souhaité contour 9. Nous démontrons 1) la méthode de l&#39;exposition du rachis cervical, 2) la technique de stabilisation vertébrale à l&#39;aide d&#39;un dispositif de fixation bilatérale des facettes, et 3) la création d&#39;une blessure à la déchirure cervicale à l&#39;aide d&#39;une lame vibrante.

<table><tbody><tr><td>Stabilisateur vertébral </td><td>de souris Louisville Impactor System</td><td></td><td>Stabiliser et exposer la vertèbre cervicale</td></tr><tr><td>LISA vibraknife </td><td>Louisville Impactor System</td><td></td><td>Produire la lésion de lacération de la moelle épinière cervicale</td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>15013-12</td><td>Incision cutanée et trapèze</td></tr><tr><td>Spring Scissors</td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>15023-10</td><td>Séparer les muscles des lames</td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort</td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>15002-08</td><td>Incision de la dure-mère</td></tr><tr><td>Pince Graefe </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>11154-10</td><td></td></tr><tr><td>Pince Dumont #7 Fine </td><td>Science Tools (USA)</td><td>11274-20</td><td>Rétraction musculaire (pointe modifiée)(Fig. A)</td></tr><tr><td>Pince Dumont SS </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>11203-25</td><td>Fixation d’une vertèbre (pointe modifiée (Fig.B)</td></tr><tr><td>Aiguille 30G </td><td>Becton Dickenson</td><td>305106</td><td>Créer une ouverture durale </td></tr><tr><td>6-0 suture </td><td>Ethicon</td><td>8806H</td><td>Fermer les couches musculaires et fasciales </td></tr><tr>clip de <td>plaie </td><td>Fine Science Tools (USA)</td><td>12031-07</td><td>Fermeture de la peau</td></tr><tr><td>Tribrom&#8211 ; thanol (Avertin)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>90710-10G</td><td>Agent anesthésique</td></tr><tr><td colspan="4">Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, E-mail : <a href="mailto:cbshields1@gmail.com">cbshields1@gmail.com</a> Fine Science Tools (États-Unis), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139, (800) 521-2109, E-mail : <a href="mailto:info@finescience.com">info@finescience.com</a> Becton Dickenson, 1 Becton Drive, Franklin Lakes, NJ USA 07417, (201) 847-6800 Ethicon, Route 22 West, Somerville, NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. St. Louis, MO, États-Unis, 63178 (314) 771-5765, E-mail : cssorders@sial.com</td></tr><tr><td colspan="4">Figure A est la pince Dumont #7 modifiée ; B est la pince Dumont SS modifiée.</td></tr></tbody></table>

contrôlé blessures de lacération du col chez la souris

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

Utilisation des souris génétiquement modifiées améliore notre compréhension des mécanismes moléculaires qui sous-tendent plusieurs troubles neurologiques tels qu&#39;une blessure de la moelle épinière (SCI). commande manuelle de Freehand utilisé pour produire un modèle de lacération de la SCI crée blessures incompatibles souvent associés à une composante d&#39;écrasement ou de contusion et, par conséquent, une nouvelle technique a été développée. Notre modèle de col de l&#39;utérus lacération SCI a décidé difficultés inhérentes à la méthode à main levée en incorporant 1) stabilisation vertébrale cervicale par la fixation de la facette vertébrale, 2) le renforcement de l&#39;exposition de la moelle épinière, et 3) la création d&#39;une lacération reproductible de la moelle épinière à l&#39;aide d&#39;une lame oscillante avec une précision de ± 0,01 mm de profondeur sans contusion associée. Par rapport aux méthodes classiques de création d&#39;une lacération SCI comme l&#39;utilisation à main levée d&#39;un scalpel ou des ciseaux, notre méthode a produit une lésion constante. Cette méthode est utile pour les études sur la régénération axonale des corticospinal, rubrospinal, et les voies ascendantes dorsales.

Immobilisation de la vertèbre cible est d&#39;une grande importance dans la génération de lésions précises de la moelle épinière de souris. Notre dispositif de stabilisation de la colonne vertébrale surmonte les problèmes anatomiques des apophyses épineuses courts et lordose ventrale du rachis cervical de la souris. Les vertèbres cervicales sont bien exposées avec notre stabilisateur de la colonne cervicale (figure 2). Notre colonne vertébrale de souris dispositif de stabilisation est une technique fiable pour préparer la colonne vertébrale des procédures de la moelle épinière cervicale. La profondeur de la lésion en utilisant le LISA est précis à 0,01 mm 6,13. La lacération précis ne provoque aucune contusion à l&#39;interface de la lésion / de tissu (figure 3). La précision des lésions dorsales Hémisection a été démontrée chez la souris C57BL / 6 dans une étude sur la régénération axonale dans lequel un 0,9 mm de profondeur lacération étendu juste au-delà du canal central dans chaque spécimen confirmé par les articles pathologiques de la moelle épinière 1. Locomotion de tous ces animaux récupérered suite de cette blessure à la lacération de la moelle épinière. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig1.jpg" /> Figure 1. (A) la souris dans la stabilisation de la colonne vertébrale placé sur la scène LISA. La lame vibrante est dirigée vers la moelle épinière d&#39;être déchiré. Contrôles Micro-pilotes sont situés sous la scène et sont conçus pour placer la souris dans le site approprié. Le micro-conducteur vertical de contrôler l&#39;intensité des lésions, et le bouton de commande de basculement du plan horizontal de la moelle épinière d&#39;empêcher l&#39;angulation de la lacération. L&#39;interrupteur commande le moteur de vibration, et un autre bouton permet de régler son amplitude. (B) A mm dorsale hemisection lacération lésion 0,75 coupée sous arches laminaires intactes. <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig2.jpg" /> Figure 2. </strong&gt; (A) de stabilisation de la colonne vertébrale de la souris comprenant un canal en forme de U et deux bras et les connecteurs. La souris est placée dans le creux C utilisée pour col de l&#39;utérus SCI et dans l&#39;auge pour T thoracique SCI. (B) Le rachis cervical est une fixation en plaçant les bras sous les facettes latérales, puis le blocage des vis de serrage. La dure est exposée entre les lames de C5-C6, C6-7, et C7-T1 sans enlèvement de l&#39;os. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/50030/50030fig3.jpg" /> Figure 3. Quatre dorsale des lacérations de la moelle épinière à des profondeurs de 0,5, 0,8, 1,1 et 1,4 mm observés dans la vue sagittale (crésyl-violet et l&#39;éosine) représentant le degré élevé de précision, en utilisant cette technique.

Une nouvelle technique pour créer un reproductible<em&gt; In vivo</em&gt; Modèle de lésion du col de lacération de la moelle épinière chez la souris est décrite. Cette technique est basée sur la stabilisation de la colonne vertébrale par la fixation des facettes cervicales et lacération de la moelle épinière à l&#39;aide d&#39;une lame oscillante avec une précision de ± 0,01 mm.

Contrôlé blessures de lacération du col chez la souris

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

L'objectif général de l'expérience est de produire une lésion par lacération reproductible de la moelle épinière de la souris. Cela est réalisé en exposant postérieurement la lame cervicale lorsque l'animal est positionné dans l'appareil du système de blessure de Louisville. Dans une deuxième étape, un dispositif de stabilisation spécialement conçu est utilisé pour fixer la vertèbre cible de la colonne vertébrale de la souris.Ensuite, la moelle épinière cible entre les arcs laminaire est identifiée après retrait du ligamentum flavum en fin d'intervention. La section hémilatérale dorsale cervicale est réalisée précisément à une profondeur de 0,75 millimètre à l’aide d’une lame oscillante et d’un micro-driver. Le principal avantage de la technique que nous avons mise au point en laboratoire réside dans la création d’une méthode très précise pour induire une lésion médullaire par lacération.Ceci est important car les techniques utilisées jusqu'à présent, à savoir les ciseaux ou le scalpel, ont entraîné des problèmes liés à des méthodes incomplètes et inexactes de lésion de la moelle épinière. Nous disposons désormais de méthodes permettant d'éviter la contusion de la moelle épinière, le déplacement de la moelle épinière par rapport au dispositif lacérant, ainsi que l'hémorragie excessive qui survient lors d'une lésion médullaire. Grâce à cette technique, nous sommes en mesure de mettre en œuvre une méthode très précise qui évite l'estimation visuelle de la profondeur de la lésion de la moelle épinière.En utilisant cette technique, nous pensons pouvoir révolutionner les méthodes expérimentales de lésion de la moelle épinière utilisées dans le modèle de lacération, ce qui pourrait être fondamental pour la régénération des axones, ainsi que pour la découverte d'un traitement contre les lésions médullaires. Cette procédure est démontrée par Jang Eing, neurochirurgien et chercheur en neurochirurgie dans notre laboratoire. Commencez cette procédure en stérilisant les instruments chirurgicaux suivants : deux à trois paires de pinces, trois paires de ciseaux microchirurgicaux, une aiguille de calibre 30, un fil chirurgical micro URS, un porte-aiguille, des agrafes cutanées et un applicateur d'agrafes. Désinfectez ensuite le stabilisateur de la colonne vertébrale, puis anesthésiez la souris à l'aide d'un cocktail de kétamine, de xylazine ou de triéthanol administré par voie intrapéritonéale.Ensuite, rasez les poils du cou de la souris. Nettoyez la peau avec une solution de povidone iodée et de l’alcool à 70 %. Puis transférez la souris sur la table d’opération équipée d’un tapis chauffant préchauffé.Appliquer un onguent ophtalmique sur les yeux pour prévenir le dessèchement cornéen. Après l'induction de l'anesthésie, pratiquer une incision cutanée médiane postérieure au niveau cervical, de l'occiput jusqu'au bourrelet graisseux sous-cutané de la région cervicale inférieure. Sous microscope, réaliser une incision cutanée médiane entre les muscles trapèzes au niveau de C2 et rétracter latéralement les muscles semi-épineux de la tête.Ensuite, étendez soigneusement la dissection du muscle médian jusqu'au processus épineux de T2, qui sert de repère fiable. Séparez les muscles du processus épineux de T2. Puis retirez la portion cartilagineuse du processus épineux de T2.Ensuite, disséquer bilatéralement les muscles paravertébraux des arcs laminaireux de C4 à T2 à l’aide d’une paire de ciseaux microchirurgicaux. L’incision débute adjacente aux apophyses épineuses et s’étend sur les deux arcs laminaireux jusqu’aux articulations facettes. Une fois les facettes latérales exposées, placer la souris sur le canal en forme de U du stabilisateur rachidien pour souris.Ensuite, placer les bras en acier inoxydable du stabilisateur de souris sous les lamines exposées, de manière bilatérale. Une fois les bras en place, serrer les vis de serrage à main pour immobiliser la colonne vertébrale sous le microscope. Retirer le ligamentum flavum situé entre les arcs laminaireux de C5 et C6 afin d'exposer la dure-mère sous-jacente dans l'espace interlaminaire.Utilisez une aiguille de calibre 30 pour créer une petite durotomie et des microciseaux pour élargir la durotomie. La moelle épinière est désormais prête à subir une lésion par lacération contrôlée. Dans cette procédure, placez le stabilisateur rachidien et la souris sur le plateau de l'appareil du système de lésion de Louisville, auquel une lame est fixée, sa position étant contrôlée par des micromoteurs.Capable de trois degrés de liberté pour réaliser une lésion de section hémilaminaire dorsale entre les lamines C5 et C6 à l’aide d’une lame plate de 2,3 millimètres fixée à l’oscillateur. Régler l’amplitude de la lame oscillante à 0,5 millimètre, car des amplitudes inférieures pourraient réduire la facilité de la section complète de la moelle épinière. Ensuite, activer l’interrupteur du vibreur de lame sous le microscope et positionner la moelle épinière de la souris directement sous la lame vibrante.Ensuite, élevez la platine vers la lame oscillante à l’aide du registre de commande du microdriver. La position zéro correspond au moment où la lame touche à peine la veine dorsale de la moelle épinière ; la profondeur de la lésion médullaire est mesurée par rapport à cette position zéro. Puis, augmentez la position de la platine à l’aide de la commande du microdriver.Un tour complet (360 degrés) du bouton du micromoteur élève le plateau de 0,25 millimètre. Ainsi, une lésion hémisécionnelle dorsale de 0,75 millimètre est réalisée en tournant trois fois le bouton du micromoteur tandis que la lame commence à lacérer la moelle épinière ; lubrifiez le champ chirurgical par une irrigation saline. Une fois la profondeur prédéterminée atteinte, éteignez l’interrupteur du vibreur, puis abaissez le plateau supportant la souris ainsi que la pince par rapport à la lame de coupe.Retirer le sang en irriguant avec du sérum physiologique sur le site chirurgical. Ensuite, sécher la zone avec des cotons-tiges, car l'hémostase se produit généralement en moins d'une minute. À la fin, retirer la souris du stabilisateur rachidien et fermer la peau avec de l'acier inoxydable.Des clips Michelle. La colonne vertébrale cervicale est fixée en plaçant les bras sous les facettes latérales, puis en verrouillant les vis à pouce comme illustré sur cette figure ; la dure-mère est exposée entre les lames de C5 à C6, de C6 à C7 et de C7 à T1, sans aucun retrait osseux. Voici les vues sagittales de quatre lacérations de la moelle épinière dorsale réalisées à des profondeurs de 0,5, 0,8, 1,1 et 1,4 millimètre.Ils indiquent le haut degré de précision offert par cette technique. L'un des problèmes inhérents à la création de lésions de la moelle épinière a été l'absence de stabilisation de la colonne vertébrale cervicale. Grâce au stabilisateur rachidien mis au point par notre équipe, nous sommes désormais en mesure de créer une immobilité absolue de la colonne vertébrale cervicale.Cela permettra d'améliorer l'étude de la lésion médullaire à l'aide de la contusion médullaire, des injections dans la moelle épinière, ainsi que de la transplantation cellulaire dans la moelle épinière, pour toutes les méthodes de recherche sur la moelle épinière.

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Un modèle préclinique d’impact cortical contrôlé pour l’hémorragie traumatique, la contusion et la neuroinflammation

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